基于HIF-1通路探討精脒對(duì)SW620細(xì)胞糖酵解的影響.pdf

1、目的：本研究中以人的結(jié)腸癌細(xì)胞SW620作為研究對(duì)象，采用精脒、DFMO以及2-DG作用于SW620后，綜合觀(guān)察它們對(duì)SW620細(xì)胞糖酵解的影響，并在此基礎(chǔ)上觀(guān)察SW620細(xì)胞內(nèi)HIF-1a的表達(dá)沉默后精脒能否促進(jìn)細(xì)胞的糖酵解。旨在于明確精脒對(duì)SW620細(xì)胞糖酵解的影響，并探討其促進(jìn)糖酵解的作用與HIF-1通路的相關(guān)性。
　　方法：（1）用0～75μM不同濃度的精脒作用于細(xì)胞，MTT法檢測(cè)不同濃度的精脒作用24 h、48 h、72

2、 h后細(xì)胞的增殖率。（2）用(0.625、1.25、2.5)μM三種濃度的精脒分別作用于SW620細(xì)胞；2.5 mM DFMO分別與三種不同濃度的精脒共同作用于SW620細(xì)胞；2.5μM2-DG分別與三種不同濃度的精脒共同作用于SW620細(xì)胞，檢測(cè)不同組別下SW620細(xì)胞糖酵解指標(biāo)。（3）用連二亞硫酸鈉處理SW620細(xì)胞導(dǎo)致細(xì)胞缺氧，再用(0、0.625、1.25、2.5)μM三種濃度的精脒分別作用于缺氧條件下的SW620細(xì)胞，檢測(cè)在不

3、同濃度精脒作用下，SW620細(xì)胞糖酵解指標(biāo)。（4）選取有效的HIF-1α-siRNA片段對(duì)SW620細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，運(yùn)用real-time PCR技術(shù)檢驗(yàn)siRNA轉(zhuǎn)染的有效性；然后再用(0.625、1.25、2.5)μM三種濃度的精脒分別作用于HIF-1α表達(dá)被干擾的SW620細(xì)胞，檢測(cè)在不同濃度精脒作用下，SW620細(xì)胞糖酵解指標(biāo)。
　　結(jié)果：（1）通過(guò)觀(guān)察細(xì)胞增殖率折現(xiàn)圖顯示，我們發(fā)現(xiàn)精脒為0.625、1.25、2.5μM

4、三種濃度時(shí)，對(duì)細(xì)胞促增殖作用最為明顯，且藥物作用24 h后這三種濃度精脒的促增殖作用呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)。（2）加入精脒后，總體來(lái)看SW620細(xì)胞的葡萄糖消耗增多，乳酸產(chǎn)量升高，LDH活性增強(qiáng)，ATP水平提高，Glut1、LDHA以及HIF-1α的蛋白水平明顯升高。而DFMO以及2-DG使細(xì)胞的這些糖酵解指標(biāo)降低。（3）缺氧導(dǎo)致細(xì)胞糖酵解水平升高，缺氧條件下加入精脒可以進(jìn)一步提高細(xì)胞的糖酵解水平。（4）HIF-1αsiRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞株