簡介：點(diǎn)擊查看更多煤焦瀝青煙提取物誘導(dǎo)BEAS-2B細(xì)胞惡變過程中表觀遺傳學(xué)改變.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：中圖分類號中圖分類號Q343單位代碼單位代碼10231學(xué)號號2013301042哈爾濱地區(qū)冬性小黑麥引種試驗(yàn)與細(xì)胞遺傳學(xué)研究學(xué)科專業(yè)遺傳學(xué)研究方向細(xì)胞遺傳學(xué)作者姓名劉杰指導(dǎo)教師李集臨教授張延明副教授哈爾濱師范大學(xué)二〇一六年六月中圖分類號中圖分類號Q343單位代碼單位代碼10231學(xué)號號20133010422013301042碩士學(xué)位論文哈爾濱地區(qū)冬性小黑麥引種試驗(yàn)與細(xì)胞遺傳學(xué)研究碩士研究生劉杰導(dǎo)師李集臨教授張延明副教授學(xué)科專業(yè)遺傳學(xué)答辯日期2016年6月授予學(xué)位單位哈爾濱師范大學(xué)

簡介：本文分別以小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌YERSINIAENTEROCOLITICA、金黃色葡萄球菌（STAPHYLOCOCCUSAUREUS）、克雷伯氏菌KLEBSIELLA、檸檬酸桿菌（CITROBACTER）、大腸桿菌（ESCHERICHIACOLI和沙門氏菌SALMONELLA六種重要的人類致病菌為研究對象，采用基因組學(xué)、比較基因組學(xué)、流行病學(xué)和生物信息學(xué)等方法進(jìn)行遺傳及分子進(jìn)化的研究，共分為三個(gè)部分。小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌是一種異質(zhì)性細(xì)菌，由于其擁有廣泛的動物宿主，使得它更容易引起人類腸道的疾病。美國的流行病學(xué)模式是生物型1B血清型08的菌株即所謂的“新世界”菌株占據(jù)優(yōu)勢；與之相反，中國地區(qū)的感染所呈現(xiàn)的模式與歐洲國家及日本地區(qū)相似，即“舊世界”菌株（生物型25）較為流行。為深入研究小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的進(jìn)化過程及其對人類宿主的致病機(jī)制，我們對一株從中國地區(qū)病人體內(nèi)分離得到的生物型3的菌株1055RRO9進(jìn)行了全基因組測序。與菌株80811BO8的比較基因組學(xué)分析揭示了小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌進(jìn)化方面的新發(fā)現(xiàn)。兩株菌均有大約15％的基因是特異的。在菌株1055RR中，我們在其特異的基因組致病島中發(fā)現(xiàn)了一些可能的毒力因子，包括一個(gè)新的III型分泌系統(tǒng)和一個(gè)類似RTX的基因簇。許多類似祖先基因簇的基因位點(diǎn)存在于菌株1055RR中，但是在菌株8081中卻消失了；這些位點(diǎn)的存在對于細(xì)菌的腸內(nèi)生存及致病機(jī)理有著重要作用。1055RR中的插入因子的分布模式與8081不同且都存在于其特異區(qū)域?？傊覀兊谋容^基因組學(xué)分析表明這兩株菌分別通過不同的進(jìn)化過程獲得致病性，“舊世界”生物群的代表菌株1055RR與“新世界”菌株8081位于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的兩個(gè)不同的分支上。為研究近期天津地區(qū)金黃色葡萄球菌的分子流行病學(xué)，我們對228株在2005年到2007年從7家大型三甲醫(yī)院分離到的菌株進(jìn)行了耐藥譜型分析，金黃色葡萄球菌蛋白A分型，多位點(diǎn)序列分型，葡萄球菌染色體MEC基因盒分型，PANTONVALENTMELEUKOCIN（潘頓瓦倫丁殺白細(xì)胞素）基因檢測和莢膜多糖分型。共有98株臨床菌株可以確定是甲氧西林耐藥金葡，這些菌株分散在5家醫(yī)院中。所有的耐藥菌和64684130的不耐藥菌株是耐多藥的。SPAT030型，序列型239ST239和SCCMECⅢ型是最普遍的型。754172228的菌種帶有CAP8的基因簇。在MRSA中一共發(fā)現(xiàn)24個(gè)SPA型，15個(gè)MLST型和4個(gè)SCCMEC型。所有SPAT030并且ST239型的菌種都是MRSA且都攜帶SCCMECⅢ和CAP8基因簇。MSSA有40個(gè)SPA型和25個(gè)MLST型，其中SPAT796ST7是最常見的型。PVL基因在MSSA中的流行程度是MRSA中的三倍。天津地區(qū)未發(fā)現(xiàn)社區(qū)相關(guān)的MRSA。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄了MRSA和MSSA主要的流行菌株分別為ST239MRSASCCMECⅢ和ST7MSSAT796。這個(gè)發(fā)現(xiàn)說明了天津地區(qū)流行的MRSA的克隆并不是本地的MSSA優(yōu)勢菌株引入SCCMEC而形成的，應(yīng)該是由其他地區(qū)的MRSA輸入到本地的。我們對多耐藥的臨床分離株T0131進(jìn)行了全基因組測序，這是世界范圍內(nèi)流行克隆ST239MRSASCCMECⅢ在亞洲國家第一個(gè)測序的菌株。與另外兩個(gè)公布基因組序列的ST239菌株進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)來自不同洲的三株菌之間具有多態(tài)性。細(xì)菌表面抗原，如O抗原和K抗原等，是細(xì)菌的重要組成部分。O抗原是革蘭氏陰性菌表面的脂多糖的重要組成部分，K抗原是細(xì)菌表面莢膜抗原。兩種抗原是細(xì)菌表面最具多樣性的成分，有很強(qiáng)的免疫原性，是血清學(xué)分類的基礎(chǔ)。同時(shí)也是重要的致病因子，使細(xì)菌擁有更適于其生存或者更易于逃避免疫系統(tǒng)攻擊的表面結(jié)構(gòu)。負(fù)責(zé)這兩種抗原合成的基因簇通常位于細(xì)菌染色體上的特定位置，抗原的多樣性主要是由于基因簇的遺傳學(xué)多樣性造成的。基因簇中的基因可以被分為3類單糖合成酶基因、糖基轉(zhuǎn)移酶基因和寡糖單位處理酶基因?？死撞暇?、檸檬酸桿菌、沙門氏菌和大腸桿菌都是重要的人類致病菌，可分為多種不同的血清型，不同血清型之間的致病性有所差異。本研究通過新一代全基因組學(xué)測序方法和生物信息學(xué)方法破譯了克雷伯氏菌致病相關(guān)的4個(gè)血清型（5株血清型標(biāo)準(zhǔn)菌株）的K抗原基因簇和一株檸檬酸桿菌血清型標(biāo)準(zhǔn)菌株的O抗原基因簇。分析了檸檬酸桿菌和沙門氏菌含有同種罕見單糖的基因簇的關(guān)系，以及親緣關(guān)系較近的檸檬酸桿菌、沙門氏菌和大腸桿菌的O抗原之間的關(guān)系和進(jìn)化歷程。

