簡(jiǎn)介：博士學(xué)位論文學(xué)校代碼學(xué)號(hào)10023B2008070云南曲靖婦女生殖道人乳頭瘤病毒感染和宮頸細(xì)胞學(xué)異常的現(xiàn)狀調(diào)查及相關(guān)基因甲基化研究PREVALENCEOFHUMANPAPILLOMAVIRUSINFECTION，CERVICALCYTOLOGYABNORMALITYANDGENEMETHYLATIONSTATUSINQUJINGOFYUNNANPROVINCE所院北京協(xié)姓名孫璐璐指導(dǎo)教師沈鏗導(dǎo)師小組楊佳欣曹冬焱和醫(yī)院學(xué)科專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)研究方向婦科腫瘤完成日期2011年5月教授教授副教授北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文摘要研究背景宮頸癌CERVICALCANCER是女性第二大常見(jiàn)惡性腫瘤，現(xiàn)己明確人乳頭瘤病毒HUMANPAPILLOMAVIRUS，耶V感染是宮頸癌發(fā)生的根本原因。本研究的目的是調(diào)查云南曲靖普通婦女耶V感染率及相關(guān)危險(xiǎn)因素、宮頸細(xì)胞學(xué)異常率及相關(guān)危險(xiǎn)因素，以及相關(guān)基因在各級(jí)細(xì)胞學(xué)中的甲基化狀態(tài)。研究方法采用橫斷面研究方法對(duì)曲靖市5936名女性常住人口進(jìn)行調(diào)查。對(duì)目標(biāo)人群進(jìn)行包括人口信息、行為信息和婚育狀況等內(nèi)容的流行病學(xué)問(wèn)卷調(diào)查，采集宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本應(yīng)用快速導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)進(jìn)行HPVDNA分型檢測(cè)，并對(duì)宮頸液基細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞病理診斷。采用病例對(duì)照研究方法，應(yīng)用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)法聯(lián)合變性高效液相色譜分析法對(duì)細(xì)胞學(xué)異常和正常婦女的細(xì)胞學(xué)樣本進(jìn)行MGMT、RARE2、DAPKL基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化檢測(cè)。定量資料的比較采用卡方檢驗(yàn)，影響因素分析采用單因素和多因素非條件LOGISTIC回歸分析。研究結(jié)果在5936名被調(diào)查婦女中，高危型HPVDNA陽(yáng)性率為83％，高危型HPV感染率有兩個(gè)高峰，分別為1824歲115％和50～55歲112％。在412例高危型HPV分型檢測(cè)陽(yáng)性婦女中，最常見(jiàn)感染亞型為HPV1634％，其次為IIPV5617％、HPV5814％、HPV3312％和HPV52088％。高危型HPV復(fù)合感染率在整個(gè)被調(diào)查人群中為35％，最常見(jiàn)的復(fù)合感染類型為HPV16和HPV56。多因素非條件LOGISTIC回歸分析顯示5065歲、已婚是腫V感染的保護(hù)因素。在被調(diào)查婦女中，細(xì)胞學(xué)異常的總體患病率為58％，細(xì)胞學(xué)異常率在3539歲年齡段最高，為73％。婦女患HSIL和LSIL的風(fēng)險(xiǎn)在HPV33感染時(shí)最高OR6064，CI184019987；OR38106，CI6888210802，其次為HPV58感染。M，V復(fù)合感染使婦女患HSIL的風(fēng)險(xiǎn)較單一感染時(shí)升高OR69911，CI19030256832VSOR19635。CI590065333。多因素非條件LOGISTIC回歸分析顯示，HPV感染、吸煙、滴蟲(chóng)感染、50～54歲是宮頸細(xì)胞學(xué)異常的危險(xiǎn)因素，而3539歲是宮頸細(xì)胞學(xué)異常的保護(hù)因素。在相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化的病例對(duì)照研究中，細(xì)胞學(xué)正常婦女MGMT、RARE2、DAPKL各基因甲基化率分別為369％、42O％和467％，任一基因甲基化頻率隨年齡增長(zhǎng)有上升趨勢(shì)22107345，P00133。MGMT、RARB2基因甲基化頻率在各級(jí)細(xì)胞學(xué)之間有顯著差異廬68976，P000861廬332477，PO0001，隨細(xì)胞學(xué)病變程度加重，基因甲基化的數(shù)量增加產(chǎn)01178，P00026。

簡(jiǎn)介：目的探討2012～2014年呼和浩特市地區(qū)5歲以下兒童輪狀病毒病毒性腹瀉感染狀況及病原學(xué)特點(diǎn)。通過(guò)流行病學(xué)資料及實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)，找出引起輪狀病毒瀉的優(yōu)勢(shì)基因型和血清型，為輪狀病毒性腹瀉的防控提供參考依據(jù)。方法采集2012～2014年3年間1～12月在內(nèi)蒙古自治區(qū)婦幼保健醫(yī)院就診的5歲以下腹瀉兒童糞便標(biāo)本1037份，來(lái)了解輪狀病毒性腹瀉的流行病學(xué)特征，同時(shí)對(duì)患兒家長(zhǎng)進(jìn)行面對(duì)面問(wèn)卷調(diào)查。對(duì)收集的標(biāo)本通過(guò)ELISA方法檢測(cè)A組輪狀病毒，陽(yáng)性標(biāo)本采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)RTPCR進(jìn)行血清型和基因型的鑒定。運(yùn)用EPIDATA31軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的整理和錄入應(yīng)用SPSSL30統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果2012～2014年內(nèi)蒙古婦幼保健醫(yī)院住院的5歲以下患兒共13951例，其中2012年4267例，2013年5013例，2014年4671例。本研究共采集符合標(biāo)準(zhǔn)的病例1037例，其中2012年412例，2013年402例，2014年223例。年齡為1～59個(gè)月齡，HRV病原陽(yáng)性率為5757％（5971037）。