藥物干預(yù)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞模型的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：用比較蛋白質(zhì)組學(xué)策略篩選增敏劑藥物蛻皮甾酮/羅格列酮干預(yù)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞模型前后的差異表達(dá)蛋白，為尋找藥物作用靶點(diǎn)提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 將HtepG2細(xì)胞置于5×10<'-7>mol/L胰島素培養(yǎng)液中誘導(dǎo)16h，建立胰島素抵抗細(xì)胞模型，以葡萄糖氧化酶．過氧化物酶(GOD-POD)法檢測胰島素抵抗和非抵抗細(xì)胞對葡萄糖的攝取能力，以判斷抗性細(xì)胞模型的形成。在此基礎(chǔ)上，用胰島素增敏劑羅格列酮和蛻皮甾酮分別

2、干預(yù)胰島素抵抗細(xì)胞模型24h，用裂解液提取藥物干預(yù)前后各組細(xì)胞的蛋白質(zhì)，以雙向電泳技術(shù)對干預(yù)前后差異表達(dá)蛋白進(jìn)行篩選，差異表達(dá)蛋白再經(jīng)MALDI-TOF-MS質(zhì)譜分析，MS-Fit數(shù)據(jù)庫鑒定。 結(jié)果 1．體外高胰島素誘導(dǎo)成功建立胰島素抵抗細(xì)胞模型，GOD-POD法檢測胰島素抵抗組培養(yǎng)基中葡萄糖的含量明顯高于對照組，羅格列酮治療組葡萄糖較胰島素抵抗組明顯減少。 2．雙向電泳技術(shù)篩選出羅格列酮干預(yù)前與干預(yù)后胰島

3、素抵抗HepG2細(xì)胞的差異蛋白質(zhì)36個(gè)，22個(gè)蛋白質(zhì)在羅格列酮干預(yù)后表達(dá)上調(diào)，14個(gè)蛋白質(zhì)干預(yù)后表達(dá)下調(diào)；蛻皮甾酮干預(yù)前與干預(yù)后IRHepG2細(xì)胞的差異蛋白質(zhì)53個(gè)，有35個(gè)蛋白質(zhì)在蛻皮甾酮干預(yù)后表達(dá)上調(diào)，18個(gè)蛋白質(zhì)干預(yù)后表達(dá)下調(diào)。 3．經(jīng)MALDI-TOF-MS質(zhì)譜分析，MS-Fit數(shù)據(jù)庫鑒定，羅格列酮干預(yù)前后差異表達(dá)較明顯的6個(gè)蛋白質(zhì)(其中有3個(gè)上調(diào)蛋白，3個(gè)下調(diào)蛋白)經(jīng) MALDI-TOF-MS質(zhì)譜分析，MS-Fit數(shù)

4、據(jù)庫鑒定，它們分別是：Lipin-1、ANG-4、Chondroitin sulfate glucuronyltransferase、CPT-I、C3/C5 convertase及HSP-70.蛻皮甾酮干預(yù)前后的6個(gè)差異蛋白質(zhì)(其中有3個(gè)上調(diào)蛋白，3個(gè)下調(diào)蛋白)經(jīng)MALDI-TOF-MS質(zhì)譜分析，MS-Fit 數(shù)據(jù)庫鑒定，他們分別是：Tyrosine-protein kinase、Phosphatidylinositol-binding

5、 clathrin assembly protein、LIMdomain-binding protein 2、Phosphoenolpyruvate carboxykinase、Proteasome subunit alpha type 5及Zinc finger protein 483。 結(jié)論 1．體外高胰島素誘導(dǎo)成功建立了胰島素抵抗HepG2細(xì)胞模型。 2．獲得了理想的藥物干預(yù)前后胰島素抵抗HepG2細(xì)