簡介：THERESEARCHONPOPULATIONGENETICSANDMORPHOLOGICALVARIATIONOFCHINESEWILDPYRTLSUSSURIENSISMAXIM．XUJINGSHIATHESISSUBMITTEDINPARTIALSATISFACTIONOFTHEREQUIREMENTSFORTHEDEGREEOFMASTEROFSCIENCELNNONEWOODFORESTRYLNCENTRALSOUTHUNIVERSITYOFFORESTRYANDTECHNOLOGY498SHAOSHANSOUTHROAD，TIANXINDISTRICTCHANGSHAHUNAN410004，P．R．CHINASUPERVISORPROFESSORMM肘TANAMAY,2013摘要我國為梨資源的遺傳多樣性中心之一，廣泛存在野生資源，其中野生秋子梨以極度抗寒、風(fēng)味濃郁、糖酸含量高、特有香氣而著名。然而由于氣候及人為原因，野生秋子梨資源遭到嚴(yán)重的破壞，專家預(yù)測若不采取適當(dāng)?shù)谋Ｓ胧覈囊吧镒永尜Y源將從地球上消失。本研究通過SSR分子標(biāo)記對我國內(nèi)蒙古、黑龍江、吉林的11個(gè)野生秋子梨群體及日本野生秋子梨群體等7個(gè)參照群體的群體遺傳學(xué)特征進(jìn)行研究，同時(shí)從形態(tài)學(xué)水平上對我國野生秋子梨進(jìn)行評價(jià)為我國野生秋子梨的保育工作提供理論依據(jù)。主要結(jié)果和結(jié)論如下1、本研究篩選出了擴(kuò)增條帶清晰、多態(tài)性好、重復(fù)性高的SSR；JI物20對。根據(jù)PIC的高低，將20對SSRRJI物的有效性從高到低排序?yàn)镃H04912，NH206A，CH03D10，NBL09A，NBL05，NH009，NH029A，NH203A，NBL41B，TSUENHL55，CH02901，NH039A，CH03906，BGA35，CH02B10，CH02D10，CH02E02，EMPCL14，CH02B03，NBL04A。2、供試群體的20個(gè)SSR位點(diǎn)遺傳多樣性研究發(fā)現(xiàn)中國野生秋子梨群體的NA、NE、AR、HE、HO分別為3．900、2．654、2．856、0．504、0．372；日本野生秋子梨的NA、NE、AR、HE、HO分別為5．850、3．765、3．693、0．663、0．573；中國栽培梨品種群的NA、NE、AR、HE、HO分別為7．225、4．696、4．449、0．773、0．573；日本栽培梨的NA、NE、AR、HE、HO分別為4．350、2．788、3．212、0．625、0．423，西洋梨為5．650、3．883、4．048、0．742、0．518，表明中國野生秋子梨比日本野生秋子梨、中國栽培梨、日本栽培梨、西洋梨的遺傳多樣性低。3、18個(gè)群體的20個(gè)SSR位點(diǎn)研究發(fā)現(xiàn)23．76％的遺傳分化發(fā)生在群體內(nèi)，76．24％的遺傳分化發(fā)生在群體之間FST0．2376，P0．01。不同地區(qū)野生秋子梨群體中內(nèi)蒙古野生秋子梨群體的遺傳多樣性最低，基因交流程度僅為0．41％，5個(gè)群體之間遺傳分化最小FST0．016．0．041，遺傳背景最純；黑龍江和吉林野生秋子梨群體的遺傳多樣性較高，基因交流程度分別為14．71％、9．96％，群體間遺傳分化大FST0．029．0．337。11個(gè)野生秋子梨群體中‘HLJ．FY’群體的遺傳多樣性最低，遺傳背景最純，基因交流程度僅為0．15％，而‘HLJ．CL群體的遺傳多樣性最高，遺傳背景最純，基因交流程度達(dá)N42．94％。4、根據(jù)供試群體的遺傳距離，用MEGA4軟件用鄰接法進(jìn)行聚類發(fā)現(xiàn)，18個(gè)

簡介：分類號LIIIIIULLIIIIIIIIIIY3397271密級碩士學(xué)位論文MASTER，SDEGREEDISSERTAT10N湖北省煙草赤星病病原學(xué)及遺傳多樣性分析ETIOLOGYANDGENETICDIVERSITYANALYSISOFPATHOGENCAUSINGTOBACCOBROWNSPOTDISEASEINHUBEIPROVINCE研究生楊濤CANDIDATEYANGTAO學(xué)號2015301110173STUDENTNO專業(yè)MAJOR植物病理學(xué)PLANTPATHOLOGY導(dǎo)師黃俊斌教授SUPERVISORPROFESSORHUANGJUNBIN中國武漢WUHAN，CHINA二O一八年六月JUNE，2018學(xué)剛失耄帆氣沙屈黜厶T吣辛眥⑧華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使髑授權(quán)書洋鑲論文否如需保密，解密時(shí)閥驢L警年嘞月L弓弱楚露保密獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲鹱蘑黑交游論交是栽個(gè)人盛導(dǎo)簿指導(dǎo)下進(jìn)行的磷究工作及取褥的話究成黎。盡裁所知，除了文申特別加以標(biāo)注和數(shù)落酌地方外，論文中不包岔其他入巳綴發(fā)表或撰寫過昀研究成暴，巍不包含菀獲褥華中農(nóng)業(yè)大學(xué)或英傀教寅稅鞠的學(xué)位惑證書雨使用過妁材瓣，精導(dǎo)教簿硝此進(jìn)行T審定。與我一蔣工作瀚隧態(tài)對本研究所傲翳任何賈黻均巳在論文中鑲了爨確瀚說嗔，并襲示了謝意。研究生簽名物游時(shí)間P。慘年拶萬兵J爹舀學(xué)位論文使饜授權(quán)書本人究全了鰓“肇中農(nóng)監(jiān)大學(xué)關(guān)于保存、靛瑗學(xué)位論文的規(guī)定”，鬟≯學(xué)生必須按怒學(xué)校瑟求援交擎位論文鶼印剮本和電子版奉；學(xué)校有襖保存疆交論交黲印固|叛和毯子版，并提供露錄檢索和闋魏服務(wù)，可以采用影幫、臻竄或掃擻鋒復(fù)鍘手段鑲存、匯練學(xué)位論文。本人弼意華中農(nóng)業(yè)大學(xué)酉雙翔不弱方式在不瓣媒體上發(fā)襲、傳捺學(xué)位論文的叁部或部分內(nèi)容。注保密學(xué)位論文在霹密盾遺恁予本援扳書。學(xué)位敉作者張氟／滿翱張舷狀、簽名搿嬲諺憩年姆|露膏翻簽名爨熬硇穆年毋鋼F0翳