不同性別HRV陽(yáng)性率比較，男性患兒陽(yáng)性率為5671（338596），女性患兒陽(yáng)性率5147（227441）。不同月齡HRV陽(yáng)性率比較，12～18月齡的患兒陽(yáng)性率最高為6318（151239）。不同季節(jié)HRV陽(yáng)性率比較，秋季陽(yáng)性患兒數(shù)最高為124例，占陽(yáng)性總數(shù)的5192％（149287）。城市和鄉(xiāng)村HRV陽(yáng)性率比較，城市兒童陽(yáng)性率為4973（371746），鄉(xiāng)村兒童陽(yáng)性率為5017（146291）。HRV基因分型情況中，血清型以G9為優(yōu)勢(shì)型，基因型以P8為主，組合型中以G9P8基因型為優(yōu)勢(shì)基因型。結(jié)論輪狀病毒是呼和浩特市地區(qū)嬰幼兒病毒性腹瀉的主要病原體，輪狀病毒的主要高發(fā)季節(jié)為秋季，以12～18個(gè)月齡為高發(fā)月齡，主要血清型為G9型，主要基因型為P8型。

簡(jiǎn)介：2013年3月底H7N9型流感病毒首次感染人類，機(jī)體缺乏針對(duì)H7N9的特異性保護(hù)抗體，疫苗是預(yù)防H7N9病毒在人群中傳播的有效手段。研究表明H7N7AHERLS21903亞型滅活流感疫苗的免疫原性較低，通過(guò)提高抗原量、配合佐劑、多次免疫等多種方法才能得到理想的免疫效果。而目前H7N9流感病毒的免疫原性仍然未知。復(fù)制缺陷型腺病毒載體具有快速、安全性好、能激發(fā)較強(qiáng)的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)等特點(diǎn)，且有研究表明攜帶H5HA的重組腺病毒載體流感疫苗能產(chǎn)生較滅活疫苗更高的中和抗體滴度和交叉保護(hù)活性。在本研究中，為了比較H7重組腺病毒疫苗和全病毒滅活苗的免疫原性，我們制備了攜帶AHERLS21903H7N7和AANHUI12013H7N9血凝素抗原的重組腺病毒載體疫苗AD5NL和AD5AH，同時(shí)用反向遺傳學(xué)技術(shù)拯救出H7NL2192003PR8和H7N9AH113PR8重組流感病毒并滅活制備成全滅活疫苗NLPR8和AHPR8，分別免疫小鼠后檢測(cè)血清中血凝抑制活性和中和抗體效價(jià)以及對(duì)其他H7毒株的交叉保護(hù)反應(yīng)。研究結(jié)果顯示，相比較于全滅活病毒疫苗，腺病毒載體流感疫苗能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生更高的血凝抑制抗體和中和抗體。AHHA的免疫原性優(yōu)于NLHA，無(wú)論是重組腺病毒疫苗AD5AH還是全病毒滅活苗AHPR8，誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答均高于AD5NL和NLPR8同時(shí)，重組腺病毒疫苗AD5AH的交叉反應(yīng)性高于AD5NL。綜上，本研究比較了新型H7N9流感病毒的免疫原性，探索了復(fù)制缺陷性腺病毒載體疫苗作為H7N9候選疫苗的可能性，為H7N9流感病毒疫苗的研究提供了新思路。

簡(jiǎn)介：目的本實(shí)驗(yàn)旨在構(gòu)建人同源盒基因HOMEOBOXGENEHOXB4的慢病毒載體探討慢病毒介導(dǎo)的HOXB4感染人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞后的變化。方法利用PCR擴(kuò)增獲得HOXB4并克隆入慢病毒穿梭載體LENDSHUTTLE。運(yùn)用四質(zhì)粒慢病毒包裝系統(tǒng)轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞48H收獲侵病毒LENDHOXB4并測(cè)定慢病毒滴度。將LENDHOXB4感染人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞倒置熒光顯微鏡觀察細(xì)胞感染效果確定最佳的病毒感染復(fù)數(shù)MOI。同時(shí)利用RTPCR、免疫熒光染色、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HOXB4的表達(dá)情況CCK8檢測(cè)HOXB4對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。結(jié)果利用四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T成功獲得LENTIHOXB4測(cè)定的病毒滴度為310。TUML當(dāng)MOI為20時(shí)LENDHOXB4對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有較高的轉(zhuǎn)染效率達(dá)80以上。感染LENDHOXB4的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在MRNA、蛋白水平上均檢測(cè)到了目的基因的表達(dá)其能促進(jìn)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞增殖一倍流式結(jié)果表CD34079?45148?1059268?449741與轉(zhuǎn)染前比較CD34013?45014CD1059995?909988造血細(xì)胞表面標(biāo)志略有增高間充質(zhì)干細(xì)胞的表面標(biāo)志無(wú)明顯改變。結(jié)論1成功構(gòu)建了HOXB4慢病毒載體并獲得了HUCMSCSHOXB4基因工程細(xì)胞。2HOXB4基因能促進(jìn)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖3HOXB4基因轉(zhuǎn)染并不影響臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志的表達(dá)。

