急性淋巴細(xì)胞白血病生物學(xué)特征與預(yù)后研究.pdf

1、急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)在所有的成人白血病中約占20％，是由于骨髓造血干細(xì)胞或祖細(xì)胞在不同的分化階段發(fā)生分化障礙、凋亡阻滯以及惡性增殖而發(fā)生于血液循環(huán)系統(tǒng)的異質(zhì)性惡性腫瘤。目前病因尚未完全清楚，根據(jù)淋巴細(xì)胞類型，可將其分為B-ALL和T-ALL，不同分型ALL在免疫分型、細(xì)胞和分子遺傳學(xué)、形態(tài)學(xué)和臨床上均表現(xiàn)出極大差異。ALL的預(yù)后相關(guān)因素很多，近年來(lái)分子生物學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)迅速發(fā)展，很多分子和細(xì)胞遺傳學(xué)標(biāo)記物被發(fā)現(xiàn)并應(yīng)用于ALL

2、預(yù)后危險(xiǎn)分層。
　　目的:統(tǒng)計(jì)廣東省中醫(yī)院收治的確診為ALL的成人及兒童患者的生物學(xué)特征，包括患者年齡、外周血WBC計(jì)數(shù)、骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞組織化學(xué)染色、免疫表型、染色體核型和基因改變等特征，探討上述改變與ALL預(yù)后之間的關(guān)聯(lián)性。
　　材料與方法:收集分析該院2009年1月1日至2013年6月30日期間確診為ALL的患者172例。男性96例，女性76例;中位年齡為28歲（1-76歲）。所有ALL患者治療前采集外周血進(jìn)行外周

3、血細(xì)胞分析;采取骨髓標(biāo)本10ml，分別進(jìn)行手工骨髓細(xì)胞涂片計(jì)數(shù)和細(xì)胞化學(xué)染色（采用BASO公司染液），采用流式細(xì)胞儀分析進(jìn)行免疫分型;采用G顯帶法進(jìn)行染色體核型分析，每個(gè)樣本至少分析15-20個(gè)中期分裂相;采用多種方法聯(lián)合檢測(cè)基因改變:反轉(zhuǎn)錄-PCR(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)融合基因BCR/ABL、TEL/AML1、E2A/PBX1和MLL等15種基因重排。采用生存率估計(jì)等方法分析ALL患者免疫表型、染色體和分子遺傳學(xué)異常所占的比率，隨訪

4、分析患者的總生存時(shí)間，最后分析這些生物學(xué)特征改變與ALL預(yù)后之間的關(guān)聯(lián)性。
　　結(jié)果:
　　1.172例ALL病例中，≤14歲(兒童組)72例。中位發(fā)病年齡72月（8-168月），＞14歲（成人組）100例，中位發(fā)病年齡35歲（15-76歲）;兒童組和成人組比較發(fā)現(xiàn)兒童組中位總生存期(OS)（36月）顯著高于成人組中位OS（18月）(P=0.000)。
　　2.獲得152例ALL完整隨訪資料，其中成人90例、兒童62例

5、。治療后132例達(dá)完全緩解(CR)，總CR率為86.8％。兒童組ALL的CR率(91.9％)顯著高于成人組ALL(83.3％);兒童組（21月）中位無(wú)病生存率(DFS)顯著高于成人組（14月）;兒童復(fù)發(fā)率(22.8％)顯著低于成人復(fù)發(fā)率(60.0％)。
　　3.172例ALL患者中位WBC計(jì)數(shù)為22.45×109/L[(0.2-519)×109/L]。按外周血WBC計(jì)數(shù)分為三組，＞50×109/L組的中位OS和中位DFS明顯低于(

6、10-50)×109/L與＜10×109/L組，且＞50×109/L組復(fù)發(fā)率(64.1％)顯著高于WBC＜10×109/L組復(fù)發(fā)率(43.5％)。
　　4.參照FAB的分類標(biāo)準(zhǔn)，將172例患者分為L(zhǎng)1、L2、L3三種亞型，L1型36例(17.80％)，L2型145例(71.78％)，L3型21例(10.39％)，按形態(tài)學(xué)分成三組其生存率無(wú)顯著差別，生存曲線分界亦不明顯。
　　5.172例ALL的細(xì)胞組織化學(xué)染色顯示所有病例P