簡介：目的1臨床研究回顧性分析試驗(yàn)組（失笑勇安湯加減聯(lián)合華法林）及對照組（華法林）治療反復(fù)下肢深靜脈血栓形成或者合并其他部位深靜脈栓塞的患者隨訪資料，探討活血祛瘀法干預(yù)易栓癥的臨床療效分析。2實(shí)驗(yàn)研究通過對嶺南地區(qū)一漢族遺傳性易栓癥家系進(jìn)行基因測序，明確此家系易栓癥的的分子學(xué)診斷，找出基因突變點(diǎn)，為遺傳性易栓癥的靶向治療提供依據(jù)。方法1臨床研究采用回顧性研究方法，通過查閱我院電子病歷系統(tǒng)，收集全院出院診斷為“靜脈栓塞性疾病”、“下肢深靜脈血栓形成”、“肺栓塞、”“易栓癥”和出院診斷中含有“栓塞”文字的患者，按照納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)剔除不合格病例后，電話和門診隨訪患者，采集患者的一般資料、各種檢查結(jié)果、治療方法等篩選出符合本臨床研究的病例42例，其中，試驗(yàn)組21例、對照組21例試驗(yàn)組以失笑勇安湯加減聯(lián)合華法林治療中藥水煎服，每日一劑，分兩次口服，每次250ML左右華法林3MGQD，對照組以華法林治療3MGQD，并根據(jù)INR值調(diào)整華法林用量，觀察時(shí)間為治療4周后比較試驗(yàn)組治療前后、試驗(yàn)組及對照組治療后指標(biāo)差異，指標(biāo)包括血小板計(jì)數(shù)PLT、血小板壓積PCT、血小板分布寬度PDW、血小板平均體積MPV、大血小板比率PLCR、凝血酶原時(shí)間PT、活化部分凝血活酶時(shí)間APTT、纖維蛋白原FIB、D二聚體DDI、谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT、谷草轉(zhuǎn)氨酶AST、血肌酐CREA、血尿素UREA、腫脹積分、疼痛積分探討活血祛瘀法干預(yù)易栓癥的臨床療效分析。2實(shí)驗(yàn)研究導(dǎo)師組通過病例的收集工作，發(fā)現(xiàn)既往曾收治數(shù)名深靜脈血栓栓塞性疾病患者具有家族聚集性，其家族中有9人都有反復(fù)發(fā)作的靜脈血栓形成，且首發(fā)年齡較早，符合遺傳性易栓癥的診斷采集該家系中3人血液（2名患者，1名正常人）進(jìn)行凝血功能、PC活性、PS活性、ATⅢ活性、HCⅡ濃度等檢測，并進(jìn)行全基因組測序，試圖尋找其發(fā)病的分子遺傳學(xué)位點(diǎn)。結(jié)果1臨床研究納入的42例病例經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，與治療前比較，試驗(yàn)組治療后血液分析指標(biāo)PLT、PCT、PDW、MPV、PLCR和凝血指標(biāo)FIB顯著下降P＜005，凝血指標(biāo)PT、APTT顯著升高P＜005，肝腎功能相關(guān)指標(biāo)ALT、AST、UREA、CREA治療前后差異不顯著P＞005，DDI和腫脹積分、疼痛積分顯著降低P＜005對照組用藥后PLT、PT顯著升高P＜005，PCT、PDW、MPV、PLCR、APTT、FIB和肝腎功能相關(guān)指標(biāo)ALT、AST、UREA、CREA用藥前后差異不顯著P＞005，DDI和疼痛積分和用藥前相比差異不顯著P＞005，腫脹積分顯著下降P＜005。治療后組間比較，試驗(yàn)組和對照組血液分析指標(biāo)（PLT、PCT、PDW、MPV、PLCR）、凝血指標(biāo)PT、APTT、FIB組間差異顯著P＜005試驗(yàn)組和對照組肝功指標(biāo)ALT、AST和腎功指標(biāo)UREA、CREA組間差異不顯著P＞005試驗(yàn)組和對照組DDI指標(biāo)、腫脹積分、疼痛積分等組間差異顯著P＜005試驗(yàn)組用藥后血液分析指標(biāo)PLT、PCT、PDW、MPV、PLCR、FIB、DDI、腫脹積分、疼痛積分顯著低于對照組，PT、APTT指標(biāo)顯著高于對照組。2實(shí)驗(yàn)研究結(jié)合家系圖譜和所有檢查結(jié)果分析，此遺傳性易栓癥家系屬于常染色體顯性遺傳根據(jù)全基因測序結(jié)果，找出3個(gè)與此病有關(guān)的突變基因，F(xiàn)ⅡCC1504TPR502W、CC1573TPR525W、CC1621TPR541W、MASP1CC1609GPH537D的點(diǎn)突變可能通過激活凝血酶原，加速凝血過程而導(dǎo)致血栓形成此家系患者病情反復(fù)，使用華法林效果欠佳，可能與CALUC383387DELPN128FS、C386390DELPN129FS、C839843DELPN280FS、C617621DELPN206FS、C863867DELPN288FS的移碼刪除突變有關(guān)。結(jié)論1臨床研究通過此臨床療效分析發(fā)現(xiàn)，活血化瘀中藥可改善易栓癥患者的血小板參數(shù)、凝血指標(biāo)、臨床癥狀，且對肝腎功能損害較小，療效優(yōu)于單純西藥組。2實(shí)驗(yàn)研究通過全基因測序結(jié)果，尋找出此家系可能的致病基因?yàn)镕Ⅱ、MASP1，此家系使用華法林效果欠佳可能與CALU基因突變有關(guān)。

簡介：代謝綜合征是一組代謝指標(biāo)異常癥侯群，主要表現(xiàn)為中心性肥胖、高血壓和糖脂代謝紊亂。研究表明，代謝綜合征會增加心腦血管疾病、糖尿病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。按中國糖尿病協(xié)會定義，2010年我國居民代謝綜合征患病率達(dá)176％。雙生子研究表明，遺傳因素在代謝異常的發(fā)生中起了重要的作用。經(jīng)典的全基因組關(guān)聯(lián)研究GENOMEWIDEASSOCIATIONSTUDYGWAS已發(fā)現(xiàn)了一些與代謝異常相關(guān)的遺傳變異，但仍存在以下兩大問題1已發(fā)現(xiàn)的位點(diǎn)僅能解釋少量的遺傳度，即存在大量丟失的遺傳度MISSINGHERITABILITY有待進(jìn)一步探究2以往研究主要關(guān)注表型相關(guān)的標(biāo)簽SNPTAGSNP及與之距離最近的基因，但后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)，大部分的定位信號并不通過與之距離最近的基因起作用，如現(xiàn)已證明，定位在FTO上的肥胖相關(guān)位點(diǎn)主要通過遠(yuǎn)程調(diào)控IRX3基因表達(dá)影響表型?？傊?，以往對GWAS定位信號的解析非常有限，多數(shù)關(guān)鍵基因和效應(yīng)位點(diǎn)CAUSALVARIANT未被找到，不利于后續(xù)功能研究。近些年研究發(fā)現(xiàn)，大部分表型相關(guān)遺傳變異通過調(diào)控基因表達(dá)水平進(jìn)而影響表型。若以基因表達(dá)調(diào)控作為注釋，可以將全基因組的篩選范圍縮小到基因表達(dá)數(shù)量性狀基因座EXPRESSIONQUANTITATIVETRAITLOCI，EQTLS上，提高發(fā)現(xiàn)表型相關(guān)位點(diǎn)的效率。ENCODE、GTEX、ROADMAP等研究項(xiàng)目陸續(xù)公布了大量可用于注釋遺傳變異對表型調(diào)控路徑中多個(gè)組學(xué)的信息，包括具有組織特異性的基因表達(dá)、DNA甲基化、組蛋白修飾、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合等。這些信息可用于進(jìn)一步精確篩選表型相關(guān)遺傳變異，也可用于對已知信號的重新解析。以往的研究主要以歐裔人群為主，在我國漢族人群中的研究還很有限，由于不同人種間存在遺傳背景的差異，歐裔人群的研究結(jié)果不能直接外推至中國漢族人群。