孕期MVAD通過RARα、Src和NR1信號通路影響仔鼠學(xué)習(xí)記憶功能機制的研究.pdf

1、目的：
　　探討從孕期開始的MVAD對仔鼠成年期學(xué)習(xí)記憶功能影響中，RARα對NR1的影響是否通過調(diào)節(jié)Src來實現(xiàn)，并探討RARα、Src和NR1三者之間的聯(lián)系。
　　方法：
　　構(gòu)建孕期VAN和MVAD大鼠模型（VAN組和MVAD組）；分離培養(yǎng)兩組新生鼠原代海馬神經(jīng)元，并利用細胞免疫熒光染色鑒定；利用real-time RCR和western blot檢測孕期MVAD和VAN組新生鼠海馬組織及原代海馬神經(jīng)元細胞RA誘

2、導(dǎo)前后RARα、SFKs和NR1的mRNA和蛋白表達量；利用細胞免疫熒光檢測RA誘導(dǎo)處理細胞前后三個指標的熒光表達量；體外利用RARα沉默和過表達以及空載腺病毒轉(zhuǎn)染VAN組和MVAD組神經(jīng)元細胞檢測三個指標的mRNA表達量；Src家族抑制劑PP2誘導(dǎo)處理神經(jīng)元后，western blot檢測三個指標蛋白表達量；利用免疫共沉淀檢測RARα與Src以及NR1是否有相互作用；利用鈣影像儀檢測對照及處理組細胞的鈣興奮性；利用Morris水迷宮實

3、驗檢測孕期MVAD和VAN組7周齡仔鼠空間學(xué)習(xí)記憶的能力。
　　結(jié)果：
　　①成功構(gòu)建了孕期MVAD和VAN孕鼠模型；
　　②免疫熒光染色顯示，分離培養(yǎng)的新生鼠原代海馬神經(jīng)元95％表達神經(jīng)元標志物神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）；
　?、墼衅贛VAD新生鼠海馬組織以及神經(jīng)元中RARα、SFKs和NR1的mRNA和蛋白表達量明顯低于VAN組（P＜0.05）；
　?、茉衅贛VAD組神經(jīng)元鈣興奮性明顯低于VAN組（

4、P＜0.05）；
　　⑤通過水迷宮實驗發(fā)現(xiàn)孕期MVAD組生后7W仔鼠其學(xué)習(xí)記憶功能明顯低于孕期VAN組仔鼠（P＜0.01）；
　?、摅w外予1μmol/L的RA處理神經(jīng)元細胞24h后，RARα、SFKs和NR1的mRNA和蛋白表達量明顯增加（P＜0.001），免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)樹突明顯增長且樹突中RARα表達明顯升高，并且RA處理后的神經(jīng)元細胞鈣興奮性明顯升高（P＜0.01）；
　　⑦體外予神經(jīng)元RARα沉默（Si-RAR

5、α）和過表達（Over-RARα）干預(yù)后，Src的mRNA表達變化同RARα一致，有相應(yīng)的降低和升高，且變化有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），NR1無顯著變化；
　　⑧體外給神經(jīng)元細胞予Src家族激酶抑制劑PP2處理，發(fā)現(xiàn)NR1的蛋白表達變化明顯降低，RARα蛋白無顯著變化；
　?、嵩衅贛VAD和VAN組生后2W齡仔鼠的海馬組織進行免疫共沉淀發(fā)現(xiàn)，RARα與Src有結(jié)合，說明兩者有相互作用，而RARα與NR1無相互作用；