2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、甜菜M14品系為郭德棟等人通過栽培甜菜(Beta vulgaris L.)和野生種白花甜菜(Beta corolliflora Zoss.)種間雜交及回交,獲得的帶有白花甜菜染色體的單體附加系(VV+IC,2n=19),附加染色體的傳遞率高達(dá)96.5%。甜菜M14品系是以二倍體孢子無融合生殖為主要繁殖方式,有性生殖為次要繁殖方式的兼性無融合生殖體。這種具有無融合生殖特性的甜菜M14品系的獲得,為我們提供了一種良好的尋找無融合生殖相關(guān)基因

2、的材料。 本實(shí)驗(yàn)室前期采用抑制消減雜交技術(shù)(suppression subtractive hybridization,SSH)和mRNA差異顯示技術(shù)(differential-display reverse transcription-PCR.DDRT-PCR)獲得了298個(gè)甜菜M14品系特異表達(dá)的ESTs(expression sequencetags,ESTs),并挑選其中有研究價(jià)值的EST作為獲得全長的侯選EST,通過

3、快速擴(kuò)增cDNA末端法(rapid amplification of cDNA ends,RACE)獲得了甜菜M14品系特異表達(dá)的M14-341基因的cDNA全長。經(jīng)生物信息學(xué)分析,M14-341基因編碼的蛋白包括MADS-box結(jié)構(gòu)域和K-結(jié)構(gòu)域,并與菠菜(spinacia oleracea)開花轉(zhuǎn)錄因子有88%的相似性,可以判定M14-341基因?qū)儆贛ADS-box基因。 為進(jìn)一步研究M14-341基因的功能以及M14-3

4、41基因與無融合生殖現(xiàn)象的關(guān)系,本實(shí)驗(yàn)首先利用DNAMAN軟件將M14-341蛋白與擬南芥(Arabidopsis thaliana)中部分MIKC族蛋白及其它物種的MADS-box蛋白進(jìn)行了同源比對,結(jié)果表明,M14-341蛋白與擬南芥中AG蛋白同源性達(dá)74%,可以將其歸為AG基因(MADS-box基因家族“ABCDE”模型中的C類基因)的同源基因,其功能為控制花器官的發(fā)育。隨后,構(gòu)建了帶有M14-341基因cDNA全長的植物表達(dá)載體

5、pBI-M14-341,分別利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法和花頭浸泡法將M14-341基因轉(zhuǎn)入模式植物煙草和擬南芥中,以分析轉(zhuǎn)基因植株的表型變化進(jìn)而推測M14-341基因的功能。經(jīng)過PCR檢測、RT-PCR、Southern印跡、Northern印跡及GUS染色等分子生物學(xué)檢測后,共獲得24株轉(zhuǎn)基因煙草和12株轉(zhuǎn)基因擬南芥,進(jìn)一步研究表明,M14-341基因在轉(zhuǎn)基因植株花器官中表達(dá)量較高,在葉和莖中表達(dá)量微弱。 對轉(zhuǎn)基因植株的表型觀測

6、發(fā)現(xiàn):M14-341基因在轉(zhuǎn)基因植株中的組成型表達(dá)主要影響了煙草的花期及花器官的發(fā)育,轉(zhuǎn)基因煙草出現(xiàn)花期延遲,花瓣顏色變淺,數(shù)量變少,花萼與花瓣轉(zhuǎn)變?yōu)樾廴铩⒋迫镱愃平Y(jié)構(gòu),雄蕊、雌蕊變長,果實(shí)與種子的少育或不育等現(xiàn)象:轉(zhuǎn)M14-341基因的擬南芥出現(xiàn)結(jié)實(shí)率降低,死亡率增高等變化。 對轉(zhuǎn)M14-341基岡煙草花器官與作為對照的未轉(zhuǎn)基因的野生型煙草花器官的總蛋白進(jìn)行雙向電泳,結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)M14-341基因煙草植株與野生型煙草對照植株

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