為了系統(tǒng)地探索代謝綜合征及代謝組分相關(guān)的遺傳易感位點(diǎn)，本研究以我國漢族人群為主要研究對象，通過基于多組學(xué)注釋的全基因組關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)并解析代謝異常相關(guān)的遺傳變異。研究內(nèi)容分為三個(gè)部分（圖1）第一部分采用經(jīng)典的全基因組關(guān)聯(lián)分析策略，篩選與代謝綜合征及代謝組分關(guān)聯(lián)信號最強(qiáng)的遺傳變異位點(diǎn)并進(jìn)行多階段驗(yàn)證、功能分析和基因環(huán)境交互效應(yīng)分析。第二部分在第一部分研究的基礎(chǔ)上，通過對轉(zhuǎn)錄調(diào)控的注釋，進(jìn)一步篩選與糖脂代謝相關(guān)的遺傳變異，通過精細(xì)定位和功能實(shí)驗(yàn)，解析基本調(diào)控路徑。第三部分針對已知的糖脂代謝關(guān)聯(lián)信號，利用最新的多組學(xué)注釋信息對信號區(qū)域進(jìn)行系統(tǒng)化的重解析，探究關(guān)鍵的調(diào)控基因，為關(guān)聯(lián)分析的成果轉(zhuǎn)化提供支持。圖1研究內(nèi)容示意圖左上側(cè)圖為課題組開展的代謝綜合征GWAS關(guān)聯(lián)信號（P值）的曼哈頓圖，圖下左側(cè)為第一部分技術(shù)路線，右側(cè)為第二部分技術(shù)路線。右側(cè)圖為NHGRIEBIGWASCATALOG記錄的表型相關(guān)的位點(diǎn)，為研究的第三部分，采用多組學(xué)注釋，對與代謝異常相關(guān)的位點(diǎn)進(jìn)行系統(tǒng)化重解析。第一部分代謝綜合征的遺傳易感性研究一、研究目的在中國漢族人群中篩選并驗(yàn)證代謝綜合征相關(guān)的遺傳易感性位點(diǎn)。二、材料和方法以單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)為遺傳變異標(biāo)記，首先在杭州蕭山地區(qū)1742例樣本中采用全基因組關(guān)聯(lián)分析的方法，篩選出與代謝綜合征及代謝組分關(guān)聯(lián)信號最強(qiáng)的位點(diǎn)，然后對這些位點(diǎn)進(jìn)行多階段獨(dú)立樣本驗(yàn)證，驗(yàn)證樣本來自我國東部、北部、東北部等多個(gè)地區(qū)，共計(jì)10978例。合并多階段驗(yàn)證結(jié)果后，對達(dá)到全基因組陽性水平的位點(diǎn)進(jìn)行功能預(yù)測、基因環(huán)境交互效應(yīng)分析。三、研究結(jié)果通過代謝綜合征的全基因組關(guān)聯(lián)分析及多階段獨(dú)立樣本的驗(yàn)證，研究發(fā)現(xiàn)位于APOA5上的RS651821位點(diǎn)和位于ALDH2上亞洲人特有的高頻錯(cuò)義突變位點(diǎn)RS671的基因型與代謝綜合征的遺傳易感性相關(guān)。在控制了APOA基因簇區(qū)域內(nèi)最強(qiáng)信號RS651821后，位于BUD13上的RS180326位點(diǎn)仍然與血清甘油三酯TRIGLYCERIDE，TG水平相關(guān)PCOMBINED24E08，是APOA基因簇內(nèi)一個(gè)新的第二信號SECONDARYSIGNAL。在整合了遺傳變異位點(diǎn)RS651821、RS180326、血清APOA5、BUD13的蛋白水平、TG水平后分析發(fā)現(xiàn)，除了APOA5外，BUD13也參與了血清TG水平的調(diào)控。此外，研究發(fā)現(xiàn)RS671位點(diǎn)的多態(tài)性不僅會通過影響乙醛代謝影響人們的飲酒行為，該位點(diǎn)還與飲酒行為之間存在對代謝綜合征及相關(guān)代謝表型的交互效應(yīng)，其效應(yīng)主要存在于飲酒人群中。四、小結(jié)1在中國漢族人群中，RS651821APOA5和RS671ALDH2位點(diǎn)的基因型與代謝綜合征的遺傳易感性相關(guān)2RS180326BUD13基因型與血清TG水平相關(guān)，其效應(yīng)獨(dú)立于已知位點(diǎn)RS651821APOA53RS671ALDH2的基因型與飲酒行為存在交互效應(yīng)。第二部分基于注釋信息的糖脂代謝相關(guān)遺傳變異篩選及精細(xì)定位一、研究目的在第一部分研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合多組學(xué)注釋信息，進(jìn)一步篩選和驗(yàn)證糖脂代謝指標(biāo)相關(guān)的遺傳變異位點(diǎn)對新發(fā)現(xiàn)的糖脂代謝相關(guān)遺傳變異位點(diǎn)進(jìn)行精細(xì)定位，并通過功能實(shí)驗(yàn)確認(rèn)效應(yīng)位點(diǎn)。二、材料和方法首先，通過對1742例樣本（同第一部分）的糖脂代謝的全基因組關(guān)聯(lián)分析，得到與表型相關(guān)的但又未被第一部分驗(yàn)證過的遺傳變異位點(diǎn)然后分析這些位點(diǎn)與脂肪、肝臟、胰島和骨骼肌中基因表達(dá)水平的關(guān)聯(lián)，并將這些位點(diǎn)的信號與表型關(guān)聯(lián)信號共定位，找出與糖脂代謝表型相關(guān)的EQTLS進(jìn)一步通過多階段獨(dú)立樣本驗(yàn)證基因型與表型的關(guān)聯(lián)對驗(yàn)證達(dá)到全基因組陽性水平的位點(diǎn)，通過以基因?yàn)閱挝坏姆治霾呗訥ENEBASEDANALYSES推測其可能的調(diào)控基因并通過ENCODE和ROADMAP計(jì)劃提供的相關(guān)組織細(xì)胞中染色質(zhì)狀態(tài)、組蛋白修飾、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合信號推測調(diào)控活性區(qū)域及其對應(yīng)的效應(yīng)位點(diǎn)最后構(gòu)建包含不同等位基因的載體，通過熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)確認(rèn)其表達(dá)調(diào)控作用。三、研究結(jié)果通過全基因組關(guān)聯(lián)分析及EQTL的注釋，發(fā)現(xiàn)了22個(gè)與糖脂代謝相關(guān)的遺傳變異位點(diǎn)在特定的組織中影響基因表達(dá)，多階段獨(dú)立樣本驗(yàn)證確認(rèn)了RS1880118位點(diǎn)與血清HDLC水平的關(guān)聯(lián)PCOMBINED14E10。該位點(diǎn)可以TAG的區(qū)域主要包括DAGLB和RAC1兩個(gè)基因，在加性模型下，RS1880118的基因型可以解釋DAGLBDIACYLGLYCEROLLIPASE，BETA基因在皮下脂肪組織中表達(dá)水平變異的477％P59E42。同時(shí)，通過TWAS、SMR、SHERLOCK等以基因?yàn)閱挝坏难芯糠椒?