參葉緩癡膠囊對改善大鼠慢性腦缺血所致認知功能障礙動物模型的作用機制研究.pdf

1、目的：通過采取雙血管結扎(2VO)改良法制造大鼠VCI動物模型，觀測參葉緩癡膠囊（SHC）對血管性認知功能障礙（VCI）大鼠動物模型在行為學、腦內神經介質含量及相關調節(jié)酶的變化情況的影響，探討SHC在改善VCI方面的作用機制，利用中醫(yī)藥的優(yōu)勢和特色不斷的豐富中醫(yī)藥防治認知功能障礙理論學說內涵，進一步深化中醫(yī)藥防治認知功能障礙的機理研究，為藥物開發(fā)提供新的思路和依據。
　　方法：將Wistar大鼠60只，體重在200-220g,雌雄

2、各占一半，將大鼠隨機分為六組，即假手術組(SOG)、模型組（MG）、吡拉西坦陽性對照組(PG)，參葉緩癡膠囊高劑量組（SHG）、參葉緩癡膠囊中劑量組(SMG)、參葉緩癡膠囊低劑量組(SLG)、假手術組(SOG)。每組10只。模型復制采用3％濃度戊巴比妥鈉（2ml/kg腹腔注射）將大鼠麻醉后，仰臥位固定，頸部正中切口，長約2cm，仔細剪毛并消毒，切開大鼠皮膚后，一層一層鈍性分離皮下組織及肌肉等，盡可能暴露雙側頸動脈，用手術線在頸總動脈兩頭

3、的近心端和遠心端分別打結?？p合皮膚，回籠飼養(yǎng)。假手術組動物操作同模型組，不結扎動脈血管。各組從造模型第2天開始經灌胃給藥，給藥劑量分別為：參葉緩癡膠囊高劑量組3g/kg、中劑量組1.5g/kg、低劑量組0.75g/ kg；陽性對照組吡拉西坦片0.6g/ kg、假手術組和模型組給同體積純凈水。連續(xù)給藥5周。給藥期結束后，進行行為學及腦組織等相關指標檢測。觀察指標：（1）采用Morris水迷宮法進行動物行為學測試，觀察動物逃避潛伏期和空間探

4、索行為。（2）ELISA法測定相關神經介質和酶：檢測腦組織中AChE、DA、NE、5-HT、SOD、MDA等變化情況。
　　結果：（1）逃避潛伏期時間：參葉緩癡膠囊對血管性認知功能障礙動物模型逃避潛伏期的影響。本研究采用Morris水迷宮法，以動物每天訓練時分別從四個象限尋找安全平臺所花費的時間的平均值作為當日的逃避潛伏期值，與對照組比較，模型組動物水迷宮逃避潛伏期明顯延長（P＜0.05）。與MG比較，SHG組動物在測試第4、5、

5、6天水迷宮逃避潛伏期縮短（P＜0.05），SMG組動物在第6天迷宮定位航行實驗中逃避潛伏期時間短于MG（P＜0.05），提示參葉緩癡膠囊對VCI模型動物逃避潛伏期行為有一定的改善作用。（2）Morris空間探索：參葉緩癡膠囊對VCI模型大鼠空間探索行為的影響，以大鼠在水中自由游泳2min內實時記錄大鼠運動軌跡，并計算大鼠經過平臺所在位置的次數、平臺停留時間、有效區(qū)停留時間、運行總路程，作為空間探索行為的觀測指標。結果顯示，MG動物水迷宮

6、空間探索航行測試2min內經過原平臺所放位置的次數顯著減少（P＜0.05），提示大鼠空間探索行為能力下降。與MG比較，PG和給藥組動物2min內穿過平臺次數顯著增加（P＜0.05）；MG動物水迷宮單位時間內經過平臺停留時間明顯減少（P＜0.05），提示其空間探索行為能力下降。與MG比較，PG和給藥組大鼠2min內經過原平臺停留時間明顯增長（P＜0.05）；MG動物水迷宮單位時間內有效區(qū)停留時間明顯減少（P＜0.05），提示其空間探索行為

7、能力下降。與MG比較，PG和給藥組動物2min內在有效區(qū)停留的時間明顯增加（P＜0.05），提示參葉緩癡膠囊對VCI模型動物有促進作用；MG動物水迷宮單位時間內運行總路程明顯減少（P＜0.05），提示其空間探索行為能力下降。與MG比較，PG和給藥組動物單位時間內運行總路程明顯增加（P＜0.05）。（3）參葉緩癡對VCI模型動物腦組織SOD和MDA含量的影響。結果表明，MG大鼠腦組織勻漿液含量測試SOD活力有所下降（P＜0.01），且MD

8、A含量升高（P＜0.05），機體在腦缺血時對清除超氧陰離子自由基的能力會下降。與MG比較，參葉緩癡膠囊給藥各組動物腦組織勻漿液中SOD活力升高，MDA含量下降，提示藥物可能通過增加組織的抗氧化能力對腦細胞起保護作用。對慢性腦缺血認知功能障礙模型動物腦組織單胺類神經介質含量的影響：多種神經介質通過突觸傳遞參與學習記憶過程的調節(jié)，其中包含的單胺類介質去甲腎上腺素（NE）、五羥色胺（5-HT）以及多巴胺（DA）都具有舉足輕重的調節(jié)作用。本實驗

9、研究表明，參葉緩癡膠囊可不同程度的提高模型動物單胺類介質的含量（P＜0.05，＜0.01），提示參葉緩癡膠囊對VCI模型動物學習記憶的改善作用可能和增加大腦單胺類重要神經介質的含量有關。參葉緩癡膠囊對VCI模型動物腦組織乙酰膽堿酯酶活性的影響：特別是能使乙酰膽堿（ACh）水解成膽堿和乙酸的乙酰膽堿酯酶(AchE)，因為AchE不僅參與膽堿能神經遞質的傳遞過程的調節(jié)，而且乙酰膽堿相關酶（AchE）等對學習記憶過程有明顯的影響。本試驗研究表

10、明，與MG比較，SHG和SMG動物腦組織AchE活力下降（P＜0.05），提示參葉緩癡改善VCI模型動物的學習和記憶能力與減少大腦組織內AChE的分解，從而提高ACh含量有關。
　　結論：通過實驗研究表明：（1）參葉緩癡膠囊對慢性腦缺血認知功能障礙模型動物逃避行為、平臺停留時間、有效區(qū)停留時間及運行總路程有改善作用，對模型動物的認知功能和學習記憶能力有一定的促進作用。其作用機制可能與藥物調節(jié)記憶功能相關的神經遞質有關；（2）參葉緩