“標本配穴”法電針防治大鼠心肌缺血損傷及其線粒體信號通路調控機制.pdf

1、目的：
　　以鹽酸異丙腎上腺素（ISO）制作大鼠心肌缺血模型，在課題組前期對內關穴防治心肌缺血研究成果的基礎上，根據(jù)心肌缺血中醫(yī)病因病機，采用“標本配穴”法（內關、足三里、關元），對照常規(guī)配穴法（內關、膻中、神門），觀察不同腧穴配伍法電針對大鼠心肌缺血損傷的防治效應；從氧化應激損傷線粒體相關信號通路途徑，探討“標本配穴”法電針防治心肌缺血的可能作用機制，為臨床防治及選穴配伍提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　選用50只體重

2、在180～220g的SPF級雄性Wistar大鼠分成5組，每組各10只。正常組：每日上午以5mg/kg/d劑量大鼠背部皮下注射0.9％氯化鈉溶液，連續(xù)7d；模型組：每日上午以5mg/kg/d劑量大鼠背部皮下注射ISO溶液制作模型，連續(xù)7d，以心電圖S-T段變異振幅≥0.1mV為模型評價指標；標本配穴組和常規(guī)配穴組：造模同模型組，從第一次皮下注射造模前兩組即分別電針大鼠雙內關、雙足三里、關元穴和雙內關、雙神門、膻中穴（HANS-200電針

3、治療儀，疏密波、2-100Hz、1mA、10 min），以后每日上午皮下注射前電針處理，持續(xù)到造模后2周，共電針21次；白藜蘆醇組：造模同模型組，從第一次皮下注射造模前以5mg/kg/d劑量給予白藜蘆醇溶液灌胃處理，以后每日上午皮下注射前灌胃處理，持續(xù)到造模后2周，共灌胃21次。實驗中觀察并記錄大鼠日?；顒忧闆r，實驗結束后檢測各組大鼠心電圖、血清心肌肌鈣蛋白T（cTnT）及心肌超微結構的變化，觀察“標本配穴”法電針對心肌缺血的防治作用及

4、腧穴配伍間的差異性；檢測各組大鼠心肌組織抗氧化活性酶及脂質過氧化產物的情況，觀察“標本配穴”法電針抗心肌細胞氧化損傷的作用；采用蛋白免疫印跡和實時熒光定量PCR相關技術，觀察各組大鼠心肌線粒體DNA（mtDNA）相關調控因子，從線粒體相關信號通路途徑探討“標本配穴”法電針防治心肌缺血的可能作用機制；采用蛋白免疫印跡和免疫組化技術檢測大鼠心肌SIRT1的表達，從SIRT1途徑探討“標本配穴”法電針防治心肌缺血的可能作用機制。
　　結

5、果：
　　1.對各組大鼠日常情況的觀察：正常組一般情況良好。模型組實驗造模第1d出現(xiàn)心跳加快，呼吸氣促、神倦嗜睡等現(xiàn)象；連續(xù)造模7d，模型組大鼠出現(xiàn)不同程度皮毛稀疏枯燥暗黃、鼠尾淡白、口唇紫紺、瞇眼萎靡，反應遲鈍，日常進食減少等癥狀。標本配穴組、常規(guī)配穴組、白藜蘆醇組造模7d，大鼠皮毛輕微脫落且缺乏光澤，精神、飲食及反應能力稍差，繼續(xù)電針和灌胃處理14d，三組日常情況明顯好轉。
　　2.對大鼠心電圖S-T段和心率的影響：與正

6、常組比較，模型組大鼠心電圖S-T段振幅明顯抬高,心率明顯加快，兩組間比較具有極顯著性差異（P<0.01）；電針和白藜蘆醇干預后，大鼠心電圖S-T段抬高幅度明顯下降，心率明顯減慢，與模型組間具有顯著性差異(P<0.05)。其余三組間比較：兩電針組和白藜蘆醇組三組間心電圖S-T段振幅的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），兩電針組心率均較白藜蘆醇組明顯下降(P<0.05)，兩電針組間心率的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　3.對大鼠