簡(jiǎn)介：病毒性腦炎是由病毒引起的一種腦膜和腦實(shí)質(zhì)的炎癥，是小兒較常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的感染性疾病，而皰疹病毒則是引起病毒性腦炎較主要的病因，其中具有代表性的是單純皰疹病毒1型和2型HSV1、HSV2、水痘一帶狀皰疹病毒VZV、人巨細(xì)胞病毒CMV、EB病毒EBV、人類皰疹病毒6型HHV6A、HHV6B。皰疹性腦炎有著較高的發(fā)病率和死亡率，不及時(shí)治療易留下嚴(yán)重的神經(jīng)功能缺陷。而早期大劑量的抗病毒治療可使死亡率顯著降低，存活率提高，因此皰疹性腦炎的療效評(píng)價(jià)關(guān)鍵在于早期診斷，而早期診斷和及時(shí)的治療需依賴實(shí)驗(yàn)室的診斷。在本研究中，以人皰疹病毒DNA多聚酶基因區(qū)為靶序列，設(shè)計(jì)多重引物和寡核苷酸探針，制成基因芯片，建立可同時(shí)檢測(cè)單純皰疹病毒1型和2型HSV1、HSV2、水痘一帶狀皰疹病毒VZV、愛(ài)潑斯坦一馬爾病毒EBV、人巨細(xì)胞病毒CMV和人類皰疹病毒6型HHV6A、HHV6B等七種人皰疹病毒的多重PCR基因芯片技術(shù)；對(duì)臨床疑似病毒性腦炎的290份腦脊液標(biāo)本進(jìn)行PCR基因芯片雜交檢測(cè)，取得良好結(jié)果。目的建立一種能同時(shí)快速檢測(cè)臨床常見(jiàn)人皰疹病毒的新技術(shù)，探討兒童皰疹性腦炎的快速診斷新方法。方法在人皰疹病毒的DNA多聚酶基因區(qū)設(shè)計(jì)引物和寡核苷酸探針，同時(shí)擴(kuò)增單純皰疹病毒1型和2型HSV1、HSV2、水痘一帶狀皰疹病毒VZV、愛(ài)潑斯坦馬爾病毒EBV、人巨細(xì)胞病毒CMV和人類皰疹病毒6型HHV6A、HHV6B等多種人皰疹病毒；建立七種人皰疹病毒的多重。PCR基因芯片技術(shù)。對(duì)臨床疑似病毒性腦炎的290份腦脊液標(biāo)本進(jìn)行PCR基因芯片雜交檢測(cè)，同時(shí)以臨床常規(guī)皰疹類病毒系列熒光定量PCR試劑盒檢測(cè)結(jié)果作比較；并將陽(yáng)性標(biāo)本經(jīng)分子克隆后測(cè)序。選同期非病毒感染疾病住院的患兒30例腦脊液標(biāo)本作為對(duì)照組癲癇18例，化膿性腦膜炎12例。結(jié)果人皰疹病毒PCR基因芯片能檢測(cè)到10拷貝的上述皰疹類病毒數(shù)；各皰疹類病毒間的探針信號(hào)不相互干擾，細(xì)菌、真菌、乙肝病毒及人基因組DNA等對(duì)照品無(wú)雜交信號(hào)。用該多重PCR基因芯片技術(shù)對(duì)臨床疑似為病毒性腦炎的290份腦脊液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，共檢出11份陽(yáng)性標(biāo)本，其中HSV13例，HSV22例，EBV1例，CMV1例，HHV6A2例，HHV6B1例，HSV2和CMV混合感染1例，陽(yáng)性率為38％。與TAQMAN熒光定量PCR法比較，其敏感度為917％，特異性為100％；并將11份陽(yáng)性標(biāo)本分子克隆后測(cè)序，與基因庫(kù)中相應(yīng)病毒序列比較，其同源性大于98％。30例非病毒感染疾病住院的患兒腦脊液標(biāo)本7種人皰疹病毒的DNA檢測(cè)均陰性。并對(duì)11例陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行病案檢索，其中2例為臨床確診的皰疹性腦炎，另外9例均為臨床病因不明的病毒性腦炎，PCR基因芯片技術(shù)為其提供了明確的病原學(xué)診斷，并為開(kāi)始明確而有效的抗病毒治療提供了實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。結(jié)論建立的人皰疹病毒多重PCR基因芯片技術(shù)，可同時(shí)檢測(cè)7種人皰疹病毒，其檢測(cè)快速簡(jiǎn)便、特異性及敏感性高、高通量，為兒童皰疹性腦炎提供早期、特異的病原學(xué)診斷依據(jù)。

簡(jiǎn)介：ATHESISSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFMASTERSTUDYOFSENSITIVITYANDRELATEDMECHANISMSFORRECOMBINANTHUMANADENOVIRUSP53COMBINEDWITHCISPLATINACTINGONPLATINUMRESISTANTHUMANOVARIANCANCERCELLSCOC1／DDPBYJINGBOWEISUPERVISORDONGMEIHUANG一一一DEPARTMENTOFOBSTETRICSANDGYNECOLOGYTHESECONDAFFILIATEDHOSPITALOFZHENGZHOUUNIVERSITYMAY，2014摘要重組人P53腺病毒聯(lián)合順鉑對(duì)人卵巢癌鉑類耐藥細(xì)胞COCL／DDP的敏感性分析及相關(guān)機(jī)制研究研究生位靜波導(dǎo)師黃冬梅鄭州大學(xué)第二臨床學(xué)院河南鄭州450014摘要背景和目的目前，對(duì)化療藥物耐藥仍然是卵巢癌治療失敗的主要原因。在順鉑聯(lián)合紫杉醇的基礎(chǔ)方案上添加新的二線化療藥物，耐藥或復(fù)發(fā)患者的響應(yīng)率只有不到30％。另外，隨之增加的藥物毒性反應(yīng)及不良反應(yīng)致使患者的耐受性和依從性均降低。由此，針對(duì)耐藥基因的靶向治療就凸顯優(yōu)勢(shì)。由于近80％的卵巢癌患者存在P53基因的突變，所以大部分的基因治療都聚焦于腫瘤抑癌基因P53。但是使用基因轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)將野生型P53再次導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞后，攜帶野生型P53的腫瘤細(xì)胞和突變型P53的腫瘤細(xì)胞哪個(gè)凋亡更明顯，國(guó)內(nèi)外的研究結(jié)果似乎并不一致，也有研究報(bào)道P53的基因治療與細(xì)胞內(nèi)P53的狀態(tài)無(wú)關(guān)。近期有研究認(rèn)為關(guān)于耐藥的基因診斷有可能預(yù)測(cè)預(yù)后，但單獨(dú)的分子靶向治療或許不足以改善晚期卵巢癌患者的預(yù)后。本實(shí)驗(yàn)在不考慮P53狀態(tài)的情況下，利用重組人P53腺病毒RADP53聯(lián)合順鉑作用于人卵巢癌鉑類耐藥細(xì)胞系COCL／DDP，觀察其對(duì)耐藥細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。P73是P53家族成員之一，2個(gè)不同的啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄生成促凋亡的TAP73和抗凋亡的ATAP73亞型，不同亞型在細(xì)胞中的表達(dá)比決定了細(xì)胞生死命運(yùn)。現(xiàn)已證實(shí)顯性負(fù)性的ANP73巨型與腫瘤的化療耐藥密切相關(guān)，并能通過(guò)反饋回路抑制野生型P53和TAP73的促凋亡作用。本研究從基因水平使用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)了RADP53、順鉑及聯(lián)合用藥作用下P73的所有N端亞型表達(dá)情況，探討各亞型在耐