，我們發(fā)現(xiàn)DAGLB基因與血清HDLC水平之間存在關(guān)聯(lián)，關(guān)聯(lián)的P值分別為30E08、11E04和16E06。進(jìn)一步通過組蛋白信號H3K27AC、H3K4ME3，H3K9AC及轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合區(qū)域、DNA酶Ⅰ超敏位點(diǎn)的定位，找到了位于DAGLB基因5區(qū)域的調(diào)控活性片段，熒光素酶報(bào)告基因的結(jié)果顯示，該活性片段中RS4724806位點(diǎn)（與RS1880118位點(diǎn)LDR2077）可能是真正的效應(yīng)位點(diǎn)，其最小等位基因會增加轉(zhuǎn)錄活性，與EQTL分析的結(jié)果一致。四、小結(jié)RS1880118是一個(gè)在中國漢族人群中新發(fā)現(xiàn)的與血清HDLC水平相關(guān)的遺傳變異位點(diǎn)，其效應(yīng)位點(diǎn)RS4724806通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄活性影響DAGLB基因表達(dá)，該部分研究提示了DAGLB基因在脂代謝中的作用。第三部分利用多組學(xué)注釋系統(tǒng)解析糖脂代謝相關(guān)的遺傳變異一、研究目的結(jié)合多組學(xué)注釋信息，對已知的糖脂代謝相關(guān)遺傳變異信號區(qū)域進(jìn)行系統(tǒng)的解析，探究基因型到表型的調(diào)控路徑，為后續(xù)功能研究提供支持。二、研究方法首先，整理已報(bào)道的與糖脂代謝相關(guān)的遺傳變異位點(diǎn)然后，利用千人基因組計(jì)劃提供的位點(diǎn)間連鎖不平衡信息，填補(bǔ)出所有與LEADSNP高度連鎖不平衡的位點(diǎn)用于后續(xù)的精細(xì)定位和功能預(yù)測接著，對這些位點(diǎn)進(jìn)行系統(tǒng)的多組學(xué)注釋，包括基因表達(dá)、染色質(zhì)狀態(tài)、DNA甲基化、組蛋白修飾、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合等。對位于編碼區(qū)域的遺傳變異位點(diǎn)，再進(jìn)行物種間保守性估計(jì)、翻譯后修飾等翻譯水平的注釋最后，整理推測出可能的基因型到表型調(diào)控路徑。三、研究結(jié)果對經(jīng)篩選過濾后得到的592個(gè)糖脂代謝相關(guān)遺傳變異位點(diǎn)進(jìn)行填補(bǔ)后，共計(jì)17646個(gè)位點(diǎn)納入后續(xù)精細(xì)定位分析LDR2＞05。在轉(zhuǎn)錄水平，通過遺傳變異與基因表達(dá)相關(guān)的注釋，發(fā)現(xiàn)了104個(gè)在內(nèi)臟脂肪、肝臟、骨骼肌或胰島細(xì)胞中與基因表達(dá)水平相關(guān)的位點(diǎn)。同時(shí)，發(fā)現(xiàn)了一些與特定環(huán)境刺激相關(guān)的EQTLS，如RS702485位點(diǎn)與DAGLB基因表達(dá)的關(guān)聯(lián)僅出現(xiàn)在LPS刺激后PBEFE＞005，PAFTER252E16。133個(gè)糖脂代謝相關(guān)位點(diǎn)與脂肪組織或胰島細(xì)胞中的DNA甲基化相關(guān)，其中許多位點(diǎn)與多個(gè)CPG位點(diǎn)的甲基化水平相關(guān)。經(jīng)過對遺傳變異位點(diǎn)的精細(xì)定位，我們發(fā)現(xiàn)有49個(gè)位點(diǎn)可以關(guān)聯(lián)TAG到一個(gè)或以上的位于組蛋白修飾信號峰區(qū)域內(nèi)的位點(diǎn)，且具有組織特異性。在翻譯水平，有122個(gè)（R2＞05）或43個(gè)R2＞08位點(diǎn)可以關(guān)聯(lián)到一個(gè)或以上的非同義突變位點(diǎn)，其中有16個(gè)位點(diǎn)經(jīng)SIFT和POLYPHEN注釋均提示存在影響蛋白功能的可能。對糖代謝相關(guān)位點(diǎn)RS1535500精細(xì)定位和功能預(yù)測后發(fā)現(xiàn)，該位點(diǎn)G到T的變異與附近7個(gè)CPG位點(diǎn)的存在相關(guān)聯(lián)，這些位點(diǎn)靠近KCNK17基因5端的CPG島，存在影響DNA甲基化的可能。通過對胰島細(xì)胞中多個(gè)組學(xué)的信息整合，發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)確實(shí)可以通過影響附近位點(diǎn)甲基化水平進(jìn)而影響KCNK17的表達(dá)，這不同于以往報(bào)道認(rèn)為該信號主要通過KCNK16起作用。四、小結(jié)1通過整合多個(gè)組學(xué)信息，對糖脂代謝GWAS信號進(jìn)行重新解析后發(fā)現(xiàn)了許多可能參與到遺傳變異影響表型調(diào)控路徑中的基因及調(diào)控元件。與其他復(fù)雜表型類似，經(jīng)過注釋后，三分之一的基因與以往對該位點(diǎn)報(bào)道一致。2僅有7％20％的糖脂代謝表型相關(guān)遺傳變異位點(diǎn)可以關(guān)聯(lián)到一個(gè)或以上的非同義或無義突變，其余可能通過轉(zhuǎn)錄水平影響表型。3通過對糖代謝相關(guān)的位點(diǎn)RS1535500的精細(xì)定位，發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)G到T的變異與附近位點(diǎn)CPG位點(diǎn)的存在相關(guān)聯(lián)，進(jìn)而影響甲基化水平調(diào)控KCNK17的表達(dá)。結(jié)論基于以上三部分內(nèi)容，得出以下結(jié)論1在中國漢族人群中，RS651821APOA5和RS671ALDH2位點(diǎn)的基因型與代謝綜合征的遺傳易感性相關(guān)新發(fā)現(xiàn)的RS180326BUD13位點(diǎn)與血清TG水平的關(guān)聯(lián)獨(dú)立于區(qū)域內(nèi)已知位點(diǎn)RS651821RS671與飲酒行為存在交互效應(yīng)。2結(jié)合轉(zhuǎn)錄調(diào)控注釋信息可優(yōu)化GWAS的篩選策略RS1880118是一個(gè)在中國漢族人群中新發(fā)現(xiàn)的與血清HDLC水平相關(guān)的遺傳變異位點(diǎn)，與該位點(diǎn)高度連鎖不平衡的RS4724806位點(diǎn)多態(tài)性會通過調(diào)控DAGLB基因表達(dá)影響表型。380％以上的糖脂代謝相關(guān)位點(diǎn)主要通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄水平影響表型經(jīng)多組學(xué)注釋推測的調(diào)控基因中有三分之一與原GWAS報(bào)道的基因一致，如文獻(xiàn)報(bào)道糖代謝相關(guān)位點(diǎn)RS1535500可能的調(diào)控基因?yàn)镵CNK16，但注釋信息提示該位點(diǎn)可能通過影響甲基化水平調(diào)控KCNK17的表達(dá)進(jìn)而影響表型。

