簡(jiǎn)介：肝移植是目前發(fā)生肝功能衰竭病人的最好治療途徑，但是由于受到器官短缺的限制，且醫(yī)療費(fèi)用高昂，需要終身抑制免疫功能，因此肝移植難以受惠于更多肝病患者?；诟杉?xì)胞和生物材料在器官再生方面的迅速發(fā)展，尋找合適的生物材料編織成一種可支撐干細(xì)胞的支架是目前肝臟組織工程學(xué)需解決的科學(xué)問題。HCCS的合成基于膠原蛋白和殼聚糖的交聯(lián)作用，聯(lián)合HGF后進(jìn)一步分析材料學(xué)綜合特性。AFP，ALB和HNF4A基因表達(dá)量用于分析BMSCS的分化情況PERIODICSCHIFF染色用于評(píng)估糖原合成CK18和ALB的免疫熒光檢測(cè)評(píng)估干細(xì)胞分化程度。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步開展了搭載HGF的HCCS聯(lián)合BMSCS動(dòng)物體內(nèi)移植實(shí)驗(yàn)。觀察了移植組織CK18免疫組化和CK19免疫熒光。檢測(cè)術(shù)后兩周移植組織ALB，CYP2C9及UGT2的含量。第二部分實(shí)驗(yàn)中利用3D生物打印機(jī)編織了一種3D肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞水凝膠支架進(jìn)行肝臟組織工程學(xué)研究。3D水凝膠在體外實(shí)驗(yàn)中被檢測(cè)到具有良好的生物相容性。在SD大鼠體內(nèi)開展移植實(shí)驗(yàn)，對(duì)照組，水凝膠組，水凝膠HL7702細(xì)胞和水凝膠HGF分別被植入行可致死量的34大部分肝臟切除后的大鼠肝臟內(nèi)。術(shù)后1天、5天、10天檢測(cè)不同組別大鼠血清ALT，ALB，AST及總膽紅素含量，進(jìn)行移植組織中CYP1A2，CYP2C9，AGST和UGT2含量進(jìn)行比較。2周后觀察移植組織形態(tài)。移植組織取材后行HE染色，免疫組化CK18和CKIT進(jìn)行觀察比較。比較各組大鼠生存曲線變化情況。第三部分實(shí)驗(yàn)中利用3D生物打印機(jī)編織了一種3D分化的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞水凝膠支架進(jìn)行肝臟組織工程學(xué)研究。利用3D生物打印技術(shù)在三維環(huán)境下規(guī)則種植和培養(yǎng)分化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，在水凝膠的幫助下在體外形成類似肝臟三維結(jié)構(gòu)形態(tài)，可持續(xù)發(fā)揮肝臟所特有的功能。QPCR用于檢測(cè)干細(xì)胞分化后ALB，HNF4A和AFP的表達(dá)PERIODICSCHIFF染色用于評(píng)價(jià)干細(xì)胞分化后糖原的合成CK18免疫熒光染色觀察細(xì)胞分化程度。MTT評(píng)價(jià)水凝膠3D生物打印后的生物相容性。在3天、7天和10天檢測(cè)打印組織的體外合成GST，ALB和CYP2C9水平。最后將3D打印組織進(jìn)行SD大鼠皮下移植進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。分別在2周和4周定量檢測(cè)移植組織中ALB，CYP2C9和GST的含量。分別在2周和4周檢測(cè)不同組別中的ALB、AFP和HNF4A的MRNA表達(dá)量。各組移植組織在2周和4周分別取材后行免疫組化CK18和CKIT進(jìn)行觀察比較。傅立葉紅外光譜，熱重分析，降解速率測(cè)定，力學(xué)分析和溶脹分析結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)所用的合成材料性能良好。干細(xì)胞分化后AFP，ALB和HNF4A的MRNA表達(dá)量顯著增高，糖原合成顯著增多，CK18表達(dá)顯著增強(qiáng)。移植組織切片在偏振光顯微鏡下觀察到有新生組織，CK19免疫組化、CK18免疫熒光表達(dá)陽(yáng)性。ALB，CYP2C9和UGT2的含量在搭載干細(xì)胞組中表達(dá)顯著增多。3D生物打印細(xì)胞水凝膠支架并不影響細(xì)胞的活力。植入3D打印肝臟組織后，血清ALT，ALB，AST及總膽紅素，移植組織中CYP1A2，CYP2C9，AGST和UGT2的水平發(fā)生顯著改善P＜005。移植組織的HE染色，免疫組化CK18和CKIT進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn)3D打印組可形成形態(tài)規(guī)則，結(jié)構(gòu)清晰可見的肝臟微單元。各組大鼠的生存曲線比較發(fā)現(xiàn)3D打印組的中位生存期要好于其余各組且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＜005）。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化培養(yǎng)后ALB、HNF4A和AFP的MRNA表達(dá)量變化顯著改變，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＜005）。分化后CK18表達(dá)陽(yáng)性，PSA染色陽(yáng)性。三維打印與二維培養(yǎng)、混合培養(yǎng)的生物相容性比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3D打印后ALB、GST和CYP2C9的含量在植入3天，7天和10天明顯改善P＜005。經(jīng)3D打印后再生的肝臟微單元形態(tài)規(guī)則，結(jié)構(gòu)清晰可見。移植組織中ALB、AFP和HNF4A的MRNA表達(dá)量明顯改善。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果3D打印組的ALB、GST和CYP2C9的含量在2周及4周與對(duì)照組相比明顯改善P＜005。搭載肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的膠原殼聚糖支架聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)移植后形態(tài)規(guī)則，結(jié)構(gòu)完整，可持續(xù)穩(wěn)定發(fā)揮肝臟特殊功能。3D生物打印肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞及分化的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可重建肝臟類似組織，是具有潛力的一種肝臟再生方式并且具有巨大的潛力改善肝功能以及用于肝臟體外疾病模型的研究。

簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)工程碩士論文上海交通大學(xué)工程碩士專業(yè)學(xué)位論文上海交通大學(xué)工程碩士專業(yè)學(xué)位論文以生物工程實(shí)踐活動(dòng)為載體培養(yǎng)中學(xué)生創(chuàng)新實(shí)踐能力以生物工程實(shí)踐活動(dòng)為載體培養(yǎng)中學(xué)生創(chuàng)新實(shí)踐能力學(xué)校校上海交通大學(xué)上海交通大學(xué)院系系生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院班級(jí)級(jí)生物工程生物工程學(xué)號(hào)號(hào)1100802011工程碩士生余穎湞工程碩士生余穎湞工程領(lǐng)域工程領(lǐng)域生物工程生物工程導(dǎo)師Ⅰ師Ⅰ彭華松彭華松導(dǎo)師Ⅱ師Ⅱ姜雅風(fēng)姜雅風(fēng)上海交通大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院上海交通大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院2012年10月8日上海交通大學(xué)工程碩士論文上海交通大學(xué)上海交通大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)上海交通大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密保密□，在年解密后適用本授權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期年月日日期年月日

簡(jiǎn)介：分類號(hào)UDCD9121342學(xué)位論文生物基因工程技術(shù)行政規(guī)制的立法研究作者姓名指導(dǎo)教師申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別學(xué)科專業(yè)名稱論文提交日期學(xué)位授予日期評(píng)閱人張立志楊麗娟副教授東北大學(xué)文法學(xué)院碩上學(xué)科類別法學(xué)憲法學(xué)與行政法學(xué)2011年6月論文答辯日期2011年6月2011年7月答辯委員會(huì)主席楊玉凱包秋玉、顧海波東北大學(xué)2011年6月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是在導(dǎo)師的指導(dǎo)下完成的。論文中取得的研究成果除加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包括本人為獲得其他學(xué)位而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作J，明確的說(shuō)明并表示謝也J冒、O學(xué)位論文作者簽名日期學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)本學(xué)位論文作者和指導(dǎo)教師完全了解東北大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定即學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人同意東北大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索、交流。作者和導(dǎo)師同意網(wǎng)上交流的時(shí)間為作者獲得學(xué)位后半年口一年口一年半口兩學(xué)位論文作者簽名簽字日期矽／／導(dǎo)師簽名簽字日期ⅥF『I6∥7礙1F

簡(jiǎn)介：8RLLLLIIIIIIIILLIIILY3278239多乏京倆和醋學(xué)院中國(guó)醬琢甜芬既博士研究生學(xué)位論文北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院研究生院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士研究生學(xué)位論文目錄摘要2ABSTRACT4第一部分生物工程化人唾液腺類器官構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)研究7前言7日U舌J7第一章生物工程化人唾液腺類器官的體外重構(gòu)101實(shí)驗(yàn)組織和細(xì)胞102實(shí)驗(yàn)試劑與耗材103主要儀器124實(shí)驗(yàn)方法125數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)196實(shí)驗(yàn)結(jié)果197討論22第一部分第一章附錄26第二章生物工程化人唾液腺類器官構(gòu)建的體內(nèi)研究一481實(shí)驗(yàn)組織、細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物482實(shí)驗(yàn)試劑483實(shí)驗(yàn)儀器484實(shí)驗(yàn)方法485實(shí)驗(yàn)結(jié)果506討侖51第一部分第二章附圖54第一部分總結(jié)63第一部分參考文獻(xiàn)64綜述72唾液腺調(diào)控信號(hào)通路的相關(guān)研究72綜述參考文獻(xiàn)77第二部分絲線結(jié)扎延遲一新型有效的皮瓣外科延遲技術(shù)81摘要81ABSTRACT82前言831患者和方法832結(jié)果863典型病例864討念885結(jié)侖89第二部分參考文獻(xiàn)90縮略詞92致謝94獨(dú)創(chuàng)性聲明一95第1頁(yè)