簡(jiǎn)介：輪狀病毒ROTAVIRUSRV是嬰幼兒胃腸炎的主要病原體據(jù)統(tǒng)計(jì)全球每年死于RV感染者約611000RV感染絕大多數(shù)發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家。輪狀病毒屬于呼腸病毒科REOVIRIDAE輪狀病毒屬ROTAVIRUS是一個(gè)直徑約為70NM無(wú)包膜由三層衣殼蛋白組成的正二十面體雙鏈RNA病毒。RV基因組包含11個(gè)分節(jié)段的雙鏈RNA編碼6個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白VP1VP4VP6VP7和6個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白NSP1NSP6。根據(jù)結(jié)構(gòu)蛋白VP6的抗原性差異可將已發(fā)現(xiàn)的輪狀病毒分為AG等7個(gè)組其中A組為引起嬰幼兒腹瀉的主要病原體。作為RV主要結(jié)構(gòu)蛋白VP6在維持病毒形態(tài)、病毒進(jìn)入細(xì)胞、基因組復(fù)制和組裝過(guò)程中作為一個(gè)物理受體具有重要的生物學(xué)功能。隨著研究的不斷深入近年發(fā)現(xiàn)VP6蛋白在免疫保護(hù)反應(yīng)方面也具有重要作用在研制RV重組疫苗中可能具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。重組痘苗病毒T7RNA聚合酶是一瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)由于具有很多優(yōu)于其他表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)而被廣泛地應(yīng)用于表達(dá)外源蛋白。在本實(shí)驗(yàn)中TBCHEN株輪狀病毒的VP6DNA編碼片段插入到原核質(zhì)粒PETL的噬菌體T7啟動(dòng)子和終止子之間獲得重組表達(dá)質(zhì)粒PETVP6。構(gòu)建好的重組表達(dá)質(zhì)粒PETVP6通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞MA104中用攜帶噬菌體T7RNA聚合酶基因的重組痘苗病毒VTF73再感染可在細(xì)胞中檢測(cè)到目的蛋白VP6的表達(dá)。研究結(jié)果還顯示痘苗病毒VTF73感染后細(xì)胞病變較快嚴(yán)重影響了蛋白的表達(dá)量。結(jié)果提示如果能降低痘苗病毒VTF73的致細(xì)胞病變作用而不影響其在細(xì)胞中合成T7RNA聚合酶的能力蛋白可能會(huì)得到高效表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)為研究原核基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)、進(jìn)一步研究VP6的免疫學(xué)特性以及更好地應(yīng)用痘苗病毒T7RNA聚合酶這一瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)提供了重要理論基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：第一部分、肺上皮干祖細(xì)胞的篩選和鑒定目的分離、篩選和鑒定肺上皮干祖細(xì)胞，分析其與肺上皮修復(fù)反應(yīng)的關(guān)系。方法首先從小鼠肺組織中獲取單個(gè)肺細(xì)胞懸液，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD45CD31SCA1STEMCELLANTIGEN1細(xì)胞在正常小鼠肺內(nèi)的表達(dá)水平及其細(xì)胞周期，并采用流式細(xì)胞分選術(shù)從肺單細(xì)胞懸液中篩選出該細(xì)胞群，使用免疫熒光染色對(duì)其具體細(xì)胞成分進(jìn)行鑒別，體外培養(yǎng)評(píng)估其增殖能力，最后通過(guò)病毒病原相關(guān)分子模式PATHOGENASSOCIATEDMOLECULARPATTERNS，PAMP感染模型明確該細(xì)胞群與肺上皮修復(fù)反應(yīng)的關(guān)系。結(jié)果正常小鼠肺內(nèi)有低水平的CD45CD31SCA1細(xì)胞表達(dá)。與CD45CD31SCA1細(xì)胞相比，CD45CD31SCA1細(xì)胞主要處于DNA合成期或合成后期分裂期，且在體外培養(yǎng)過(guò)程中僅CD45CD31SCA1細(xì)胞分裂增殖形成細(xì)胞集落；細(xì)胞免疫熒光染色顯示CD45CD31SCA1細(xì)胞主要由細(xì)支氣管肺泡干細(xì)胞、肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞和CLARA細(xì)胞組成。這些體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明具有增殖能力的CD45CD31SCA1細(xì)胞是一個(gè)異質(zhì)干祖細(xì)胞群。之后體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)在病毒雙鏈RNADSRNA模擬物POLYIC誘導(dǎo)肺上皮細(xì)胞凋亡的同時(shí)，肺CD45CD31SCA1細(xì)胞的表達(dá)水平出現(xiàn)上升，并隨著凋亡程度的加重而逐漸升高；且在此過(guò)程中，CD45CD31SCA1細(xì)胞表達(dá)水平的變化與肺上皮KI67陽(yáng)性細(xì)胞所呈現(xiàn)的動(dòng)力學(xué)十分相似。由此可知POLYIC刺激同時(shí)觸發(fā)了肺上皮的損傷和修復(fù)反應(yīng)，且肺CD45CD31SCA1細(xì)胞參與了肺上皮的再生修復(fù)過(guò)程。結(jié)論肺CD45CD31SCA1細(xì)胞是具有部分祖細(xì)胞特性的異質(zhì)干祖細(xì)胞群，該細(xì)胞群的表達(dá)水平代表了POLYIC刺激下肺上皮組織的再生修復(fù)反應(yīng)。第二部分、香煙煙霧和病毒PAMP聯(lián)合誘導(dǎo)的COPD小鼠模型中肺上皮干祖細(xì)胞表達(dá)和損傷修復(fù)失衡目的觀察COPDCHRONICOBSTRUCTIVEPULMONARYDISEASE肺組織中上皮干祖細(xì)胞的表達(dá)及不同解剖區(qū)域上皮的損傷修復(fù)反應(yīng)。方法通過(guò)香煙煙霧CIGARETTESMOKE，CS和病毒PAMP模擬物POLYIC聯(lián)合暴露建立肺損傷模型，檢測(cè)該模型肺組織中氣道和肺泡的病理改變，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肺CD45CD31SCA1上皮干祖細(xì)胞群在COPD肺組織中的表達(dá)水平，通過(guò)TUNEL和KI67等免疫熒光染色分別觀察氣道和肺泡上皮細(xì)胞的凋亡和增殖情況。