急性腦缺血后HCN通道蛋白和mRNA表達(dá)的動態(tài)變化.pdf

1、目的：了解超極化激活環(huán)核苷酸門控的陽離子通道（Hyperpolariation-activated cyclic nucleotide-gated channels,HCN）蛋白和mRNA表達(dá)在急性腦缺血時的變化，以探尋HCN通道在腦缺血時的病理生理意義。
　　方法：各組動物在適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，制作SD大鼠急性局灶性大腦中動脈栓塞腦缺血模型，72只大鼠被隨機分為8組：（1）假手術(shù)組，（2）缺血2h再灌注0h組，（3）缺血2h再灌注

2、2h組，（4）缺血2h再灌注4h組，（5）缺血2h再灌注6h組，（6）缺血2h再灌注10h組，（7）缺血2h再灌注14h組，（8）缺血2h再灌注22h組，每組各9只。各組動物分別做以下檢測：運用行為學(xué)評分，TTC染色和HE染色的方法，檢測急性腦缺血再灌注不同時間點神經(jīng)行為學(xué)和神經(jīng)元損傷情況；運用熒光定量PCR法，檢測急性腦缺血再灌注不同時間點HCN1-4的mRNA的轉(zhuǎn)錄水平的動態(tài)變化；運用免疫組織化學(xué)法，檢測急性腦缺血再灌注不同時間點H

3、CN1-4蛋白的表達(dá)水平變化。
　　結(jié)果：（1）行為學(xué)評分和腦缺血梗死面積結(jié)果顯示：與假手術(shù)組相比，各缺血組行為學(xué)評分和梗死面積均顯著高于假手術(shù)組（p<0.05），表現(xiàn)為隨著腦缺血再灌注時間的增加，腦缺血損傷程度增加。在腦缺血2h再灌注4h時，梗死面積達(dá)到一個高峰后下降，隨后腦梗死面積再繼續(xù)持續(xù)上升增大。（2）通過HE染色，從形態(tài)學(xué)角度來觀察急性腦缺血后神經(jīng)元的損傷情況，結(jié)果顯示：急性腦缺血再灌注后，各組四個區(qū)域（Cortex區(qū)，

4、海馬CA1區(qū)，海馬CA3區(qū)，海馬DG區(qū)），均顯示出隨著再灌注時間的延長，腦組織損傷逐漸加重的趨勢。（3）熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示：a.隨著再灌注時間延長，與假手術(shù)組比較，Cortex區(qū)HCN1 mRNA的表達(dá)逐漸上調(diào)，至缺血2h再灌注6h組達(dá)到最高峰，后開始逐漸下調(diào)；與假手術(shù)組相比，缺血2h再灌注6h組，缺血2h再灌注10h組，缺血2h再灌注14h組，HCN1 mRNA表達(dá)變化上調(diào)（p<0.05），其他組與假手術(shù)組比無顯著性差異（p>

5、0.05）；Hippocampus區(qū)的HCN1 mRNA的表達(dá)的變化是：缺血2h再灌注4h組,缺血2h再灌注10h組,缺血2h再灌注14h組與假手術(shù)組比表達(dá)顯著上調(diào)（p<0.05），其他組與假手術(shù)組比無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）；b.Cortex區(qū)HCN2 mRNA的表達(dá)的變化是：缺血2h再灌注6h組和缺血2h再灌注14h組與假手術(shù)組比，表達(dá)均顯著上調(diào)（p<0.05），其他組與假手術(shù)組比無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）；Hippocampu

6、s區(qū)的HCN2 mRNA的表達(dá)的變化是：缺血2h再灌注6h組,缺血2h再灌注10h組,缺血2h再灌注14h組，缺血2h再灌注22h組，與假手術(shù)組比表達(dá)均顯著上調(diào)（p<0.05），其他組與假手術(shù)組比無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）；c.Cortex區(qū)HCN3 mRNA的表達(dá)，與假手術(shù)組比，各個缺血組表達(dá)均顯著下調(diào)（p<0.05）；Hippocampus區(qū)的HCN3 mRNA在各個缺血組，與假手術(shù)組比，其表達(dá)均顯著下降（p<0.05）；d.Co

7、rtex區(qū)HCN4 mRNA的表達(dá)的變化是：從假手術(shù)組開始，各個缺血組mRNA的表達(dá)開始逐漸上調(diào)，至缺血2h再灌注6h組達(dá)到最高峰，后開始逐漸下調(diào)；與假手術(shù)組比，缺血2h再灌注6h組表達(dá)顯著上調(diào)（p<0.05），其他組與假手術(shù)組比無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）；Hippocampus區(qū)的HCN4 mRNA的表達(dá)情況是：與假手術(shù)組比，各缺血組表達(dá)均顯著下降。（4）急性腦缺血再灌注不同時間點不同部位HCN1-4蛋白表達(dá)變化為：a.HCN1蛋白

8、：在Cortex區(qū)，和假手術(shù)組相比，缺血2h再灌注6h組HCN1蛋白表達(dá)顯著增加（p<0.05），其他組與假手術(shù)組比無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）；在CA1區(qū)表達(dá)檢測為：各缺血組和假手術(shù)組相比，HCN1蛋白表達(dá)均顯著減少（p<0.05）；在CA3區(qū)的表達(dá)狀況為，缺血2h再灌注4h組HCN1蛋白表達(dá)和假手術(shù)組相比，顯著減少，而缺血2h再灌注10h組和假手術(shù)組相比，HCN1蛋白表達(dá)顯著增加（p<0.05），其他組與假手術(shù)組比無統(tǒng)計學(xué)意義（p>

9、0.05）；在DG區(qū)表達(dá)為：各缺血組HCN1蛋白表達(dá)和假手術(shù)組相比，均顯著減少（p<0.05）。b.HCN2蛋白：在Cortex區(qū)，和假手術(shù)組組比，缺血2h再灌注4h組和缺血2h組再灌注10h組HCN2蛋白表達(dá)均顯著增加（p<0.05），其他組與假手術(shù)組比無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）；在CA1區(qū)，缺血2h再灌注22h組HCN2蛋白的表達(dá)，和假手術(shù)組相比，顯著增加（p<0.05），其他組與假手術(shù)組比無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）；除缺血2h

10、再灌注10h組外，其他缺血組在CA3區(qū)的HCN2蛋白的表達(dá)，和假手術(shù)組相比，均顯著下降（p<0.05），缺血2h再灌注10h組與假手術(shù)組比無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）；缺血2h再灌注10h組，缺血2h再灌注22h組在DG區(qū)HCN2蛋白的表達(dá)，和假手術(shù)組比，均顯著增加（p<0.05），其他組與假手術(shù)組比無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）。c.各個缺血組和假手術(shù)組在Cortex和Hippocamous（CA1區(qū)，CA3區(qū)，DG區(qū)）HCN3蛋白的表

11、達(dá)，在各時間點均為0 OD，無統(tǒng)計學(xué)意義。d.各個缺血組和假手術(shù)組在Cortex和Hippocamous（CA1區(qū)，CA3區(qū)，DG區(qū)）HCN4蛋白的表達(dá)，在各時間點均為0OD，無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：急性腦缺血再灌注發(fā)生后，HCN1、HCN2通道蛋白和mRNA的表達(dá)以及HCN3、HCN4 mRNA的表達(dá)在皮層和海馬CA1、CA3、DG區(qū)均發(fā)生了不同程度的變化（上升、下降或不變），而HCN3，HCN4蛋白表達(dá)無明顯變化，說明主要H