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文檔簡介
1、人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,RSV)是造成世界范圍內嬰幼兒下呼吸道病毒性感染最重要的病原。呼吸道合胞病毒融合蛋白(fusionprotein,F)為病毒表面結構蛋白,在RSV A、B兩種亞型中有很高的抗原保守性,是主要的保護性抗原,誘導中和抗體,被認為是很有潛力的候選疫苗。純化RSV的F蛋白對診斷試劑和亞單位疫苗的研制具有重要意義。目前文獻報道的F蛋白的純化方法大多為免疫親和層析
2、和蛋白電泳法,這些方法不但蛋白產(chǎn)量少且會導致其抗原性的部分喪失,因此,為獲得產(chǎn)率高、抗原性好的純化的F蛋白,本論文提出了一種兩步層析純化RSV病毒包膜F蛋白的新方法并建立了F蛋白的夾心ELISA定量檢測方法。由Hep-2細胞培養(yǎng)的RSV純化天然的F蛋白,首先以RSV感染Hep-2細胞,待細胞出現(xiàn)病變(cytopathic effect,CPE)后,收獲細胞及培養(yǎng)液,離心,取上清,PEG6000沉淀,獲得的沉淀物經(jīng)溶解后通過蔗糖密度梯度離
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