簡(jiǎn)介：研究背景細(xì)胞是生命結(jié)構(gòu)和功能的基本單位，生物打印技術(shù)將細(xì)胞作為生物墨水打印構(gòu)建組織和器官，標(biāo)志著3D打印技術(shù)與生命科學(xué)的真正融合。與通常3D打印技術(shù)強(qiáng)調(diào)產(chǎn)品的制造精度和機(jī)械強(qiáng)度不同，生物打印技術(shù)更多的考慮的是細(xì)胞生物學(xué)表現(xiàn)。生物打印平臺(tái)的構(gòu)建、打印方案的設(shè)計(jì)和打印后產(chǎn)品的評(píng)價(jià)都圍繞著細(xì)胞展開。由于生命科學(xué)極端復(fù)雜、多變，人類對(duì)細(xì)胞的理解十分粗淺，有太多的未知等待著探索，即使在科技發(fā)展日新月異的今天，生物打印技術(shù)仍然處在萌芽階段，現(xiàn)階段生物打印技術(shù)的研發(fā)與應(yīng)用仍然屬于概念驗(yàn)證，距離實(shí)現(xiàn)具備生理功能的組織、器官的人工打印再造的目標(biāo)仍有很長(zhǎng)的路要走。生物打印平臺(tái)的建立是實(shí)現(xiàn)生物制造的必要條件，亦是生物打印領(lǐng)域內(nèi)面臨諸多挑戰(zhàn)之一。生物打印機(jī)絕不是簡(jiǎn)簡(jiǎn)單單堆砌細(xì)胞和生物材料的裝置，打印平臺(tái)的建立代表了細(xì)胞生物學(xué)、生物材料學(xué)、自動(dòng)控制、信息學(xué)等諸多學(xué)科高水平交叉綜合應(yīng)用的實(shí)力，體現(xiàn)了對(duì)生物打印核心技術(shù)的掌握。目前生物打印平臺(tái)的搭建技術(shù)并不成熟，根據(jù)打印的細(xì)胞、生物材料以及打印的目的不同，生物打印平臺(tái)構(gòu)建形式也多種多樣。世界上僅有少數(shù)幾個(gè)發(fā)達(dá)國(guó)家有能力開發(fā)商品化細(xì)胞生物打印機(jī)，雖然這種生物打印機(jī)具有產(chǎn)品集成化程度高，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，但由于打印材料有限，打印平臺(tái)軟硬件受專利保護(hù)，無(wú)法根據(jù)打印實(shí)際需要進(jìn)行參數(shù)修改和軟硬件升級(jí)、優(yōu)化，商品化細(xì)胞生物打印機(jī)并未得到廣泛應(yīng)用。關(guān)節(jié)軟骨由軟骨細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成，沒有血管、神經(jīng)和淋巴，幾乎沒有自我修復(fù)能力。一旦發(fā)生軟骨損傷往往導(dǎo)致關(guān)節(jié)功能不可逆損害，最終引起骨關(guān)節(jié)炎發(fā)生，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量。軟骨損傷修復(fù)尚無(wú)理想的治療手段，軟骨組織工程聯(lián)合應(yīng)用生命科學(xué)和工程制造的方法人工合成軟骨組織，是當(dāng)前最有希望解決軟骨缺損修復(fù)困境的方法。分層構(gòu)建組織工程軟骨是軟骨組織工程領(lǐng)域內(nèi)的研究熱點(diǎn)，強(qiáng)調(diào)從結(jié)構(gòu)和功能上模擬天然軟骨分層變化的規(guī)律。在哺乳動(dòng)物關(guān)節(jié)軟骨組織中，都存在著軟骨細(xì)胞密度由軟骨淺層至深層成梯度下降的分布規(guī)律，這是關(guān)節(jié)軟骨發(fā)育和力學(xué)環(huán)境共同作用的結(jié)果，是關(guān)節(jié)軟骨重要的分層結(jié)構(gòu)特點(diǎn)之一。復(fù)習(xí)文獻(xiàn)，國(guó)內(nèi)外尚無(wú)研究關(guān)注構(gòu)建具備仿生軟骨細(xì)胞密度梯度分布規(guī)律的組織工程軟骨。本研究期望自主建立擠壓式水凝膠細(xì)胞生物打印機(jī)驗(yàn)證平臺(tái)，初步掌握3D生物打印核心技術(shù)，嘗試通過生物打印技術(shù)構(gòu)建具備仿生軟骨細(xì)胞密度梯度分布的組織工程軟骨，驗(yàn)證生物打印技術(shù)在軟骨組織工程中的應(yīng)用，觀察軟骨細(xì)胞密度梯度分布生物學(xué)作用，探索一種分層構(gòu)建組織工程軟骨的新策略。方法本研究利用開源軟硬件資料嘗試自主搭建擠壓式水凝膠生物打印驗(yàn)證平臺(tái)，硬件系統(tǒng)包括PRUSAI3三維打印機(jī)移動(dòng)系統(tǒng)，數(shù)控微量凝膠擠壓系統(tǒng)；軟件應(yīng)用包括三維電腦輔助設(shè)計(jì)軟件（CAD軟件）SOLIDWKS、切片軟件SLIC3R、打印機(jī)上位控制軟件REPETIERHOST；選用3ML螺旋接口注射器作為水凝膠容器（生物打印墨水墨盒），25＃平頭針頭作為擠壓成型噴頭，10％豬膝關(guān)節(jié)軟骨II型膠原蛋白鹽酸（015M）水溶膠作為打印墨水；安裝PRUSAI3三維打印機(jī)移動(dòng)系統(tǒng)和數(shù)控微量凝膠擠壓系統(tǒng)構(gòu)成擠壓式水凝膠生物打印驗(yàn)證平臺(tái)，使用SOLIDWKS軟件設(shè)計(jì)三維實(shí)體模型，在切片軟件SLIC3R中設(shè)置打印層厚、打印條帶走形方向及打印速度等參數(shù)，分割三維實(shí)體模型生成連續(xù)的二維輪廓，生物打印機(jī)在生成的GCODE代碼文件控制下完成水凝膠打印，打印成型的II型膠原溶膠塊置于37℃孵箱內(nèi)30分鐘完成交聯(lián)；本研究通過生物打印技術(shù)構(gòu)建具備仿生軟骨細(xì)胞密度梯度分布的組織工程軟骨，實(shí)驗(yàn)參考正常成人膝關(guān)節(jié)股骨髁軟骨中軟骨細(xì)胞總體密度約為1107CELLML，關(guān)節(jié)軟骨淺、中、深三層細(xì)胞密度之比約321，使用復(fù)合不同軟骨細(xì)胞密度的10II型膠原蛋白水溶膠作為生物墨水，設(shè)計(jì)A組（細(xì)胞總體密度約為2107CELLML）、B組（細(xì)胞總體密度約為1107CELLML）、C組（細(xì)胞總體密度約為05107CELLML）三組組織工程軟骨，每組分別構(gòu)建具有仿生軟骨細(xì)胞密度梯度分布和細(xì)胞均勻分布的兩類細(xì)胞分布形式組織工程軟骨，體外培養(yǎng)，分別于第0、1、2、3周取材，進(jìn)行細(xì)胞學(xué)、生化、組織學(xué)等相關(guān)檢測(cè)，對(duì)比分析仿生軟骨細(xì)胞密度梯度分布和細(xì)胞均勻分布的兩類組織工程軟骨，驗(yàn)證生物打印技術(shù)，觀察仿生細(xì)胞密度梯度分布的生物學(xué)意義。