HCN1-2通道亞型在慢性腦缺血所致認知障礙中的作用及藥物干預研究.pdf

1、本文從以下幾方面進行論述：
　　第一部分：大鼠慢性腦缺血不同時間點引起的空間學習記憶障礙與海馬CA1區(qū)HCN1/HCN2膜表達動態(tài)變化特征。
　　目的：慢性腦缺血（Chronic cerebral hypoperfusion，CCH）是臨床上常見的一種病理狀態(tài)，其引起認知損傷的機制特別是隨時間變化的機制目前還不清楚。本實驗旨在研究大鼠慢性腦缺血后其認知表現(xiàn)與海馬CA1區(qū)HCN1/HCN2之間的動態(tài)變化特征，為缺血后認知損傷的

2、干預提供一個新的作用靶點。
　　方法：大鼠雙側頸總動脈結扎（Two-vessel occlusion，2VO）建立慢性腦缺血模型。實驗分為假手術4W，8W及12W組，缺血4W，8W及12W組。各組大鼠的空間學習記憶功能用水迷宮（Morris water maze，MWM）實驗評價，電生理長時程增強（Long-term potentiation，LTP）闡明其突觸機制。NeuN，HCN1及HCN2的表達采用免疫組化和Western

3、bloting進行分析評價。
　　結果：慢性腦缺血能引起穩(wěn)定的空間學習記憶損傷，其損傷程度與缺血時間無明顯相關性。慢性腦缺血后神經(jīng)元丟失只出現(xiàn)在缺血4W，隨著缺血時間的延長（8W和12W）其神經(jīng)元的丟失得到恢復。在慢性腦缺血4W時，海馬CA1區(qū)HCN1的膜表達出現(xiàn)下調(diào)，HCN2的膜表達出現(xiàn)上調(diào)。但在缺血的延長期（8W和12W）只出現(xiàn)HCN2的膜表達上調(diào)。
　　結論：大鼠慢性腦缺血后海馬CA1區(qū)HCN1/HCN2的膜表達紊亂是

4、造成其空間學習記憶損傷的一個重要原因。并且在缺血的延長期（8W和12W）其空間學習記憶損傷主要由HCN2的膜表達上調(diào)所致。
　　第二部分：氟西汀通過下調(diào)海馬CA1區(qū)HCN2的膜表達從而改善大鼠慢性腦缺血引起的認知障礙。
　　目的：我們之前的研究發(fā)現(xiàn)在慢性腦缺血的延長期，海馬CA1區(qū)HCN2的膜表達上調(diào)是造成大鼠出現(xiàn)認知障礙的一個主要原因。所以本實驗旨在探討氟西汀干預后能否改善大鼠慢性腦缺血引起的認知障礙，以及其所涉及的機制是

5、否與 HCN2有關。
　　方法：2VO手術建立慢性腦缺血模型。實驗分為假手術組，缺血模型組，缺血+氟西汀給藥組。在造模后第2周開始給予氟西?。?0mg/kg,ig），持續(xù)給藥6周。在造模后第8周時各組大鼠的認知功能由水迷宮實驗和新事物認知（novel objects recognition，NOR）實驗評價。電生理LTP的記錄闡明其學習記憶的突觸機制。Western bloting評價大鼠海馬CA1區(qū)HCN2的蛋白水平。
　

6、　結果：氟西汀能顯著改善慢性腦缺血引起的認知障礙，并逆轉由缺血引起的海馬CA1區(qū)HCN2的膜表達上調(diào)。
　　結論：氟西汀能通過下調(diào)海馬CA1區(qū)HCN2的膜表達，從而改善慢性腦缺血所致的認知障礙。
　　第三部分：巴氯芬通過上調(diào)前額皮層HCN2的表達從而改善由慢性腦缺血引起的空間工作記憶損傷。
　　目的：慢性腦缺血能導致學習記憶損傷并通過多種生物學途徑增加血管性癡呆的患病風險。然而，慢性腦缺血能否導致前額皮層（prefro

7、ntal cortex，PFC）依賴性的空間工作記憶損傷以及GABAB受體激動劑巴氯芬能否改善這種損傷，目前還不清楚。因此，本研究旨在探討巴氯芬能否改善慢性腦缺血后的空間工作記憶障礙以及其涉及的機制。
　　方法：采用2VO手段建立慢性腦缺血模型。在缺血后兩周給予巴氯酚（25mg/kg，i.p.），持續(xù)給藥三周?？臻g工作記憶采用改進的水迷宮實驗，即一種延遲位置匹配（delayed matching-to-place, DMP）方法來

8、評價。Western bloting以及免疫熒光分別評價蛋白水平與蛋白定位。
　　結果：慢性腦缺血能導致顯著的空間工作記憶損傷，同時伴隨著PFC中HCN2的表達下調(diào)，但HCN1沒有發(fā)生變化。并且在慢性腦缺血后，PFC中神經(jīng)元特異性標記物蛋白基因產(chǎn)物9.5（protein gene product9.5，PGP9.5），星形膠質細胞（glial fibrillary acidic protein，GFAP），突觸素（synaptop

9、hysin，SYP），腦源性營養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor，BNNF），以及小清蛋白（parvalbumin，PV）陽性中間神經(jīng)元的表達也沒有發(fā)生改變。給予巴氯酚后能顯著改善由慢性腦缺血引起的空間工作記憶損傷，同時能逆轉HCN2表達的下調(diào)。此外，結果還顯示在PFC中HCN2與PV陽性中間神經(jīng)元存在共表達。
　　結論：慢性腦缺血能引起空間工作記憶損傷，給予巴氯酚后能通過逆轉PFC中HCN