甜菜M14品系花期特異表達基因cDNA文庫的構建及篩選.pdf

1、本實驗室的郭德棟教授通過遠緣雜交方法獲得了甜菜無融合生殖單體附加系M14品系(VV+1C，2n=18+1)，以下簡稱甜菜M14品系。它的染色體組成是栽培甜菜(Beta vulgaris L．，VV，2n=18)染色體組附加了白花甜菜(Beta corollifloraZoss，CCCC，2n=36)的第9號染色體。經(jīng)過連續(xù)四年的胚胎學鑒定和細胞遺傳學統(tǒng)計，這條附加的染色體平均傳遞率為96.5％。甜菜M14品系是極其難得的克隆無融合生殖基

2、因的材料。 本實驗室已經(jīng)在甜菜M14品系無融合生殖發(fā)育表現(xiàn)出的三個特殊的關鍵時期獲得了甜菜M14品系特異表達基因的3個抑制消減EST庫和1個差異顯示EST庫。在此工作基礎之上，本實驗利用與EST庫取樣時期一致的總RNA構建了甜菜M14品系花期特異表達基因的3個ZAP表達載體cDNA文庫。對庫容量進行檢測，結果顯示每個初始文庫滴度均達到1.25×10<'6> pfu/mL以上，插入片段長度主要集中在400～3000bp，達到覆蓋遺

3、傳信息的標準。從抑制消減EST庫中隨機挑選了3個EST作為探針，對與之同一時期的cDNA文庫Ⅰ進行篩選，得到了3個陽性單克隆，以噬菌體形式保存并已進行了測序。篩選獲得的cDNA片段分別命名為Me-c84(797bp)、Me-c86(1 182bp)和Me-c264(測序中)。利用RACE技術對Me-c862生行了5′末端擴增，將1％瓊脂糖凝膠上檢測的特異性條帶進行回收測序。通過核酸序列分析軟件拼接Me-c86及其5′末端序列獲得全長cD