結(jié)果香煙煙霧和POLYIC聯(lián)合暴露的小鼠肺組織中出現(xiàn)顯著氣道壁增厚和肺泡結(jié)構(gòu)破壞，是成功模擬了氣道纖維化重建和肺泡稀薄化的COPD模型；在該COPD模型中，肺CD45CD31SCA1上皮干祖細(xì)胞表達(dá)上調(diào)，但與POLYIC組比較其表達(dá)水平明顯下降，表明香煙煙霧抑制了POLYIC誘導(dǎo)的肺上皮干祖細(xì)胞擴(kuò)增；TUNEL染色和免疫熒光染色顯示模型中氣道上皮細(xì)胞以增殖反應(yīng)為主，而肺泡上皮細(xì)胞以凋亡反應(yīng)為主。結(jié)論香煙煙霧和病毒PAMP模擬物POLYIC聯(lián)合暴露誘導(dǎo)的小鼠肺損傷模型是同時(shí)模擬了COPD小氣道纖維化重建和肺泡稀薄化的COPD模型；香煙煙霧抑制了POLYIC誘導(dǎo)的肺CD45CD31SCA1上皮干祖細(xì)胞擴(kuò)增，提示香煙煙霧和POLYIC聯(lián)合暴露刺激通過(guò)影響肺上皮干祖細(xì)胞的表達(dá)導(dǎo)致異常的肺上皮修復(fù)反應(yīng)；在該COPD模型中氣道和肺泡上皮呈現(xiàn)相反的上皮細(xì)胞損傷修復(fù)失衡氣道上皮以增殖反應(yīng)為主，而肺泡上皮則以凋亡反應(yīng)為主，與觀察到的氣道纖維化重建和肺泡稀薄化改變一致，提示肺上皮損傷修復(fù)失衡參與COPD肺組織重建。第三部分、抗病毒先天性免疫對(duì)COPD中肺上皮干祖細(xì)胞和損傷修復(fù)反應(yīng)的影響目的檢測(cè)抗病毒先天性免疫TLR3TOLLLIKERECEPT3和RLHMAVSRIGLIKEHELICASESMITOCHONDRIALANTIVIRALSIGNALINGPROTEIN信號(hào)通路對(duì)COPD肺組織中上皮干祖細(xì)胞表達(dá)和不同解剖區(qū)域上皮損傷修復(fù)反應(yīng)的影響。方法使用野生型WILDTYPE，WT、TLR3基因敲除TLR3及MAVS基因敲除MAVS小鼠重復(fù)香煙煙霧和POLYIC聯(lián)合暴露誘導(dǎo)的COPD模型，檢測(cè)各型小鼠肺組織中氣道和肺泡的病理改變，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD45CD31SCA1肺上皮干祖細(xì)胞的表達(dá)水平，并通過(guò)TUNEL和KI67等免疫熒光染色分別觀察氣道和肺泡上皮細(xì)胞的凋亡和增殖情況。結(jié)果香煙煙霧和POLYIC聯(lián)合暴露后，TLR3和MAVS小鼠肺組織中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度和CD45CD31SCA1細(xì)胞表達(dá)均較WT小鼠明顯下降，敲除MAVS基因同時(shí)逆轉(zhuǎn)了氣道纖維化重建和肺泡稀薄化，而敲除TLR3基因僅改善了氣道增生和纖維化。TUNEL和免疫熒光染色的結(jié)果顯示TLR3和MAVS表達(dá)缺失均同時(shí)抑制了肺上皮細(xì)胞的凋亡和增殖反應(yīng)，但在CSP暴露的TLR3小鼠肺組織中，氣道上皮細(xì)胞凋亡增殖水平幾乎持平，肺泡上皮中增殖細(xì)胞比例明顯低于凋亡細(xì)胞比例；而CSP暴露的MAVS小鼠氣道和肺泡上皮細(xì)胞凋亡增殖水平均接近同一水平，說(shuō)明敲除MAVS基因能夠同時(shí)逆轉(zhuǎn)CSP誘導(dǎo)的氣道上皮過(guò)度修復(fù)和肺泡上皮的修復(fù)不足，而TLR3基因缺失僅抑制了氣道上皮的過(guò)度修復(fù)。結(jié)論在香煙煙霧和POLYIC誘導(dǎo)的COPD模型中，TLR3和RLHMAVS信號(hào)通路參與和促進(jìn)了肺組織炎癥，并通過(guò)調(diào)控肺CD45CD31SCA1上皮干祖細(xì)胞表達(dá)以及上皮細(xì)胞凋亡和增殖反應(yīng)介導(dǎo)肺組織重建，其中，氣道上皮呈現(xiàn)修復(fù)過(guò)度的損傷修復(fù)失衡主要受到TLR3信號(hào)通路的調(diào)控，而肺泡上皮表現(xiàn)為修復(fù)不足的損傷修復(fù)失衡主要受到RLHMAVS信號(hào)通路的調(diào)控。

簡(jiǎn)介：【研究背景及目的】乙型肝炎是一種由乙型肝炎病毒（HEPATITISBVIRUSHBV）引起、對(duì)人類生命健康造成嚴(yán)重威脅的傳染性疾病。HBV感染已經(jīng)成為全球性的公共健康問(wèn)題，它可引起慢性肝病并因可能發(fā)展成肝癌和肝硬化給人們帶來(lái)死亡的風(fēng)險(xiǎn)。據(jù)估計(jì)，在世界范圍內(nèi)有20億人曾經(jīng)感染過(guò)乙肝病毒，在中國(guó)有9300萬(wàn)人為慢性乙肝病毒感染者。一些研究證實(shí)，在HBV感染過(guò)程中，啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和其他順式作用元件通過(guò)CPG島甲基化調(diào)控著病毒RNA的轉(zhuǎn)錄、病毒蛋白的產(chǎn)生和病毒的復(fù)制；CPG島即使低水平的甲基化也保持有降低病毒蛋白產(chǎn)生的能力。還有研究發(fā)現(xiàn)，與基因型B相比，基因型C與侵襲性肝病更為相關(guān)；基因型C患者罹患肝癌和肝硬化的風(fēng)險(xiǎn)比基因型B患者更高。本研究通過(guò)對(duì)中國(guó)患者HBV序列CPG島在基因型B和C中的分布、HBV正常和突變序列間CPG島長(zhǎng)度的差異、HBVCPG島II的遺傳學(xué)特征以及CPG島在不同HBV相關(guān)肝病HBV序列中的密度進(jìn)行分析，目的在于更好地了解CPG島在HBV表觀遺傳調(diào)控機(jī)制中的作用?！静牧吓c方法】用“HBV”、“中國(guó)”和“全基因組”作為關(guān)鍵詞，從美國(guó)國(guó)家生物信息中心基因庫(kù)中檢索收集至2013年10月30日為止的HBV序列。相關(guān)背景資料包括序列長(zhǎng)度、所在區(qū)域、基因型亞基因型、來(lái)源、開(kāi)讀框架定位和基因功能。排除長(zhǎng)度短于3050堿基對(duì)或背景資料不全的HBV序列。320條HBV序列來(lái)自HBV感染患者的血清，涉及5種HBV相關(guān)肝病包括急性乙型肝炎N2681％、慢性乙型肝炎N200625、肝細(xì)胞肝癌N2888、乙型肝炎肝硬化N1856和HBV引起的急慢性肝衰竭N48150。序列含有功能正常的基因或者具有明確定義的突變。