大黃素和小檗堿對胰島素抵抗HepG2細(xì)胞的實驗研究.pdf

1、目的:胰島素抵抗(IR)是非酒精性脂肪肝(NAFLD)的病理生理基礎(chǔ)，改善肝臟IR對防治NAFLD起著至關(guān)重要的作用。大黃素和小檗堿分別是中藥大黃和黃連的主要有效成分，具有改善IR的作用。本研究旨在探討高濃度的游離脂肪酸(FFA)誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞為IR的機(jī)制以及大黃素和小檗堿對IR的改善作用，為防治NAFLD提供新的理論依據(jù)。 方法:用高濃度的FFA培養(yǎng)HepG2細(xì)胞，誘導(dǎo)為IR的細(xì)胞模型，測定培養(yǎng)液中葡萄糖濃度及細(xì)胞內(nèi)糖原含

2、量作為模型鑒定指標(biāo)；四甲基偶氮噻唑藍(lán)(MTT)實驗分別檢測大黃素和小檗堿的最適藥物濃度；逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)方法檢測各組細(xì)胞中脂聯(lián)素受體2(AdipoR2)、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)的mRNA表達(dá)。 結(jié)果:(一)MTT實驗顯示：濃度為10μmol/L大黃素時的細(xì)胞存活率為92.5％。濃度為10μmol/L幾小檗堿時的細(xì)胞存活率為90.3％，故選擇10μmol

3、/L為大黃素和小檗堿的工作濃度。 (二)預(yù)防組1．IR模型組培養(yǎng)液中葡萄糖含量較正常組明顯升高(P＜0．01)，當(dāng)同時加入中藥和FFA后即：大黃素(10μmol/L)+FFA組、小檗堿(10μmol/L)+FFA組培養(yǎng)液中葡萄糖含量較模型組顯著降低，與正常組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。 2．IR模型組細(xì)胞內(nèi)糖原含量較正常組明顯降低(P＜0.01)；而大黃素+FFA組、小檗堿+FFA組細(xì)胞內(nèi)糖原含量顯著高于模型組，與正常組比較無統(tǒng)計

4、學(xué)差異。 3．正常HepG2細(xì)胞可表達(dá)AdipoR2、PPARγ、PEPCK。IR模型組較正常組AdipoR2、PPARγmRNA表達(dá)減少，PEPCKmRNA表達(dá)增高(P＜0.01)，而大黃素+FFA組、小檗堿+FFA組AdipoR2、PPARγmRNA表達(dá)增高，PEPCKmRNA表達(dá)減少。 (三)治療組1．IR的模型組培養(yǎng)液中葡萄糖含量以及PEPCKmRNA表達(dá)明顯高于正常對照組(P＜0．01)，細(xì)胞內(nèi)糖原含量、Adi

5、poR2mRNA、PPARγmRNA表達(dá)顯著減少(P＜0.01)。 2．培養(yǎng)液中分別加入大黃素(10μmol/L)、小檗堿(10μmol/L)、吡格列酮(10μmol/L)后，可明顯改善IR。表現(xiàn)為：培養(yǎng)液中葡萄糖含量及PEPCKmRNA表達(dá)較IR模型組顯著降低，而細(xì)胞內(nèi)糖原含量、AdipoR2mRNA、PPARγmRNA表達(dá)升高。且以上三組分別與正常組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0．01)。 結(jié)論:高濃度的FFA培養(yǎng)Hep