結(jié)果擠壓式水凝膠生物3D打印驗(yàn)證平臺(tái)得到初步建立，擠壓頭與三維運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)匹配，系統(tǒng)運(yùn)行平穩(wěn)，打印過程全程可控，通過優(yōu)化打印參數(shù)，3D細(xì)胞生物打印過程對(duì)細(xì)胞活性無(wú)明顯影響；擠壓式水凝膠生物3D打印平臺(tái)能夠?qū)崿F(xiàn)仿生軟骨細(xì)胞密度梯度分布組織工程軟骨模型的構(gòu)建，組織工程軟骨體外培養(yǎng)3周，RTQPCR結(jié)果顯示組織工程軟骨中軟骨細(xì)胞基因COL1A1持續(xù)低水平表達(dá)且出現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì)，基因COL2A1和ACAN表達(dá)水平隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)呈上調(diào)趨勢(shì)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；核酸定量法測(cè)定組織工程軟骨細(xì)胞總量結(jié)果顯示各時(shí)間點(diǎn)A、B、C三組中兩類組織工程軟骨（細(xì)胞均勻分布組織塊與細(xì)胞梯度分布組織塊）細(xì)胞總量無(wú)統(tǒng)計(jì)差異，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)各組組織工程軟骨細(xì)胞總量均出現(xiàn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的下降趨勢(shì)；組織工程軟骨樣本GAG定量結(jié)果顯示體外培養(yǎng)第1周，A、B、C三組GAG總量與支架中細(xì)胞總體密度呈正相關(guān)，A組GAG含量最高，C組最低；培養(yǎng)第2、3周，C組GAG總量仍然最低，A組和B組GAG含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，為評(píng)估單個(gè)細(xì)胞GAG合成活性，分別將各組GAG總量與細(xì)胞總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)化處理，體外培養(yǎng)第1周，各組間單細(xì)胞GAG合成量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，在第2、3周，A組單細(xì)胞GAG合成量最低，B組具有最高的單細(xì)胞GAG合成量，B組中兩類細(xì)胞分布組織塊單細(xì)胞GAG合成量無(wú)統(tǒng)計(jì)差異，但B組細(xì)胞密度梯度分布組織塊單細(xì)胞GAG合成量與A、C兩組有統(tǒng)計(jì)差異，培養(yǎng)第3周，B、C兩組中細(xì)胞均勻分布組織塊單細(xì)胞GAG合成量有統(tǒng)計(jì)差異；免疫組化染色及阿爾新蘭染色結(jié)果顯示免疫組化陽(yáng)性染色細(xì)胞呈棕黃色，免疫組化陰性染色細(xì)胞呈藍(lán)色，GAG成分被阿爾新蘭染成藍(lán)色，組織工程軟骨中絕大多數(shù)軟骨細(xì)胞表現(xiàn)為II型膠原蛋白陽(yáng)性染色，一部分軟骨細(xì)胞表現(xiàn)為PRG4陽(yáng)性，只有少數(shù)軟骨細(xì)胞出現(xiàn)I型膠原陽(yáng)性染色，細(xì)胞密度梯度組軟骨細(xì)胞新和成的II型膠原蛋白、PRG4和GAG成分呈現(xiàn)梯度分布規(guī)律，由淺層至深層逐漸減少。結(jié)論在熟悉并掌握生物3D打印相關(guān)基本原理和各系統(tǒng)軟硬件組成基礎(chǔ)之上，綜合應(yīng)用機(jī)械自動(dòng)控制技術(shù)和生命科學(xué)理論，能夠根據(jù)具體生物墨水和實(shí)際打印需要，利用開源軟硬件資料自主設(shè)計(jì)并建立擠壓式水凝膠生物打印驗(yàn)證平臺(tái)，通過仿生細(xì)胞分布組織工程軟骨模型的建立，驗(yàn)證了擠壓式水凝膠生物打印驗(yàn)證平臺(tái)能夠?qū)崿F(xiàn)軟骨細(xì)胞在水凝膠支架中精確的空間定位，通過優(yōu)化支架中細(xì)胞種植密度和分布模式能夠提高細(xì)胞活性，研究結(jié)果表明生物打印仿生密度梯度分布組織工程軟骨是一種分層構(gòu)建組織工程軟骨的新策略。

簡(jiǎn)介：背景當(dāng)今，自體腘繩肌腱（半腱肌腱股薄肌腱）已成為前交叉韌帶（ACL）重建的標(biāo)準(zhǔn)移植物，而對(duì)于人體腘繩肌腱移植后的組織學(xué)轉(zhuǎn)歸仍然知之甚少。同時(shí)，隨著同種異體肌腱組織在ACL重建手術(shù)中的應(yīng)用日益增多，越來(lái)越迫切地需要探索提高異體肌腱移植物重建效果的方案，以達(dá)到與自體肌腱移植物類似的效果。因此深入了解自體肌腱組織重建ACL后的組織學(xué)轉(zhuǎn)歸方式、影響因素及相關(guān)機(jī)制，有助于探索促進(jìn)異體肌腱移植物良好轉(zhuǎn)歸的技術(shù)手段。本研究擬通過脫細(xì)胞方法制備特定酸堿度微環(huán)境的同種異體脫細(xì)胞肌腱，并且聯(lián)合自體肌腱干細(xì)胞（TDSCS），以取得理想的ACL重建效果。同時(shí)，通過對(duì)人體半腱肌腱重建ACL后的移植物樣本進(jìn)行組織學(xué)分析，觀察其轉(zhuǎn)歸情況。目的1制備PH值改良的同種異體脫細(xì)胞肌腱并檢測(cè)其基本特性；2觀察PH值改良的同種異體脫細(xì)胞肌腱重建ACL的效果；3觀察PH值改良的同種異體脫細(xì)胞肌腱聯(lián)合自體TDSCS重建ACL的效果；4探討人自體半腱肌腱重建ACL后的中、長(zhǎng)期組織學(xué)轉(zhuǎn)歸。方法1應(yīng)用以胰蛋白酶TRITONX100過氧乙酸為基礎(chǔ)、輔以碳酸氫鈉中和處理，制備PH值改良的兔同種異體脫細(xì)胞半腱肌肌腱，并通過光鏡電鏡組織學(xué)檢測(cè)、力學(xué)測(cè)試、細(xì)胞相容性測(cè)試檢測(cè)其基本特性；2應(yīng)用該P(yáng)H值改良的同種異體脫細(xì)胞半腱肌腱重建兔ACL，與同種異體半腱肌腱移植物進(jìn)行對(duì)照研究，通過組織學(xué)、力學(xué)、MICROCT等技術(shù)手段分析其重建效果；3聯(lián)合應(yīng)用自體TDSCS與PH值改良的同種異體脫細(xì)胞半腱肌腱重建兔ACL，與同種異體半腱肌腱移植物進(jìn)行對(duì)照研究，通過組織學(xué)、力學(xué)、MICROCT等技術(shù)手段分析其重建效果，并通過LVEGFP轉(zhuǎn)染標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞示蹤研究；4通過光鏡透射電鏡檢測(cè)手段，分析人自體半腱肌腱重建ACL后的組織學(xué)轉(zhuǎn)歸，進(jìn)行中遠(yuǎn)期移植物的對(duì)照研究。結(jié)果1應(yīng)用胰蛋白酶TRITONX100過氧乙酸碳酸氫鈉脫細(xì)胞方案，制備得到了力學(xué)性能保留完好、細(xì)胞相容性良好、疏松多孔、PH值調(diào)定在72左右的同種異體脫細(xì)胞肌腱材料；2該脫細(xì)胞肌腱重建ACL后在以下方面優(yōu)與普通異體肌腱術(shù)后第2、4周關(guān)節(jié)腔部分及骨隧道部分細(xì)胞、血管長(zhǎng)入；212周膠原重塑及腱骨愈合；術(shù)后12周失效載荷及剛度；術(shù)后12周隧道壁骨密度。