UrocortinI后處理抗心肌缺血再灌注損傷的線粒體機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察UrocortinⅠ后處理對(duì)缺血/缺氧大鼠心臟功能、線粒體結(jié)構(gòu)及功能的影響，探討UrocortinⅠ后處理產(chǎn)生心肌保護(hù)作用的線粒體機(jī)制。
　　方法：1.采用Langendorff離體心臟灌注裝置建立大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，SPF級(jí)健康雄性SD大鼠48只隨機(jī)分為正常組（Nor組）、缺血再灌組（I/R組）、UrocortinⅠ后處理組（UcnⅠ組）、5-羥葵酸拮抗UrocortinⅠ組（5-HD+UcnⅠ組），每組12例

2、。其中Nor組：Kerbs-Henseleit（K-H）液平衡20min后持續(xù)灌注135min。I/R組：平衡20min后灌注4℃停跳液，于32℃下全心缺血40min，再?gòu)?fù)灌95min。 UcnⅠ組：缺血后復(fù)灌含UcnⅠ的K-H液30min，再續(xù)灌K-H液65min。5-HD+UcnⅠ組：UcnⅠ后處理前先給予含5-HD的K-H液5min，其余處理同UcnⅠ組。各組于平衡末及復(fù)灌末：（1）Powerlab/8SP數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)記錄：心率（

3、HR）、左室發(fā)展壓（LVDP）、左室舒張末壓力（LVDEP）及最大dp/dt(+dp/dtmax)等心功能指標(biāo)；（2）取左室心肌組織提取線粒體，漢莎氧電極測(cè)定線粒體3態(tài)呼吸、呼吸控制比（RCR）等呼吸功能及煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶（NADH-OX）、琥珀酸氧化酶（Suc-OX）等呼吸酶活性變化；（3）透射電子顯微鏡（TEM）觀察心肌超微結(jié)構(gòu)改變。
　　2.離體心臟灌注裝置（MPA）分離成年大鼠心肌細(xì)胞，培養(yǎng)24h后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)并

4、隨機(jī)分為正常組（Nor組）、缺氧/復(fù)氧組（I/R組）、UrocortinⅠ后處理組（UcnⅠ組）、5-羥葵酸拮抗UrocortinⅠ組（5-HD+UcnⅠ組）。其中Nor組：37℃培養(yǎng)箱中細(xì)胞持續(xù)培養(yǎng)135min；I/R組：細(xì)胞缺氧40min后復(fù)氧95min；UcnⅠ組：缺氧后復(fù)氧時(shí)先在含UcnⅠ的培養(yǎng)基中處理30min后再?gòu)?fù)氧60min；5-HD+UcnⅠ組：在給予UcnⅠ處理前先用特異性線粒體ATP敏感性鉀通道（mito-KATP）

5、拮抗劑5-HD處理5min，余處理同 UcnⅠ組。各組于復(fù)氧末對(duì)比觀察（1）激光共聚焦顯微鏡（LSCM）下線粒體膜電位(MMP)的變化；（2）CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活力的改變。
　　結(jié)果：
　　1.心功能指標(biāo)變化：與復(fù)灌末相比各組HR、LVDP、LVEDP、+dp/dtmax心功能缺血前均好于復(fù)灌末（P<0.05）；而缺血前各組心臟功能差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；在復(fù)灌末：Nor組均優(yōu)于其余各組（P<0.05），而U

6、cnⅠ組比I/R組和5-HD+UcnⅠ組心功能好（P<0.05）；I/R組LVEDP、+dp/dtmax較5-HD+UcnⅠ組差（P<0.05），但兩組間HR、LVDP比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2.心肌線粒體呼吸功能和酶活性變化：缺血前各組呼吸功能及酶活性改變無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與復(fù)灌末相比，各組呼吸控制比（RCR）、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶（NADH-OX）、琥珀酸氧化酶等酶活性變化缺血前均好于復(fù)灌

7、末（P<0.05）；在復(fù)灌末：Nor組線粒體呼吸功能及酶的活性均優(yōu)于其余各組（P<0.05），而UcnⅠ組呼吸酶活性及3態(tài)呼吸、呼吸控制比（RCR）較I/R組和5-HD+UcnⅠ組要好（P<0.05），但I(xiàn)/R組較5-HD+UcnⅠ組差（P<0.05）；關(guān)于4態(tài)呼吸（State4）缺血前及復(fù)灌末組間、組內(nèi)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.線粒體膜電位的變化：Nor組心肌細(xì)胞膜電位比例均高于其余各組（P<0.01），

8、而UcnⅠ組膜電位比例高于I/R組和5-HD+UcnⅠ組（P<0.05），但5-HD+Ucn I組與I/R組比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　4.心肌細(xì)胞活力測(cè)定：Nor組細(xì)胞活力高于其余各組（P<0.05）；UcnⅠ組細(xì)胞活力較5-HD+UcnⅠ組和I/R組高（P<0.05），而5-HD+UcnⅠ組與I/R組比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.UcnⅠ后處理可改善離體心臟心肌收縮力、降低