簡介：性發(fā)育異常疾病（DISDERSOFSEXDEVELOPMENTDSD）包含一系列難以分類、診斷的復(fù)雜性疾病，其絕大數(shù)是因遺傳物質(zhì)的改變所致，是人類常見的遺傳性疾病，根據(jù)染色體核型不同，性發(fā)育異常疾病可分為性染色體DSD、46XXDSD和46XYDSD，其中性染色體DSD患者的核型復(fù)雜且多樣性。目前檢測染色體異常的主要手段是通過細(xì)胞培養(yǎng)后進(jìn)行染色體G顯帶核型分析，然而由于這種傳統(tǒng)的方法存在許多局限性，例如只能檢測培養(yǎng)后的中期細(xì)胞、結(jié)果受中期分裂相質(zhì)量和數(shù)量的高度制約、對一些微小缺失、倒位、重排和標(biāo)記染色體的檢測無能為力，因而對復(fù)雜性染色體DSD患者的核型分析，應(yīng)結(jié)合多種細(xì)胞與分子遺傳學(xué)技術(shù)進(jìn)行聯(lián)合診斷。目的探討應(yīng)用傳統(tǒng)的染色體核型分析技術(shù)結(jié)合染色體微陣列分析技術(shù)（CHROMOSOMALMICROARRAYANALYSISCMA）、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（POLYMERASECHAINREACTIONPCR）、熒光原位雜交（FLUESCENCEINSITUHYBRIDIZATIONFISH）技術(shù)等多種細(xì)胞與分子遺傳學(xué)技術(shù)在診斷性染色體復(fù)雜結(jié)構(gòu)異常病例中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法綜合應(yīng)用染色體G顯帶、染色體微陣列分析技術(shù)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)及熒光原位雜交技術(shù)，診斷性染色體復(fù)雜結(jié)構(gòu)異常患者的染色體畸變來源及結(jié)構(gòu)特征。結(jié)果G顯帶結(jié)合CMA、FISH檢測了11例患者的性染色體復(fù)雜結(jié)構(gòu)來源，其中8例社會性別為女性的患者中，4例患者的衍生性染色體的異常片段來源于X染色體，4例患者的衍生性染色體異常結(jié)構(gòu)涉及X染色體和Y染色體重組；3例社會性別為男性的患者中，均存在Y染色體的部分缺失。11例患者中有3例性發(fā)育異常男性患者和1例身材矮小的女性患者存在SRY基因擴(kuò)增產(chǎn)物。結(jié)論聯(lián)合應(yīng)用多種細(xì)胞與分子遺傳學(xué)技術(shù)對11例性發(fā)育異?；颊咝匀旧w的復(fù)雜結(jié)構(gòu)異常的檢測，論證了傳統(tǒng)細(xì)胞遺傳染色體核型分析技術(shù)與CMA、FISH、PCR等多種分子遺傳學(xué)技術(shù)相結(jié)合對于染色體復(fù)雜結(jié)構(gòu)異?；颊呖梢悦鞔_診斷，并為患者的發(fā)病機(jī)制研究及后期治療提供重要的遺傳學(xué)依據(jù)。

簡介：單位代碼10635學(xué)號2014317001200碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文玫瑰高原鰍體色白化的遺傳學(xué)基礎(chǔ)研究玫瑰高原鰍體色白化的遺傳學(xué)基礎(chǔ)研究論文作者肖穎琦指導(dǎo)教師彭作剛研究員學(xué)科專業(yè)動物學(xué)研究方向動物進(jìn)化與系統(tǒng)學(xué)提交論文日期2017年10月16日論文答辯日期2017年11月24日學(xué)位授予單位西南大學(xué)中國重慶2017年10月MASTERDISSERTATIONGEICBASISOFTHEALBINISMINTHECAVEFISHTRIPLOPHYSAROSAMASTER’SDEGREECIDATEYINGQIXIAOSUPERVISPROFZUOGANGPENGTHISWKWASSUPPTEDBYTHEFUNDAMENTALRESEARCHFUNDSFTHECENTRALUNIVERSITIESXDJK2015A011SCHOOLOFLIFESCIENCESSOUTHWESTUNIVERSITYCHONGQINGCHINAOCT2017

簡介：南京師范大學(xué)碩士學(xué)位論文毛蚶、菲律賓蛤仔群體遺傳學(xué)及蚶科分子系統(tǒng)演化的研究姓名李旭光申請學(xué)位級別碩士專業(yè)水產(chǎn)養(yǎng)殖指導(dǎo)教師許璞楊家新20070523摘要的ITS一1和ITS一2序列進(jìn)行了擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物純化后經(jīng)T載體連接進(jìn)行了克隆、測序?；贗TS一1和ITS一2序列，分別應(yīng)用鄰位相連法和不加權(quán)算術(shù)平均組對法構(gòu)建了NJ和UPGMA分子系統(tǒng)樹顯示毛蚶和魁蚶首先聚類，然后與泥蚶相聚。這與佩爾森納貝類分類法將毛蚶和魁蚶歸屬為毛蚶屬，泥蚶歸屬為泥蚶屬相一致。關(guān)鍵詞毛蚶；蚶科；菲律賓蛤仔；同工酶；ITS序列遺傳分化；系統(tǒng)演化

簡介：㈣型必Y3402258J．蕊J謄跨樂艨邛蕩太學(xué)‘I二一．。HARB工NNORMALUNLV匿RSITY碩士學(xué)位論文寒地多年生小偃麥抗寒性的分子細(xì)胞遺傳學(xué)研究學(xué)科專業(yè)遺傳學(xué)研究方向細(xì)胞遺傳學(xué)作者姓名李化丹指導(dǎo)教師張延明副教授哈爾濱師范大學(xué)二。一夕＼年六月、中圖分類號Q343碩士學(xué)位論文單位代碼10231學(xué)號2015300629寒地多年生小偃麥抗寒性的分子細(xì)胞遺傳學(xué)研究碩士研究生導(dǎo)師學(xué)科專業(yè)答辯日期授予學(xué)位單位李化丹張延明副教授遺傳學(xué)2018年6月哈爾濱師范大學(xué)