應(yīng)用CLUSTALX183和MEGA50程序進(jìn)行多序列比對(duì)和進(jìn)化分析。應(yīng)用METHPRIMER軟件對(duì)HBV的CPG島進(jìn)行預(yù)測(cè)，CPG島分析的參數(shù)設(shè)定為（1）GC含量≥05（2）CPG島觀察與預(yù)期的比值≥06；（3）片段長(zhǎng)度≥100BPS。應(yīng)用SPSS軟件（180版）進(jìn)行獨(dú)立T檢驗(yàn)來(lái)評(píng)估CPG島在HBV相關(guān)肝病基因型B和C間的分布是否存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。P【結(jié)果】1320條序列分為基因型BN82256和基因型CN238744。在基因型B的82條序列中，有28條正常序列和54條突變序列；在基因型C的238條序列中，有74條正常序列和164條突變序列。272的基因型B序列含有常規(guī)CPG島I、II和III，761的基因型C序列僅含有CPG島II和III。146的基因型B和75的基因型C序列含有新見(jiàn)CPG島IV、V和VI。3在基因型B的序列中，正常序列和突變序列間常規(guī)CPG島的長(zhǎng)度存在明顯差異；在基因型C的序列中，這種差異不明顯。在基因型B和C中均觀察到新見(jiàn)CPG島IV，而新見(jiàn)CPG島V和VI只出現(xiàn)在基因型C中，它們的正常序列和突變序列間CPG島的長(zhǎng)度具有明顯差異。4對(duì)CPG島II分析發(fā)現(xiàn)，它可被“截短”和“中斷”?！敖囟獭眳^(qū)域的突變可能與HBV基因的結(jié)構(gòu)或功能異常有關(guān)?；蛐虰序列CPG島II的“中斷”頻率比基因型C的高得多。5對(duì)不同基因型HBV相關(guān)的肝臟疾病分析，發(fā)現(xiàn)來(lái)自肝細(xì)胞癌和乙型肝炎肝硬化的基因型C序列缺乏CPG島I和CPG島IV。【結(jié)論】CPG島在HBV基因型B和C序列中的分布、HBV正常序列和突變序列間CPG島的長(zhǎng)度差異、CPG島II的遺傳學(xué)特征均可能改變CPG島的甲基化狀態(tài)并進(jìn)而影響HBV基因的表達(dá)調(diào)控，導(dǎo)致不同的臨床結(jié)局。

簡(jiǎn)介：疫苗接種是預(yù)防流感最有效的方法，目前投入使用的流感疫苗可分為滅活苗和減毒活苗兩大類滅活苗通過(guò)肌肉注射途徑免疫，能夠誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)血凝素的中和抗體，但無(wú)法刺激鼻腔黏膜產(chǎn)生分泌型抗體，也無(wú)法誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答；減毒活苗冷適應(yīng)減毒活苗通過(guò)鼻吸入的方式免疫，其免疫的方式更接近自然感染的過(guò)程，可充分誘導(dǎo)體液免疫及細(xì)胞免疫應(yīng)答。減毒活苗無(wú)論從免疫途徑還是免疫效果上都優(yōu)于傳統(tǒng)滅活苗。自反向遺傳操作技術(shù)建立以來(lái)，研究者們嘗試過(guò)多種方法開(kāi)發(fā)減毒活苗，降低流感病毒毒力，提高其免疫原性，研究出安全有效的減毒活苗已成為新型流感疫苗的發(fā)展方向。在本研究中，我們根據(jù)A型流感病毒密碼子使用偏嗜性的統(tǒng)計(jì)規(guī)律，在保留NS片段包裝信號(hào)和不影響NS1NS2剪切位點(diǎn)的前提下，選取稀有密碼子對(duì)APUERTICO834H1N1病毒NS1基因內(nèi)部110個(gè)氨基酸區(qū)域進(jìn)行密碼子同義突變改造，將其替換為病毒使用頻率最低的密碼子，全基因合成NS基因，利用12質(zhì)粒反向遺傳操作技術(shù)拯救出含有密碼子去優(yōu)化NS1基因的重組病毒DEOPTIMIZEDNS，DEONS。MDCK細(xì)胞噬斑形成實(shí)驗(yàn)表明，病毒在細(xì)胞上的成斑能力大大減弱；病毒在MDCK細(xì)胞上的生長(zhǎng)曲線表明，其在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制能力比野生型病毒低約1000倍。BALBC小鼠體內(nèi)致病力實(shí)驗(yàn)證明，DEONS病毒不能引起小鼠發(fā)病和死亡，感染第3天病毒在小鼠肺內(nèi)的復(fù)制滴度比野生型病毒低100倍，感染第5天其在小鼠肺內(nèi)的滴度比野生型病毒低1000倍。本研究初步探索了通過(guò)基因組密碼子去優(yōu)化改造途徑降低A型流感病毒毒力的可行性，首次證明流感病毒NS1基因密碼子去優(yōu)化同義突變可以降低病毒毒力，為流感減毒活疫苗的研究提供了新的思路。

簡(jiǎn)介：目的包裝增強(qiáng)型綠色熒光蛋白標(biāo)記的表達(dá)HBAX和HHGF雙基因的慢病毒載體觀察慢病毒感染后對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的影響。方法通過(guò)重疊PCR技術(shù)和GATEWAYTECHNOLOGY技術(shù)構(gòu)建攜帶目的基因的陽(yáng)性質(zhì)粒和儀攜帶綠色熒光蛋白的陰性質(zhì)粒并測(cè)序上述兩種質(zhì)粒分別和輔助質(zhì)粒一同轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞包裝病毒利用熒光顯微鏡來(lái)檢測(cè)病毒滴度。本實(shí)驗(yàn)選取人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC、人胚肺成纖維細(xì)胞HELF和小鼠胚胎成纖維細(xì)胞NIH3T3細(xì)胞作為研究的目的細(xì)胞利用包裝成功的慢病毒感染目的細(xì)胞根據(jù)對(duì)目的細(xì)胞的處理不同試驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組感染了攜帶BAX和HGF雙目的基因的慢病毒、陰性對(duì)照組感染了僅攜帶有綠色熒光蛋白的慢病毒和空白組未做任何處理的正常細(xì)胞3組。RTPCR和WESTERNBLOT檢測(cè)染毒后各組細(xì)胞BAX和HGF的表達(dá)情況在倒置顯微鏡下面觀察3組細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上所發(fā)生的變化MTT法檢測(cè)3組細(xì)胞間的增殖能力是否有差異細(xì)胞劃痕法觀察HUVEC染毒后遷移能力的變化。結(jié)果經(jīng)鑒定慢病毒載體質(zhì)粒構(gòu)建成功利用熒光顯微鏡測(cè)得HBAX和HHGF共表達(dá)慢病毒和僅表達(dá)綠色熒光蛋白的陰性病毒滴度分別為78107TUML和9107TUML。