7、OX均為陰性;NAE陽(yáng)性物呈棕紅色，平均陽(yáng)性率為32％; NaF抑制陽(yáng)性率均不明顯;PAS染色陽(yáng)性物呈粉紅色，顆粒呈珠狀、塊狀、粗顆粒狀，平均陽(yáng)性率達(dá)76％。
　　6.免疫分型檢出B-ALL患者143例(83.1％)，T-ALL患者21(12.2％)，T∶B=1∶6.81，不能分型者4(2.3％)例，急性混合型ALL4例(2.3％)。其中早前B-ALL(pro-B ALL)22例，普通B-ALL(com-B ALL)80例，前B-

8、ALL(pre-BALL)41例。髓系抗原(MyAg)表達(dá)，以CD13陽(yáng)性最常見，陽(yáng)性率為45.7％;其次為CD15(18.9％)、CD33(8.5％)、CD117(8.5％)。
　　7.90.1％病例完成了染色體核型分析。156例患者中正常核型患者82例(52.5％)，異常核型患者74例(47.5％)，異常核型中以t(9;22)為主要類型，共21例(13.5％)，其次為超二倍體型，亞二倍體、復(fù)雜核型、t(1;19)、t(8;14

9、)、11q-。成人組核型異常比例明顯高于兒童組，t(9;22)異常比例亦明顯高于兒童組。核型正常的ALL患者預(yù)后最好，而t(9;22)、亞二倍體、復(fù)雜核型和其他類型的核型異常的中位OS和3年OS率以及死亡風(fēng)險(xiǎn)均高于核型正常組。而超二倍體的預(yù)后又在所有核型異常組中最好。
　　8.170例完成ALL15種融合基因檢測(cè)，其中有115例(67.64％)患者未發(fā)現(xiàn)分子遺傳學(xué)異常，其余55例(32.36％)患者檢出的異常類型主要為E2A/PB

10、X1、TEL/AML1、BCR/ABL以及MLL重排等融合基因。BCR/ABL融合基因陽(yáng)性檢出率最高，共24例;超過(guò)2種以上分子遺傳學(xué)異常的混合型異?；颊?0例，MLL重排融合基因陽(yáng)性7例，AML1/TEL基因融合陽(yáng)性6例，PBX1/E2A融合基因陽(yáng)性4例;另外各有1例檢出E2A/HLF融合基因表達(dá)和EVI1表達(dá)。
　　9.未檢出基因異常組的中位DFS、中位OS和3年OS率分別為23個(gè)月，尚未達(dá)到和60.9％，明顯優(yōu)于BCR/AB

11、L融合基因陽(yáng)性組（中位DFS為8個(gè)月，中位OS為14.2個(gè)月，3年OS率為22.8％）。單因素Cox回歸分析結(jié)果表明，陽(yáng)性組ALL患者的復(fù)發(fā)率較未檢出基因異常組高2.389倍，死亡率是未檢出基因異常組的2.566倍。
　　10.成人和兒童ALL病例MICM危險(xiǎn)分組之間生存率有顯著差異。
　　結(jié)論:
　　1.兒童ALL預(yù)后較成人預(yù)后好，兩者間OS、DFS、復(fù)發(fā)率均存在顯著性差異。
　　2.外周血WBC計(jì)數(shù)與ALL生

12、存期呈負(fù)相關(guān)。
　　3.參照FAB的分類標(biāo)準(zhǔn)的ALL分型對(duì)ALL的預(yù)后指導(dǎo)意義有限。
　　4.成人組核型異常和分子遺傳學(xué)異常發(fā)生率高于與兒童組， t(9;22)型核型和BCR/ABL融合基因檢出率最高。
　　5.核型正常患者預(yù)后最好，超二倍體患者其次，亞二倍體、t(9;22)及其它異?；颊哳A(yù)后較差。BCR/ABL陽(yáng)性患者的預(yù)后與分子遺傳學(xué)正常患者相比更差。核型異常和分子遺傳學(xué)異常對(duì)ALL的預(yù)后判斷有價(jià)值。
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