7、血清cTnT的影響：與正常組比較，模型組血清cTnT明顯升高，兩組間比較具有極顯著性差異（P<0.01）；與模型組比較，兩電針組與白藜蘆醇組血清cTnT明顯下降(P<0.05)。其余三組比較：標本配穴組與白藜蘆醇組血清cTnT較常規(guī)配穴組下降更明顯(P<0.05)，標本配穴組與白藜蘆醇組間的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　4.對大鼠心肌超微結構的影響：正常組心肌肌原纖維排列整齊規(guī)則，肌節(jié)結構清晰可見，心肌線粒體結構與形態(tài)清

8、晰完整，雙層膜清楚；模型組心肌肌絲排列雜亂，肌節(jié)各帶模糊不清，內質網(wǎng)擴張，線粒體數(shù)量明顯減少，大部分線粒體腫脹變形，嵴變疏變短，方向不規(guī)則，嵴丟失，空泡化。其余三組電鏡結果均較模型組明顯改善：大部分心肌肌絲排列整齊，線粒體數(shù)量明顯增加，線粒體空泡化減少，腫脹變形程度減輕，而標本配穴組和白藜蘆醇組的損傷程度較常規(guī)配穴組輕。
　　5.對大鼠心肌組織MDA、SOD、GSH-Px的影響：與正常組比較，模型組大鼠心肌組織MDA含量明顯升高，

9、而SOD、GSH-Px含量明顯減少，兩組間比較具有極顯著性差異（P<0.01）；在經(jīng)過電針和白藜蘆醇干預后，兩電針組和白藜蘆醇組大鼠心肌組織MDA含量較模型組明顯下降（P<0.05）， SOD、GSH-Px含量明顯上升（P<0.05）。其余三組間比較：標本配穴組大鼠心肌MDA含量比常規(guī)配穴組明顯下降（P<0.05），SOD、GSH-Px含量比常規(guī)配穴組明顯升高（P<0.05）；白藜蘆醇組大鼠心肌組織MDA含量與標本配穴組間的差異無統(tǒng)計學

10、意義（P>0.05），其SOD、GSH-Px值與常規(guī)配穴組間的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　6.對大鼠心肌mtDNA相關調控因子的影響：與正常組比較，模型組大鼠心肌PGC-1α、NRF-1、mtTFA表達明顯減少，兩組間比較具有極顯著性差異（P<0.01）；與模型組比較，兩電針組和白藜蘆醇組大鼠心肌PGC-1α、NRF-1、mtTFA表達明顯上升，與模型組比較具有顯著性差異（P<0.05）。其余三組間比較：標本配穴組PG

11、C-1α表達與常規(guī)配穴組間的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），但其NRF-1和mtTFA表達高于常規(guī)配穴組（P<0.05）；白藜蘆醇組PGC-1α表達高于兩電針組（P<0.05），但其NRF-1和mtTFA蛋白表達明顯高于常規(guī)配穴組（P<0.05），與標本配穴組間的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　7.對大鼠心肌SIRT1的影響：與正常組比較，模型組大鼠心肌SIRT1表達明顯減少，兩組間比較具有極顯著性差異(P<0.01)；

12、與模型組比較，兩電針組和白藜蘆醇組大鼠心肌SIRT1表達明顯上升(P<0.05)。其余三組間比較：標本配穴組大鼠心肌SIRT1表達明顯高于常規(guī)配穴組(P<0.05)；標本配穴組大鼠心肌SIRT1表達與白藜蘆醇組之間的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　結論：
　　1.電針能有效防治心肌缺血，“標本配穴”法電針的防治作用優(yōu)于常規(guī)配穴法電針。
　　2.“標本配穴”法電針抗心肌缺血損傷的作用機制可能是通過激活抗氧化酶，抑