3該脫細(xì)胞肌腱聯(lián)合自體TDSCS重建ACL后在以下方面優(yōu)與普通異體肌腱術(shù)后第2、4周關(guān)節(jié)腔部分及骨隧道部分細(xì)胞、血管長(zhǎng)入；212周膠原重塑及腱骨愈合；術(shù)后12周失效載荷及剛度；術(shù)后4、8、12周隧道壁骨密度及8、12周BVTV；術(shù)后412周均追蹤到EGFP陽(yáng)性細(xì)胞。4人半腱肌腱移植物的中長(zhǎng)期組中均觀察到細(xì)胞化水平、血管化水平不成熟、存在組織化生狀態(tài)的情況；兩組均具有相當(dāng)高比例的呈雙峰分布類型的膠原構(gòu)型及較低比例的呈單峰分布的膠原構(gòu)型。相關(guān)指標(biāo)統(tǒng)計(jì)分析未見差異。結(jié)論1PH值改良的同種異體脫細(xì)胞肌腱的細(xì)胞相容性優(yōu)于改良前；2PH值改良的同種異體脫細(xì)胞肌腱重建ACL的效果優(yōu)于普通異體肌腱；3PH值改良的同種異體脫細(xì)胞肌腱聯(lián)合自體TDSCS，能進(jìn)一步提高ACL重建效果；自體TDSCS可于體內(nèi)成功整合到該肌腱移植物中；4人體半腱肌腱重建的中遠(yuǎn)期ACL移植物中，雙峰分布的膠原構(gòu)型廣泛存在，該膠原構(gòu)型接近正常的ACL。

簡(jiǎn)介：近年來(lái)，大量肝病患者因肝癌、急性肝衰竭等疾病最終導(dǎo)致死亡，雖然肝移植是目前臨床治療肝癌和肝衰竭的最佳方法，但是供體器官的嚴(yán)重短缺及排斥反應(yīng)限制了肝移植的發(fā)展。肝組織工程是在體外利用生物相容性良好且可降解的生物材料與具有肝功能的細(xì)胞復(fù)合，構(gòu)建具有類似肝臟功能的人工器官。由于高分子聚合物直接加工制備的支架材料具有不穩(wěn)定性，因此通過加入交聯(lián)劑，從而使其穩(wěn)定性和力學(xué)性能提高。京尼平作為天然的交聯(lián)劑具有保肝的作用；甘草酸是由于肝臟具有特異性的受體而具有肝靶向性，同時(shí)也具有肝保護(hù)作用，因此可作為交聯(lián)劑應(yīng)用于肝組織工程。分別用京尼平、戊二醛和水溶性碳二亞胺EDC交聯(lián)殼聚糖明膠材料，制備得到預(yù)成型的支架材料。通過傅立葉變換紅外光譜、差示掃描量熱和掃描電子顯微鏡對(duì)支架材料進(jìn)行表征分析，以評(píng)價(jià)其交聯(lián)效果并觀察其表面形貌。結(jié)果表明京尼平交聯(lián)的殼聚糖明膠支架材料相比于戊二醛和EDC交聯(lián)的支架材料，具有更高的交聯(lián)度和更合適的孔徑大小。將HEPG2細(xì)胞三維3D培養(yǎng)于京尼平、戊二醛和EDC交聯(lián)的殼聚糖明膠支架材料中，并以傳統(tǒng)的二維2D培養(yǎng)作為對(duì)照，分別進(jìn)行細(xì)胞活性、生物相容性、肝功能表達(dá)試驗(yàn)并觀察細(xì)胞培養(yǎng)于材料中的形態(tài)特征。結(jié)果表明，相比于傳統(tǒng)的2D培養(yǎng)，在3D培養(yǎng)中的細(xì)胞具有較強(qiáng)的活性，說(shuō)明京尼平交聯(lián)的支架材料具有良好的生物相容性并能維持肝功能的表達(dá)。而且HEPG2細(xì)胞培養(yǎng)于1％京尼平交聯(lián)的殼聚糖明膠支架材料相比于其他支架材料組更適合細(xì)胞生長(zhǎng)且細(xì)胞可以大量滲透到材料內(nèi)部生長(zhǎng)，由此表明1京尼平交聯(lián)的殼聚糖明膠支架材料的孔徑可以為細(xì)胞提供較好的氧氣及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的交換，更適合細(xì)胞生長(zhǎng)。制備甘草酸海藻酸鈣水凝膠，作為可注射型原位水凝膠應(yīng)用于肝組織工程。通過傅立葉變換紅外光譜、差示掃描量熱、X射線衍射、掃描電子顯微鏡和流變學(xué)試驗(yàn)對(duì)甘草酸海藻酸鈣水凝膠進(jìn)行表征分析，以評(píng)價(jià)其水凝膠的形成機(jī)理及凝膠性能。結(jié)果表明甘草酸海藻酸鈣水凝膠通過甘草酸的螯合作用將納米碳酸鈣中的鈣離子緩慢釋放，從而與海藻酸鈉反應(yīng)形成均一的具有三維網(wǎng)孔狀結(jié)構(gòu)的水凝膠，且該水凝膠具有較好的粘彈性和力學(xué)強(qiáng)度。將HEPG2細(xì)胞包封于不同配方的甘草酸海藻酸鈣水凝膠中3D培養(yǎng)，以2D培養(yǎng)作為對(duì)照。分別進(jìn)行細(xì)胞活性、生物相容性、肝功能表達(dá)試驗(yàn)并觀察細(xì)胞培養(yǎng)于水凝膠材料中的形貌特征。結(jié)果表明，相比于2D培養(yǎng)，3D包封于甘草酸海藻酸鈣水凝膠中的細(xì)胞具有較強(qiáng)的生物活性及良好的生物相容性，并能維持肝功能的表達(dá)。尤其以15海藻酸鈉SA03?C0307甘草酸GA配方制備的水凝膠更適合HEPG2細(xì)胞3D包封培養(yǎng)。

簡(jiǎn)介：中南大學(xué)博士學(xué)位論文資源加工與生物工程學(xué)術(shù)信息服務(wù)系統(tǒng)的研究與構(gòu)建姓名付玉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)礦物加工工程指導(dǎo)教師邱冠周馮其明20080101博士學(xué)位論文中文摘要最后，本論文并對(duì)系統(tǒng)的構(gòu)建和實(shí)施過程中的關(guān)鍵過程和問題作了詳細(xì)論述。結(jié)合資源加工與生物工程學(xué)科的特點(diǎn)，開發(fā)出了一個(gè)完整的學(xué)術(shù)信息服務(wù)系統(tǒng)。該系統(tǒng)可以進(jìn)行學(xué)術(shù)信息的錄入、增加、編輯、修改、查詢等基本處理以及文件的上傳、下載、視頻、PDF文件瀏覽等高級(jí)功能，形成了一個(gè)完整的、有學(xué)科特色的學(xué)術(shù)信息服務(wù)系統(tǒng)。通過對(duì)本系統(tǒng)的深入及有效的研究，我們可以得出如下結(jié)論1規(guī)劃、開發(fā)資源加工與生物工程學(xué)術(shù)信息服務(wù)系統(tǒng)不僅是必要的，而且是可行的。2開發(fā)可采用傳統(tǒng)的結(jié)構(gòu)化方法與現(xiàn)代面向?qū)ο笏枷胂嘟Y(jié)合的思路來(lái)實(shí)現(xiàn)。3系統(tǒng)可分為前臺(tái)和后臺(tái)兩部分，兩者在邏輯上相互獨(dú)立。4系統(tǒng)采用三層基于B／S模式，使得表示、邏輯、數(shù)據(jù)三者獨(dú)立，并且設(shè)計(jì)成中英文兩個(gè)版本。