乳酸酰化艾塞那肽微球制備及其體內(nèi)外性質(zhì)的考察.pdf

1、目的：
　　2型糖尿病(Type2 diabetes,T2DM)是一種多基因遺傳性的疾病，占糖尿病總?cè)藬?shù)的80％以上。艾塞那肽能夠以葡萄糖依賴的方式控制血糖、刺激胰島素分泌、抑制胰高血糖素分泌、延緩胃排空、減輕體重，同時(shí)降低低血糖發(fā)生的危險(xiǎn)，適用于治療2型糖尿病。但是艾塞那肽在體內(nèi)的半衰期短，其注射劑需要每天注射兩次，頻繁給藥使其注射劑的應(yīng)用受到極大的限制。雖然艾塞那肽微球的作用時(shí)間明顯延長(zhǎng)，但是仍有必要研發(fā)順應(yīng)性更好的制劑。

2、r>　　本課題旨在采用乳酸對(duì)艾塞那肽進(jìn)行酰化修飾，乳酸小分子利于注射給藥后多肽與血漿蛋白的物理結(jié)合，從而延長(zhǎng)藥物的體內(nèi)半衰期；同時(shí)，將酰化修飾后的乳酸-艾塞那肽?；锇d于PLGA高分子材料中制備成長(zhǎng)效緩釋微球制劑，在體內(nèi)緩慢釋放，減少給藥次數(shù)，提高患者的順應(yīng)性。
　　方法：
　　1、采用乳酸?；请纳甚；a(chǎn)物，分別用高效液相色譜和質(zhì)譜對(duì)?；a(chǎn)物進(jìn)行分離、鑒定。采用大鼠考察艾塞那肽連接一個(gè)乳酸的酰化物（LA-M1）的體

3、內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)。以db/db小鼠為模型動(dòng)物考察LA-M1的體內(nèi)藥效學(xué)，同時(shí)進(jìn)行小鼠的IPGTT實(shí)驗(yàn)考察。
　　2、采用乳化-溶劑揮發(fā)法制備LA-M1微球，搖床法考察LA-M1微球的體外釋放曲線。并分別以SD大鼠和db/db小鼠為模型動(dòng)物考察LA-M1微球的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)特征及藥效學(xué)特征。
　　3、采用MTT法測(cè)定LA-M1對(duì)RIN-m5f細(xì)胞的促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用。
　　結(jié)果:
　　1、合成得到了連接不同數(shù)量乳酸的艾

4、塞那肽酰化物，用質(zhì)譜對(duì)其進(jìn)行表征，四個(gè)色譜峰根據(jù)保留時(shí)間的延長(zhǎng)依次為連接一個(gè)乳酸的艾塞那肽?；铩⑦B接兩個(gè)乳酸的艾塞那肽?；铩⒉煌恢玫倪B接兩個(gè)乳酸的艾塞那肽?；铩⑦B接四個(gè)乳酸的艾塞那肽?；铩Ｖ苽湟合喾蛛x連接一個(gè)乳酸的艾塞那肽?；風(fēng)A-M1。大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)結(jié)果顯示，LA-M1在體內(nèi)2 h達(dá)到最大血藥濃度，半衰期t1/2為5.948 h，顯著長(zhǎng)于艾塞那肽的半衰期（t1/2為2.588 h）。注射LA-M1后，糖尿病小鼠的血糖值顯

5、著下降，具有明顯的降血糖效果。
　　2、制備LA-M1微球，結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)中通過(guò)對(duì)不同處方的篩選，選擇出最優(yōu)處方：制備方法選擇單乳化-溶劑揮發(fā)法，高分子材料為PLGA75252A，PVA濃度為1%，油相：水相體積比1.5:100，均質(zhì)速度1500 rpm，制備的微球，球形圓整，表面光滑，載藥量為4.72%，包封率為94.4%。體外釋放結(jié)果顯示，LA-M1微球具有良好的緩釋效果，能夠在體外緩慢釋放約40天。體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究結(jié)果顯示，L

6、A-M1微球能夠在大鼠體內(nèi)緩慢釋放近30天，長(zhǎng)于艾塞那肽微球的20天的體內(nèi)釋放時(shí)間。藥效學(xué)研究結(jié)果顯示LA-M1微球的體內(nèi)降血糖作用與艾塞那肽微球相似，明顯低于生理鹽水組的血糖值，同時(shí)對(duì)小鼠降低血糖的作用時(shí)間長(zhǎng)于艾塞那肽微球。而且，不同劑量的LA-M1微球在體內(nèi)的作用時(shí)間有不同的影響，隨著劑量的增加，LA-M1微球的體內(nèi)作用時(shí)間延長(zhǎng)。
　　3、實(shí)驗(yàn)采用大鼠胰島瘤RIN-m5f細(xì)胞考察LA-M1對(duì)胰島細(xì)胞的作用，采用MTT法測(cè)定LA

7、-M1對(duì)RIN-m5f細(xì)胞的促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用，實(shí)驗(yàn)中我們以細(xì)胞的存活率為指標(biāo)，結(jié)果顯示LA-M1具有促進(jìn)胰島瘤細(xì)胞增殖的作用，其作用類似于艾塞那肽，這種促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用在一定范圍內(nèi)隨著LA-M1濃度的增大而增加，具有時(shí)間和劑量依賴性。
　　結(jié)論：
　　1、合成并分離的艾塞那肽單乳酸?；風(fēng)A-M1在體內(nèi)半衰期長(zhǎng)于艾塞那肽；LA-M1在體內(nèi)具有降血糖作用。
　　2、LA-M1微球在體內(nèi)的作用時(shí)間長(zhǎng)于艾塞那肽微球，降血

8、糖作用效果顯著，并且具有劑量依賴性。
　　3、LA-M1能促進(jìn)胰島瘤細(xì)胞增殖。
　　研究創(chuàng)新點(diǎn)：
　　本課題首次同時(shí)采用?；揎椔?lián)合微球長(zhǎng)效制劑方式實(shí)現(xiàn)艾塞那肽的長(zhǎng)效性，延長(zhǎng)艾塞那肽在體內(nèi)的作用時(shí)間，降低頻繁給藥給患者帶來(lái)的痛苦。采用乳酸對(duì)艾塞那肽進(jìn)行酰化修飾，乳酸小分子利于注射給藥后多肽與血漿蛋白的物理結(jié)合，延長(zhǎng)藥物的體內(nèi)半衰期；將?；揎椇蟮娜樗?艾塞那肽?；锇d于PLGA高分子材料中制備成微球制劑，體內(nèi)可實(shí)現(xiàn)3