簡介：中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中國北方漢族群體HP0表型的分子遺傳學(xué)及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究姓名黃洪武申請學(xué)位級別碩士專業(yè)法醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師丁梅20050401瓜西赫I1、‘‘_●●●●●‘一，中國北方漢族群體HPO表型的分子遺傳學(xué)及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究前言結(jié)合珠蛋白HAPTOGLOBIN，簡稱HP是一種廣泛存在于人類和哺乳動物血清及其他體液中的D唾液酸糖蛋白。1955年，SMITHIES等發(fā)現(xiàn)HP表型的遺傳多態(tài)性，并將其分為三種主要表型HPL、HP21、HP2，使其成為最早發(fā)現(xiàn)具有電泳多態(tài)性的血清蛋白質(zhì)。HP表型受控于一對等位基因HPL和HP2，呈共顯性遺傳。大量群體資料表明HP表型在大多數(shù)人群具有較好的頻率分布，由于其具有較高的個(gè)人識別機(jī)率和非父排除率，從而廣泛應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)個(gè)人識別和親子鑒定。在實(shí)際應(yīng)用與研究中，人們發(fā)現(xiàn)HP存在許多遺傳變異型，其中以HPO型引人關(guān)注。HP0型即無HP血癥或低HP血癥，是由于血清HP缺如或者濃度極低，用常規(guī)電泳方法檢測不到HP的存在。近年來，有關(guān)HPLD型的報(bào)道日漸增多，甚至在某些地區(qū)其頻率已達(dá)到多態(tài)性水平，但其分子遺傳基礎(chǔ)無法用孟德爾遺傳定律解釋，因此，逐漸引起人們的重視與關(guān)注。目前，國內(nèi)外尚無對HPO型作基因分型的報(bào)道，而在實(shí)際親子鑒定案例中有不少HP0型的出現(xiàn)。針對這一問題，本研究通過對中國北方漢族群體HP表型分布的調(diào)查，篩選HPO型個(gè)體，并應(yīng)用分子生物學(xué)的方法確定IIP0個(gè)體的基因型，建立從分子水平判定RIPO基因型的方法，為法醫(yī)學(xué)應(yīng)用和臨床醫(yī)學(xué)研究莫定基礎(chǔ)。材料與方法本研究應(yīng)用不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)合聯(lián)苯胺染色方法檢測210例無血緣關(guān)系的中國北方漢族個(gè)體的HP表型，篩選王|幻型個(gè)體。針對這1

簡介：川IIFFIIILLLLLIIIIIIIIIY3402261簟位代碼10231學(xué)鼉L2015300632≥≤J“I跨樂癬印蕩太學(xué)。。HARB工NNOR爭鏨KLUN工VERSLTY碩士學(xué)位論文小麥一偃麥草衍生后代抗赤霉病檢測及分子細(xì)胞遺傳學(xué)研究學(xué)科專業(yè)遺傳學(xué)。’研究方向細(xì)胞遺傳學(xué)作者姓名劉佳瑩指導(dǎo)教師張延明副教授哈爾濱師范大學(xué)二。一八年六月中圖分類號Q343碩士學(xué)位論文單位代碼10231學(xué)號2015300632小麥一偃麥草衍生后代抗赤霉病檢測及分子細(xì)胞遺傳學(xué)研究碩士研究生劉佳瑩導(dǎo)師張延明副教授學(xué)科專業(yè)遺傳學(xué)答辯日期2018年6月授予學(xué)位單位哈爾濱師范大學(xué)

簡介：背景姜黃素CURCUMIN為姜黃的主要活性成分之一，具有抗肝纖維化HEPATICFIBROSIS，HF作用，但具體機(jī)制不詳細(xì)，可能與抗氧化、抗炎、清除自由基有關(guān)。現(xiàn)有研究表明，在HF組織中，纖維化相關(guān)基因的甲基化狀態(tài)及表達(dá)水平均表現(xiàn)出較明顯的差異。但姜黃素是否能夠通過影響肝纖維化相關(guān)基因的甲基化狀態(tài)來發(fā)揮抗HF的作用尚不清楚。本課題擬在體內(nèi)外模型中探討姜黃素對肝纖維化相關(guān)基因的甲基化狀態(tài)的影響，可望發(fā)現(xiàn)姜黃素抗HF的新機(jī)制。方法1實(shí)驗(yàn)動物與分組SPF級雄性C57BL6小鼠18只，46周齡，隨機(jī)分為3組對照組FC、模型組FM和姜黃素組FJ，每組6只。2肝纖維化模型的建立及姜黃素干預(yù)FM和FJ組按06MLKG的劑量腹腔注射四氯化碳CC14，每周2次，連續(xù)6周FC組腹腔注射等體積的橄欖油作為對照。同時(shí)，F(xiàn)J組每只鼠按姜黃素200MGKG劑量灌胃，每日一次，連續(xù)6周，F(xiàn)C和FM組灌胃等體積的PBS作為對照。3標(biāo)本收集末次CCL4腹腔注射48H后處死小鼠，采集外周血和肝組織，分別檢測小鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶AST水平和肝臟病理學(xué)形態(tài)。肝臟組織提取DNA，檢測甲基化提取RNA和蛋白，REALTIMEPCR和WESTENBLOT檢測ΑSMA、COL1A1和DNMT的表達(dá)。4甲基化譜的篩選及鑒定通過ROCHENIMBLEGEN小鼠MEDIPCHIP技術(shù)，篩選三組小鼠肝臟組織的甲基化差異基因，進(jìn)一步做GENEONTOLOGYGO分類和KYOTOENCYCLOPEDIAOFGENESGENOMESKEGG信號通路分析對8個(gè)代表性基因（CAMK4、FGFR3、FZD10、GPX4、HOXD3、NFKB2、PRKCB、TCFEB）進(jìn)行MEDIPQPCR驗(yàn)證。5姜黃素處理大鼠肝星狀細(xì)胞（HSCT6細(xì)胞），分為三組對照組，TGFΒ1誘導(dǎo)組，姜黃素處理組檢測細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期，ΑSMA、COL1A1和DNMT的表達(dá)，CAMK4、FZD10、GPX4和HOXD3基因甲基化。6所有數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS160軟件，數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)描述使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，兩組間的差異分析使用T檢驗(yàn)或非參數(shù)檢驗(yàn)，三組及以上的差異分析使用單因素方差分析，P＜005表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果1小鼠血清ALT與AST水平FC、FM和FJ三組小鼠ALT分別為（230±155）UML、（24858±36285）UML、38693±3302UMLAST分別為1008±998UML、15938±3032UML、3222±4756UML，F(xiàn)M組小鼠血清ALT及AST水平較FC組明顯增高，而姜黃素能明顯降低肝纖維化小鼠血清ALT及AST水平。2肝臟組織形態(tài)FC組肝小葉和匯管區(qū)的形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞完好，匯管區(qū)和匯管區(qū)四周未出現(xiàn)小膽管和增生的纖維組織FM組見肝細(xì)胞大量壞死，小葉結(jié)構(gòu)紊亂，并伴有炎癥細(xì)胞浸潤，肝組織內(nèi)膠原纖維明顯增多，肝小葉纖維間隔形成FJ組可見肝小葉結(jié)構(gòu)較清晰，肝組織纖維沉積較FM組明顯減輕。