5可以將本系統(tǒng)的架構(gòu)移植到其他專業(yè)的學(xué)術(shù)信息服務(wù)系統(tǒng)，從而形成一個(gè)通用的學(xué)術(shù)信息服務(wù)系統(tǒng)。本論文的創(chuàng)新之處，一是設(shè)計(jì)并實(shí)現(xiàn)了資源加工與生物工程學(xué)術(shù)信息服務(wù)系統(tǒng)的架構(gòu)；二是提出了學(xué)術(shù)信息服務(wù)系統(tǒng)的總體擁有成本TCOTOTALCOSTOFOWNING的概念，并用它作為開發(fā)模式的依據(jù)；三是在現(xiàn)有的架構(gòu)模型的基礎(chǔ)上，抽象出了學(xué)術(shù)信息服務(wù)系統(tǒng)中英文版的通用架構(gòu)；四是提出了學(xué)術(shù)信息服務(wù)概念的內(nèi)涵，特別是將項(xiàng)目融資的內(nèi)容加入到其中，突出了學(xué)術(shù)領(lǐng)域中產(chǎn)、學(xué)、研的一體化的思想。關(guān)鍵詞資源加工與生物工程，學(xué)術(shù)信息服務(wù)系統(tǒng)，信息平臺(tái)，架構(gòu)設(shè)計(jì)，B／S模式II

簡(jiǎn)介：東南大學(xué)碩士學(xué)位論文中美生物醫(yī)學(xué)工程本科培養(yǎng)方案比較研究姓名孔旭申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)高等教育學(xué)指導(dǎo)教師梅漢成20100109英文摘要THECOMPARATIVERESEARCHONTRAININGPLANOFBIOMEDICALENGINEERINGFORUNDERGRADUATEBETWEENCHINAANDTHEUNITEDSTATESABSTRACTBIOMEDICALENGINEERINGISALLEMERGINGANDINTERDISCIPLINARYSUBJECT．ITINTEGRATESTHETHEORIESANDTHEMETHODSOFENGINEERING,BIOLOGYANDMEDICINE．ITNOTONLYSOLVESTHEPROBLEMSOFMEDICINETOSAFEGUARDHUMANHEALTHBUTALSOPROVIDESSERVICEFORTHEPREVENTION，DIAGNOSISANDRECOVERYOFDISEASES．THISSUBJECTISONEOFTHEHIGHTECHNOLOGYTODEVELOPATPRESENTALLOVERTHEWORLDFORITHASBETHGOODSOCIALBENEFITANDGOODECONOMICBENEFITASWELLASAVERYBROADPROSPECT．THEWORDS‘BIOMEDICALENGINEEFING’FIRSTAPPEAREDINAMERICAANDAROSEINL950S．MEANWHILE．BIOMEDICALHIGHEREDUCATIONWASDEVELOPED，WHICHONBEHALFOFTHEHIGHESTLEVELOFBIOMEDICALENGINEERINGHIGHEREDUCATIONINTHEWORLDNOWADAYS．BIOMEDICALENGINEERINGEDUCATIONOBTAINEDAGREATDEVELOPMENTANDCULTIVATEDALARGEGROUPTALENTWITHABILITIESOFAPPLICATIONORCREATIVITYWHOWERENEEDEDBYSOCIETYINOURCOUNTRYTHROUGHALONGPERIODOFEXPLORATIONSINCE1970SWHENWEBEGANTOSETTHEMAJOROFBIOMEDICALENGINEERING．THISPAPERUSETHEMETHODSOFLITERATURERESEARCH，CASESTUDYANDINTERVIEWTODISCUSSHOWTOCULTIVATEPROFESSIONALCREATIVETALENTSOFHIGHLEVELUNDERNEWCIRCUMSTANCESFROMTHEVIEWOFBIOMEDICALENGINEERINGTRAININGPLANFORUNDERGRADUATE．ICONSIDERTHATASANEWSUBIECT．BIOMEDICALENGINEERINGACHIEVEDMUCHCONSIDERABLERESULTSINTHEASPECTSOFRESEARCH．INDUSTRYANDHIGHEREDUCATIONDURINGTHEPAST30YEARSINCHINA．HOWEVER,WESTILLHAVEACERTAINDISTANCECOMPAREDWITHAMERICA．IFCHINA弱ALATECOMERWHOWANTEDTOSURPASSTHEOLD．TIMERSHAVETOINCREASETHESTRENGTHOFCULTIVATINGTALENTSANDPAYMUCHARENTIONTOTHECOMBINATIONOFMEDICINEANDENGINEERING,MOREOVER,WESHOULDWORKHARDTOFOSTERINTERDISCIPLINARYTALENTSWHOHAVEEDUCATIONBACKGROUNDSOFBOMENGINEERINGSCIENCEANDLIRESCIENCE．ANTHESECALLFORCOLLEGESTOENHANCEANDADJUSTMAJORSETTING,OPTIMIZETRAININGPLAN，EXPLORETHEROADOFCULTIVATINGADVANCEDTALENTSWHOAREPROFESSIONALANDCREATIVE．IDEFINETHESPECIFICCONNOTATIONSOF‘BIOMEDICALENGINEERING”AND“TRAININGPLANFORTALENTS’’ONTHEBASISOFCONCLUDINGMANYEXPORTS’IDEAINTHEVERYBEGINNING．THENISORTOUTTHEDATAOFDEVELOPINGHISTORYANDACTUALITYABOUTBIOMEDICALENGINEERINGINBCITHAMERICAANDCHINADESCRIBETHEGENERALSITUATIONOFBIOMEDICALENGINEERINGTRAININGPLANFORUNDERGRADUATEANDTHECHARACTERSOFUNDERGRADUATEMAJORINGBIOMEDICALENGINEERINGINSOMEREPRESENTATIVECOLLEGESINBETHAMERICAANDCHINA．LATERICONCLUDETHEADVANCEDEXPERIENCESOFWHYAMERICANBIOMEDICALENGINEERINGMAJORISWELL．