樹豆酮酸A對(duì)HepG2細(xì)胞體外糖代謝的影響及改善HepG2細(xì)胞胰島素抵抗的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討樹豆酮酸A（Cajanonic acid A）對(duì)HepG2細(xì)胞體外糖代謝的影響及對(duì)HepG2細(xì)胞胰島素抵抗的改善作用，并探討相關(guān)機(jī)制。
　　方法:
　　第一部分、研究樹豆酮酸A對(duì)HepG2細(xì)胞體外糖代謝的影響
　　1.體外培養(yǎng)HepG2細(xì)胞，檢測經(jīng)不同濃度（10-3mol/L、10-4mol/L、10-5mol/L和10-6mol/L）樹豆酮酸A作用24h后HepG2細(xì)胞對(duì)葡萄糖代謝的影響；
　　2.E

2、LISA法檢測經(jīng)不同濃度（10-3mol/L、10-4mol/L、10-5mol/L和10-6mol/L）樹豆酮酸A作用24h后HepG2細(xì)胞糖代謝相關(guān)酶己糖激酶（HK）和丙酮酸脫氫酶（PDH）的活性。
　　第二部分、研究樹豆酮酸A對(duì)HepG2細(xì)胞胰島素抵抗（IR-HepG2）的改善作用
　　1.經(jīng)不同濃度（10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L和10-9mol/L）胰島素作用HepG2細(xì)胞后，選擇出現(xiàn)最

3、佳抵抗作用的胰島素濃度；在采用最佳胰島素抵抗?jié)舛茸饔肏epG2細(xì)胞不同時(shí)間（12h、24h、36h和48h）后，選擇最佳抵抗作用時(shí)間，建立胰島素抵抗模型；
　　2.檢測經(jīng)不同濃度（10-3mol/L、10-4mol/L和10-5mol/L）樹豆酮酸A作用24h后IR-HepG2細(xì)胞對(duì)葡萄糖代謝的影響；
　　3.ELISA法檢測經(jīng)不同濃度（10-3mol/L、10-4mol/L和10-5mol/L）樹豆酮酸A作用24h后IR-

4、HepG2細(xì)胞糖代謝相關(guān)酶己糖激酶(HK)和丙酮酸脫氫酶（PDH）的活性；
　　4.蛋白印跡法（Western blot法）檢測經(jīng)不同濃度（10-3mol/L、10-4mol/L和10-5mol/L）樹豆酮酸A作用24h后IR-HepG2細(xì)胞中AMPK和AKT蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:10-3mol/L、10-4mol/L和10-5mol/L濃度樹豆酮酸A作用24h后HepG2細(xì)胞葡萄糖的消耗量分別為（8.650±0.31

5、9）mmol/L、（8.231±0.182）mmol/L和（8.136±0.402）mmol/L,與陰性對(duì)照組（6.521±0.056）mmol/L相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；10-3mol/L和10-4mol/L濃度樹豆酮酸A作用24h后HepG2細(xì)胞內(nèi)己糖激酶含量分別為（882.91±30.72）pg/mL和（718.25±20.37）pg/mL，與陰性對(duì)照組（616.65±17.24）pg/mL相比，己糖激酶活性增加

6、；10-3mol/L濃度樹豆酮酸A作用24h后HepG2細(xì)胞內(nèi)丙酮酸脫氫酶含量為（1526.69±66.74）pg/mL，與陰性對(duì)照組（1204.73±55.72）pg/mL相比，丙酮酸脫氫酶活性增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。10-7mol/L胰島素作用HepG2細(xì)胞24h后，可以建立穩(wěn)定的胰島素抵抗模型；10-3mol/L、10-4mol/L濃度樹豆酮酸A作用24 h后IR-HepG2細(xì)胞葡萄糖的消耗量分別為（7.934±

7、0.013）mmol/L、（7.032±0.032）mmol/L，與陰性對(duì)照組（5.952±0.015）mmol/L相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；10-3mol/L、10-4mol/L和10-5mol/L濃度樹豆酮酸A作用24h后IR-HepG2細(xì)胞內(nèi)己糖激酶含量分別為（568.87±39.77）pg/mL、（495.43±35.43）pg/mL和（489.63±27.30）pg/mL，與陰性對(duì)照組（444.42±33.52

8、）pg/mL相比，己糖激酶活性增加；10-3mol/L、10-4mol/L濃度樹豆酮酸A作用24 h后IR-HepG2細(xì)胞內(nèi)丙酮酸脫氫酶含量分別為（1765.54±135.26)pg/mL、（1620.48±149.81）pg/mL，與陰性對(duì)照組（1247.92±152.47）pg/mL相比，丙酮酸脫氫酶活性增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；10-3mol/L、10-4mol/L樹豆酮酸A作用24h后IR-HepG2細(xì)胞內(nèi)AMP

9、K蛋白的表達(dá)增加，10-3 mol/L樹豆酮酸A作用24h后IR-HepG2細(xì)胞內(nèi)AKT蛋白的表達(dá)增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.樹豆酮酸A在體外能促進(jìn)HepG2細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取，具有降糖活性，其作用可能與增強(qiáng)糖代謝相關(guān)酶己糖激酶和丙酮酸脫氫酶活性有關(guān)。
　　2.樹豆酮酸A對(duì)HepG2細(xì)胞胰島素抵抗具有一定改善作用，其作用可能與增強(qiáng)糖代謝相關(guān)酶己糖激酶和丙酮酸脫氫酶活性以及上調(diào)AMPK