RTPCR和WESTERNBLOT結(jié)果顯示染毒后使HUVEC表達(dá)HGF并且上調(diào)了BAX基因的表達(dá)P＜005。倒置顯微鏡下可見(jiàn)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞變?yōu)殚L(zhǎng)梭形或者不規(guī)則的多角形細(xì)胞表面的突起增多實(shí)驗(yàn)組較之其他兩組細(xì)胞其增殖能力和遷移能力都明顯的提高P＜005。NIH3T3細(xì)胞和HELF染毒后RTPCR和WESTEMBLOT結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組與其他兩組相比BAX和HGF的表達(dá)明顯上調(diào)P＜005倒置顯微鏡下可見(jiàn)陰性對(duì)照組的細(xì)胞與空白組的細(xì)胞生長(zhǎng)正常。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在染毒72H后部分細(xì)胞發(fā)生皺縮體積縮小96H后可見(jiàn)有部分貼壁細(xì)胞脫落MTT結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組較之其他兩組細(xì)胞感染HBAX和HHGF雙基因共表達(dá)慢病毒后的上述兩種細(xì)胞增殖明顯被抑制P＜005。結(jié)論①慢病毒包裝成功并且獲得了具有較高滴度的慢病毒感染液。②HBAX和HHGF雙基因共表達(dá)慢病毒成功感染目的細(xì)胞并有效表達(dá)HUVEC染毒后的增殖和遷移能力顯著提高。染毒后的NIH3T3細(xì)胞和HELF增殖被明顯抑制。

簡(jiǎn)介：目的人巨細(xì)胞病毒（HUMANCYTOMEGALOVIRUS，HCMV）是一種典型的Β皰疹病毒，在人群中廣泛感染，HCMVUL23基因?qū)儆赨S22基因家族成員，它的編碼產(chǎn)物PUL23大小約為33KDA，為病毒皮層組分之一。實(shí)驗(yàn)室前期結(jié)果已經(jīng)表明，PUL23能夠抑制Γ干擾素依賴的JAKSTAT1信號(hào)途徑，抵抗干擾素抗病毒作用，Γ干擾素途徑調(diào)控著上千個(gè)基因，包括多種抗病毒基因的表達(dá)。本課題旨在探討PUL23對(duì)干擾素刺激基因表達(dá)的影響，為闡明PUL23能夠抵抗Γ干擾素抗病毒的分子機(jī)理奠定基礎(chǔ)。方法1）生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)受人巨細(xì)胞病毒調(diào)控的Γ干擾素刺激基因，作為后續(xù)研究的候選基因。2）人巨細(xì)胞病毒TOWNE株和缺失UL23基因的TOWNEDELUL23病毒株分別感染HFF細(xì)胞，Γ干擾素處理前后，采用QPCR技術(shù)檢測(cè)干擾素刺激基因的MRNA表達(dá)水平，分析病毒感染過(guò)程中PUL23對(duì)干擾素刺激基因表達(dá)的影響。結(jié)果1）NEXTBIO平臺(tái)篩選出9個(gè)受Γ干擾素調(diào)控，基因表達(dá)增加改變倍數(shù)較大，并與巨細(xì)胞病毒感染相關(guān)的Γ干擾素刺激基因，IFI44L、IFP35、NMI、IFIT3、STAT1、IRF1、IRF7、OAS1、SP110和1個(gè)對(duì)Γ干擾素信號(hào)途徑具有負(fù)調(diào)控作用的基因UBE2I，作為后續(xù)研究病毒蛋白PUL23調(diào)控的候選基因。2）TOWNE病毒感染組與TOWNEDELUL23病毒感染組相比，QPCR實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明①對(duì)于IFI44L、IFP35、NMI、STAT1基因，Γ干擾素未處理時(shí)，PUL23對(duì)IFI44L、IFP35、NMI、STAT1基因的表達(dá)無(wú)顯著性影響，Γ干擾素處理后，PUL23抑制IFI44L、IFP35、NMI、STAT1基因MRNA表達(dá)；②對(duì)于OAS1、SP110基因，Γ干擾素未處理時(shí)，PUL23促進(jìn)OAS1、SP110基因MRNA表達(dá)，干擾素處理后，PUL23抑制SP110MRNA表達(dá)，但是，PUL23或促進(jìn)或抑制OAS1基因的表達(dá)；③對(duì)于IRF1基因，Γ干擾素處理前后，PUL23均能抑制IRF1基因MRNA表達(dá)；④對(duì)于IRF7、IFIT3基因，Γ干擾素未處理時(shí)，PUL23促進(jìn)IRF7、IFIT3基因MRNA表達(dá)，然而Γ干擾素處理后，PUL23對(duì)IRF7、IFIT3基因的表達(dá)無(wú)顯著性影響；⑤對(duì)于UBE2I基因，Γ干擾素處理前后，PUL23對(duì)UBE2I基因的表達(dá)均無(wú)顯著性影響。結(jié)論人巨細(xì)胞病毒編碼蛋白PUL23可以選擇性調(diào)控干擾素刺激基因的表達(dá)，該研究為揭示PUL23在HCMV感染過(guò)程中的功能奠定了基礎(chǔ)。

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簡(jiǎn)介：研究背景輪狀病毒ROTAVIRUS，RV是世界范圍內(nèi)引起嬰幼兒嚴(yán)重腹瀉的最主要原因，并成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題，特別是在發(fā)展中國(guó)家。在世界各國(guó)，90％以上的嬰幼兒在3歲之前均受到了RV的感染，在5歲以下腹瀉住院患兒中，RV感染病例占20％～70％，5歲以上的兒童幾乎全都感染過(guò)RV。人的一生可多次重復(fù)RV感染，但有癥狀感染主要發(fā)生在3歲以內(nèi)的嬰幼兒。全球每年有近60萬(wàn)兒童死于RV感染性腹瀉，主要是在不發(fā)達(dá)國(guó)家。盡管發(fā)達(dá)國(guó)家因此而死亡的較少，但為此各國(guó)都要承擔(dān)高額的醫(yī)療費(fèi)用。以美國(guó)為例，用于治療RV腹瀉的費(fèi)用每年高達(dá)454億美元。國(guó)內(nèi)研究表明在腹瀉住院兒童中，40％以上是RV感染所致。我國(guó)輪狀病毒死亡數(shù)估計(jì)每年至少達(dá)4萬(wàn)人，成為公共衛(wèi)生資源的主要負(fù)擔(dān)。目前，病毒性腹瀉尚無(wú)特異的抗病毒藥物，而中醫(yī)藥呈現(xiàn)出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。番石榴葉對(duì)輪狀病毒性腹瀉療效確切，能夠顯著的改善腹瀉等癥狀。體外實(shí)驗(yàn)亦證實(shí)番石榴葉能提高M(jìn)A104細(xì)胞對(duì)輪狀病毒的耐受，降低其毒力，破壞輪狀病毒顆粒的外殼和內(nèi)核。