KNOWNTOTHEWORLDASWELLASTHEENLIGHTENMENTOFOURCOUNTRYTODEVELOPBIOMEDICALENGINEERINGFORUNDERGRADUATEEDUCATION．PROCEEDINGWITHINDIVIDUALCASESINVESTIGATIONTOBIOMEDICALENGINEERINGSCHOOLOFSOUTHEASTUNIVERSITYLSTARTWITHTHEEXPLORATIONANDPRACTICEOFBIOMEDICALENGINEERINGRAININGPLANFORTALENTSSOASTOFINDOUTMEADVANCEDEXPERIENCESANDIDEASTOSHORTENTHEDISTANCEOFBIOMEDICALENGINEERINGHIGHEREDUCATIONBETWEENSOUTHEASTUNIVERSITYANDDEVELOPEDCOUNTRIESGRADUALLYANDINORDERTOREFORMBIOMEDICALENGINEERINGUNDERGRADUATEEDUCATION．IHOPEICOULDUSETHEEXPERIERLCEOFTHESELECTEDCASETOPROMOTETHEWORKINTHEENTIREAREASOTLLATOTHERCOLLEGESWHOWANTTODEVELOPTHISMAJORFORUNDERGRADUATEEDUCATIONCOULDDRAWSOMEIDEASANDHELPSFROMTHISPAPER．KEYWORDSBIOMEDICALENGINEERING；UNDERGRADUATEEDUCATION；TRAININGPLANII

簡(jiǎn)介：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文新農(nóng)村建設(shè)視角下農(nóng)業(yè)高職院校發(fā)展研究以鹽城生物工程高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校為例姓名宋玉寶申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)農(nóng)業(yè)科技組織與服務(wù)指導(dǎo)教師夏如兵201105STUDIESONTHEDEVELOPMENTOFAGRICULTURALHIGHERVOCATIONALCOLLEGESFROMTHEPERSPECTIVEOFNEWVILLAGECONSTRUCTIONTAKEYANCHENGBIOLOGYENGINEERINGHIGHERVOCATIONALTECHNOLOGYSCHOOLFOREXAMPLEABSTRACTTHISDISSERTATIONFOCUSESONTHESPECIFICSTRATEGIESOFTHEACQUISITIONOFSELFDEVELOPMENTOFTHEINVOLVEMENTTHEAGRICULTURALHIGHERVOCATIONALCOLLEGESINTHENEWVILLAGECONSTRUCTIONBASEDONTHESTATUSQUOOFYANCHENGBIOLOGYENGINEERINGHIGHER、，0CATIONALTECHNOLOGYSCHOOLINWHICHTHEAUTHORWORKS，ITINTENDSTOCARRYOUTRELEVANTPOSITIVESTUDIESTOUNDERSTANDTHESTATUSQUOANDTHEFUTUREDEVELOPMENTDIRECTIONOFTHEAGRICULTURALHIGHERVOCATIONALCOLLEGESANDEXPLORETHESPECIFICSTRATEGIESOFTHEINV01VEMENTOFTHEAGRICULTURALHIGHERVOCATIONALCOLLEGESINTHENEWVILLAGECONSTRUCTIONPROVIDINGVALUABLESTRATEGIESANDPROPOSALSFORTHESELFREFORMOFTHEAGRICULTURALHIGHERVOCATIONALCOLLEGESANDBETTERSERVICETONEWVILLAGECONSTRUCTIONOFYANCHENGCITYTILCCONCRETEFEATURESOFTHEDEVELOPMENTOFTHEAGRICULTURALHIGHERVOCATIONALCOLLEGESOFYANCHENGCITYCALLBEDESCRIBEDASFOLLOWSTHEENROLLMENTSCALEOFTHEAGRICULTUMLHIGHERVOCATIONALCOLLEGESHASEXPERIENCEDTHELEAPFROGDEVELOPMENT；THEGLOBALLEVELOFTHETEACHINGSTAFFOFTHECOLLEGESHASBEENAPPARENTLYIMPROVED；THECONSTRUCTIONOFTHEIRSPECIALTYDISCIPLINESHASBEENFURTHERSTRENGTHENED；BESIDES，THEYAREMAKINGINCREASINGLYOUTSTANDINGCONTRIBUTIONSTOTHEECONOMICCONSTRUCTIONANDSOCL砒HOWEVERINVIEWOFTHEMOREREQUESTBROUGHTFORWARDBYTHECONSTRUCTIONOFTHENEWVILLAGECONSTRUCTIONFORTALENTS，TECHNOLOGY，CULTURE，ETCINTHEAGFICULTURALHIGHERVOCATIONALCOLIEGES，SUCHCOLLEGESINYANCHENGCITYAREFACEDWITHTHELACKOF”CHARACTERISTICS””RESPONSIBILITY”AND”QUALITY”INTHEPROCESSOFTHEIRDEVELOPMENTTHEREFORETHEAGRICULTURALHIGHERVOCATIONALCOLLEGESOFYANCHENGCITYSHOULDACTIVELYIII

簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文以創(chuàng)新能力培養(yǎng)為核心研究初中生物工程實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)碩士研究生王海娟學(xué)號(hào)1100802002導(dǎo)師馬偉姜雅風(fēng)申請(qǐng)學(xué)位工程碩士學(xué)科生物工程所在單位生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院答辯日期2012年11月授予學(xué)位單位上海交通大學(xué)上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文III上海交通大學(xué)上海交通大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)上海交通大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密保密□，在年解密后適用本授權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期年月日日期2012年9月23日

簡(jiǎn)介：山西大學(xué)博士學(xué)位論文工程菌生物轉(zhuǎn)化D氨基酸及其相關(guān)酶的研究姓名鈕利喜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師袁靜明20070601工程菌轉(zhuǎn)化D氨基酸及其據(jù)關(guān)酶的研究的突變均為將生物合成過程中使用頻率高的密碼子變?yōu)槭褂妙l率低的密碼子。而突變株B中產(chǎn)生一個(gè)殘基突變，即ALA449GLY。SDS．PAGE分析表明PE．HYDOL／E．COLIBL21DE3酶的表達(dá)量比初始重組菌株略有提高。將D．海因酶活性中心的239位的組氨酸殘基分別突變?yōu)镠239Y和H239L，316位的天冬氨酸殘基突變?yōu)镈316E，但突變株酶活性喪失殆盡；若將409位的組氨酸殘基變?yōu)镠409T，活力剩余40％。經(jīng)NH42S04分級(jí)沉淀、PHENYLSCPHAROSE疏水層析純化，PAGE天然膠分析，突變酶仍然為二聚體，未發(fā)生解離現(xiàn)象；將410位的組氨酸殘基變?yōu)镠410A，活力基本喪失，僅剩余1．3％，表明相鄰二個(gè)組氨酸在酶分子構(gòu)象形成過程中所起的作用不同。分別將D海因酶N．末端和C．末端的一個(gè)氨基酸殘基剔除后得到突變酶HYDNLN末端SET缺失和HYDCIC末端ARG缺失。經(jīng)表達(dá)、純化后，突變酶和完整酶HYD的SDSPAGE、NATIVEPAGE和SEC分析表明，在完全相同的條件下，完整酶和突變酶的亞基分子量相同，但天然狀態(tài)下完整酶為二聚體，而HYDCL為單體且剩余活力為完整酶的43％，HYDNL為二聚體和單體的混合物且活力完全喪失。CD分析結(jié)果顯示，HYDCL同HYD相比沒有發(fā)生明顯改變，而HYDNL變化較大。HYD的PH穩(wěn)定性顯著增加，抗SDS能力亦有所提高，但熱穩(wěn)定性明顯降低。結(jié)果預(yù)示D一海因酶的C末端殘基ARG顯著影響酶的分子形式及熟穩(wěn)定性，但非酶活性所必需；而其N．末端殘基SER既是酶的結(jié)構(gòu)必需殘基，也是其活性必需殘基。2．CAB基因的克隆及表達(dá)從菌株SINORHIZOBIUMSP．SSORI中純化的CAB的N末端氨基酸序列設(shè)計(jì)了正向引物，并在已報(bào)道的不同來(lái)源菌株CAB的氨基酸序列同源性分析的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)了簡(jiǎn)并反向引物。用該菌株總DNA為模板，經(jīng)PCR擴(kuò)增得到一長(zhǎng)度約為O．9KB的片段，DNA測(cè)序表明其ORF為915BP。將CAB基因分別克窿到PUCL8、PET3A、PET32M、PRSET、PGEX4T2、PEXSECI、PMAL．C2X等一系列表達(dá)載體中，然后在E．COLIDH5D、ECOLI2426、ECOLIBL21DE3中進(jìn)行表達(dá)。但大多數(shù)表達(dá)產(chǎn)物為包涵體而不具酶活性。最終工程菌PMD／E．COLIBL21DE3中獲得CAB的可溶表達(dá)產(chǎn)物融合蛋白MBP．CAB77KDA，SDS．PAGE光密度掃描表明，其表達(dá)量約占菌體超聲后離心上清總蛋白的20％。經(jīng)AMYLOSE親和純化和SUPEROSE12凝膠排阻層析后達(dá)到了電泳純。根據(jù)PMAL．C2X質(zhì)粒背景，用FACTORXA剪切后，可得約42KDA的MBP和35KDA的CAB。酶活性檢測(cè)表明，當(dāng)

簡(jiǎn)介：中國(guó)科學(xué)院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院博士學(xué)位論文IBBEDEVICE離子束生物工程裝置及應(yīng)用研究姓名袁航申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)核能科學(xué)與工程指導(dǎo)教師余增亮20060501摘要經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)的運(yùn)行、考驗(yàn)，裝置達(dá)到了設(shè)計(jì)要求，運(yùn)行狀態(tài)良好，穩(wěn)定可靠。在論文最后，總結(jié)課題研究，并提出離子束生物工程裝置進(jìn)一步發(fā)展的改進(jìn)方法。推法關(guān)鍵詞離子束生物工程，離子束生物工程裝置，寬離子束，束流測(cè)量，回N

簡(jiǎn)介：人學(xué)RR程碩I論文上海交通大學(xué)工程碩士專業(yè)學(xué)位論文STRENGTHENSTHEBIOENGINEERINGABILITYOPTIMIZATIONTHESCHOOLBASEDCURRICULUMOFLIFESCIENCE加強(qiáng)生物工程能力培養(yǎng)優(yōu)化生命科學(xué)校本課程學(xué)校上海交通大學(xué)院系生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院班級(jí)Z1008021學(xué)Q1100802005工程碩士生蘇蕾工程領(lǐng)域生物工程導(dǎo)師I林志新張雪洪導(dǎo)師II包霞上海交通大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院2013年3月30日1本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)上海交通大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或S描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在__年解密后適用本授權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密口。請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打‘V，上海交通大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名1

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