發(fā)現(xiàn)不同的成分針對(duì)引起腹瀉的不同機(jī)制，多途徑發(fā)揮止瀉作用。如揮發(fā)油具有鎮(zhèn)痛、抗炎性能；槲皮素能抑制腸道收縮，緩解腸道痙攣，還可減少腸道水分和電解質(zhì)的分泌。本實(shí)驗(yàn)主要研究番石榴葉的有效成分皂苷和揮發(fā)油體外直接抗輪狀病毒的作用。目的利用體外培養(yǎng)及MTF法檢測(cè)番石榴葉中皂苷、揮發(fā)油的體外抗輪狀病毒作用，明確兩者在輪狀病毒感染的預(yù)防和治療作用。方法1、將不同濃度的皂苷作用于MA104細(xì)胞，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，求出其半數(shù)細(xì)胞毒性濃度MEDIANTOXICCONCENTRATION，TC50后，予TC50以下的不同濃度的皂苷對(duì)輪狀病毒感染細(xì)胞前后分別進(jìn)行干預(yù)，檢測(cè)其對(duì)病毒感染細(xì)胞存活的影響，以明確皂苷對(duì)輪狀病毒感染的預(yù)防和治療作用；2、將不同濃度的揮發(fā)油作用于MA104細(xì)胞，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，求出其TC50后，予TC50以下的不同濃度的揮發(fā)油對(duì)輪狀病毒感染細(xì)胞前后分別進(jìn)行干預(yù)，檢測(cè)其對(duì)病毒感染細(xì)胞存活的影響，以明確揮發(fā)油對(duì)輪狀病毒感染的預(yù)防和治療作用。結(jié)果1、細(xì)胞存活率和皂苷濃度間關(guān)系經(jīng)PROBIT回歸分析得到皂苷TC50為11224ΜGND。之后以100ΜGML、75ΜGML、50ΜGML、25ΜGML、1ΜGML預(yù)先作用細(xì)胞，再以RV感染細(xì)胞，或先以RV感染MA104細(xì)胞，再以上述不同濃度皂苷作用細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)48H后，皂苷100ΜGML、75ΜGML時(shí)細(xì)胞病變較其它各組均較輕；MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)皂苷用于抗RV時(shí)，其預(yù)防和治療作用最高抑制率分別為6212％和7798％，半數(shù)抑制濃度50％INHIBITIONCONTRACTION，IC50分別為6383ΜGML和3319ΜGML，治療指數(shù)分別176和338。并且在TC50范圍以下，不論治療或預(yù)防作用，隨著藥物濃度的增加，病毒抑制率明顯升高，呈量效關(guān)系。2、細(xì)胞存活率和揮發(fā)油濃度間關(guān)系經(jīng)PROBIT回歸分析得到揮發(fā)油的TC50為409ΜLML。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在揮發(fā)油預(yù)防作用時(shí)用4ΜLML、2ΜLML、1ΜLML、05ΜLML、025ΜLML分別預(yù)先處理細(xì)胞后，再以RV感染細(xì)胞，培養(yǎng)48小時(shí)后，其中揮發(fā)油4ΜLML組細(xì)胞病變明顯較其它各組輕。MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)揮發(fā)油用于預(yù)防輪狀病毒感染隨著藥物濃度的增加，RV的抑制率增加，表現(xiàn)出量效關(guān)系，其IC50為272ΜLML，治療指數(shù)為150在揮發(fā)油治療作用時(shí)，先用RV感染細(xì)胞后，再用不同濃度藥物干預(yù)，發(fā)現(xiàn)揮發(fā)油同樣表現(xiàn)出很好的抗病毒作用，其對(duì)RV的抑制率高達(dá)8655％，IC50為114ΜLML，治療指數(shù)為359。在藥物濃度和病毒抑制率上同樣表現(xiàn)出量效關(guān)系。結(jié)論番石榴葉中有效成分皂苷、揮發(fā)油具有良好的體外抗輪狀病毒的作用。

簡(jiǎn)介：目的通過(guò)BCAI量表觀察老年患者手術(shù)前后認(rèn)知功能變化。方法ASAⅠ～Ⅱ級(jí)60歲以上，全身麻醉下行擇期腹部手術(shù)患者34例（男18例，女16例），分別于術(shù)前1天，術(shù)后7天通過(guò)老年成套神經(jīng)心理測(cè)BCAI驗(yàn)實(shí)施認(rèn)知功能測(cè)定，采用1SD法評(píng)定研究對(duì)象的術(shù)后認(rèn)知功能受損及POCD的發(fā)生情況并比較患者一般情況。結(jié)果34例病人中有3例未能進(jìn)行術(shù)后認(rèn)知功能檢測(cè)，1例術(shù)后第二天發(fā)生譫妄都被剔除。其余30例病人中有12例病人兩項(xiàng)認(rèn)知功能檢測(cè)術(shù)后比術(shù)前下降一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差，判定為認(rèn)知功能障礙組，其余為非認(rèn)知障礙組。認(rèn)知障礙組與非認(rèn)知障礙組術(shù)前一般狀況比較發(fā)現(xiàn)年齡差別有統(tǒng)計(jì)意義（P＜001）。性別、文化程度、MMSE、手術(shù)時(shí)間評(píng)分差別無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P＞005。結(jié)論BCAI測(cè)驗(yàn)顯示術(shù)后一周內(nèi)有40％病人發(fā)生認(rèn)知功能下降，并且認(rèn)知功能下降與年齡有關(guān)。目的觀測(cè)老年患者麻醉手術(shù)前后血小板AΒ、Β分泌酶、Α分泌酶、APP比值的變化及其與POCD的關(guān)系。方法上述病人根據(jù)是否發(fā)生認(rèn)知功能障礙者分為認(rèn)知障礙組（N12例），非認(rèn)知障礙組（N18例），在手術(shù)前1天和術(shù)后7采靜脈血13ML采用WESTERNBLOT法分析每組手術(shù)前后血小板AΒ、Β分泌酶、Α分泌酶、APP比值表達(dá)變化。結(jié)果認(rèn)知障礙組AΒ術(shù)后比術(shù)前顯著增高P＜005，非認(rèn)知障礙組術(shù)后與術(shù)前相比無(wú)顯著差異，認(rèn)知障礙組與非認(rèn)知障礙組ADAMACTI值在自身術(shù)前與術(shù)后相比均無(wú)顯著差異，。對(duì)于Β分泌酶和APP比值認(rèn)知障礙組術(shù)后比術(shù)前顯著降低P＜O05，非認(rèn)知障礙組術(shù)后與術(shù)前相比無(wú)顯著差異。結(jié)論；POCD患者手術(shù)前后血小板AΒ、Β分泌酶和血小板APP比值明顯變化。