3ΑSMA、COL1A1和DNMT1表達(dá)REALTIMEPCR和WESTERNBLOT提示，F(xiàn)M組ΑSMA、COL1A1和DNMT1表達(dá)較FC組明顯增多，F(xiàn)J組與FM組比較，ΒSMA、COL1A1和DNMT1表達(dá)均下降。4甲基化芯片結(jié)果根據(jù)FC組低甲基化，F(xiàn)M組高甲基化，共篩選934個(gè)甲基化差異基因。根據(jù)FJ組低甲基化，F(xiàn)M組高甲基化，選擇了甲基化差異基因共550個(gè)。其中有75個(gè)屬于兩者重合部分，完成GO、KEGG信號分析，可見其主要涉及細(xì)胞過程調(diào)節(jié)、生物學(xué)過程調(diào)節(jié)、細(xì)胞代謝過程、發(fā)育過程等信號通路最常見的依次為腫瘤相關(guān)通路、NKKAPPAB信號、MAPK信號、WNT信號通路、NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用等。在75個(gè)差異基因中，根據(jù)PEAKSCE＞2，PEAKMVALUE＞07，基因啟動子類型為HCP或ICP，基因類型包括細(xì)胞周期、損傷修復(fù)、增殖及凋亡等指標(biāo)，共選擇代表基因8個(gè)CAMK4、FGFR3、FZD10、GPX4、HOXD3、NFKB2、PRKCB、TCFEB，然后做MEDIPQPCR驗(yàn)證，測定結(jié)果和芯片相同P＜005，表明芯片具有較高的可靠性。5體外實(shí)驗(yàn)姜黃素處理大鼠肝星狀細(xì)胞HSCT6細(xì)胞，可抑制TGFΒ1誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖，使細(xì)胞周期G2M期比例減少，降低ΑSMA、COL1A1和DNMT表達(dá)逆轉(zhuǎn)CAMK4、FZD10、GPX4和HOXD3基因高甲基化狀態(tài)。結(jié)論1姜黃素對肝纖維化有保護(hù)作用。2姜黃素可能通過對DNA甲基化的調(diào)節(jié)而發(fā)揮抗肝纖維化作用。

簡介：目的本研究以內(nèi)毒素LPS激活人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVECS釋放炎癥因子為模型，探索氯化鑭LACL3對血管內(nèi)皮細(xì)胞NFΚBJMJD3信號軸的影響，并分析其可能的表觀遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制，為有效抑制血管炎癥反應(yīng)，開發(fā)稀土藥用價(jià)值提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1、細(xì)胞培養(yǎng)及分組復(fù)蘇并常規(guī)培養(yǎng)原代HUVECS，將處于對數(shù)生長期的HUVECS隨機(jī)分為空白對照組（CONTROL給予無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)2H）、LPS組以含1ΜGMLLPS的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)2H、LACL3組以含25ΜMMLLACL3無血清培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2H及LPSLACL3組以含25ΜMMLLACL3無血清培養(yǎng)基預(yù)處理細(xì)胞30MIN后，更換含1ΜGMLLPS無血清培養(yǎng)基繼續(xù)作用細(xì)胞2H。2、MTT法檢測LACL3對HUVECS細(xì)胞活力的影響。3、分離HUVECS胞漿及胞核蛋白，蛋白質(zhì)印跡法檢測NFΚB信號系統(tǒng)相關(guān)蛋白表達(dá)水平。4、MILLIPE轉(zhuǎn)錄因子試劑盒檢測胞核提取物中NFΚBP65蛋白與靶序列的結(jié)合活性。5、采用實(shí)時(shí)定量PCR及蛋白質(zhì)印跡法從MRNA及蛋白質(zhì)水平檢測HUVECS中JMJD3的表達(dá)量。6、應(yīng)用MILLIPE染色質(zhì)免疫共沉淀試劑盒建立NFΚBP65、JMJD3及H3K27ME3關(guān)聯(lián)的DNA文庫，結(jié)合實(shí)時(shí)定量PCR分析在目標(biāo)基因TNFΑ、MMP9、IL6、IL1Β、COX2及ICAM1轉(zhuǎn)錄起始結(jié)合位點(diǎn)NFΚBP65、JMJD3、H3K27ME3的富集變化。7、采用實(shí)時(shí)定量PCR法及ELISA試劑盒分別檢測細(xì)胞中TNFΑ、MMP9、IL6、IL1Β及ICAM1炎性基因的表達(dá)水平及其在細(xì)胞上清液中濃度的變化。結(jié)果1、LACL3對HUVECS活力的影響與對照組比較，當(dāng)LACL3濃度為25、50、25、50、100ΜMOLL時(shí)HUVECS的生長情況無明顯差異，當(dāng)作用濃度為200ΜMOL時(shí)，HUVECS的生長出現(xiàn)抑制現(xiàn)象與對照組相比P＜005，實(shí)驗(yàn)濃度25ΜMOLL的LACL3對HUVECS未體現(xiàn)出毒性作用。2、LACL3抑制LPS誘導(dǎo)HUVECSNFΚBJMJD3表達(dá)上調(diào)1WESTERNBLOT結(jié)果示，與對照組相比，LPS組胞核NFΚBP65表達(dá)水平明顯升高，而LPSLACL3組則顯著下調(diào)，LACL3組NFΚBP65表達(dá)水平變化不明顯IΚBΑ的表達(dá)量在對照組為最高，其次是LACL3組，表達(dá)略有下調(diào)，而在LPS組則出現(xiàn)顯著下調(diào)，IΚBΑ的表達(dá)量在LPSLACL3組則低于LACL3組，但與LPS組相比無明顯變化。2JMJD3的表達(dá)與活性RTQPCR與WESTERNBLOT結(jié)果基本一致，相對于對照組，LPS組JMJD3基因表達(dá)水平提高，LPSLACL3組則顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜001，而LACL3組無明顯差異。3、LACL3對HUVECS中NFΚBP65與其下游靶序列結(jié)合活性的影響LPS作用于HUVECS后，NFΚBP65結(jié)合DNA的活性顯著高于對照組P＜001，而LPSLACL3組顯著低于LPS組P＜001，LACL3組與對照組相比則變化不顯著。4、NFΚBP65與炎性基因啟動子結(jié)合水平分析NFΚBP65關(guān)聯(lián)的DNA文庫結(jié)合實(shí)時(shí)定量PCR分析提示1LPS組NFΚBP65在TNFΑ、MMP9、IL6、IL1Β、COX2及ICAM1基因啟動子區(qū)的募集量明顯高于對照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0052LPSLACL3組NFΚBP65在上述基因啟動子區(qū)的募集量均明顯低于LPS組P＜005與對照組相比，NFΚBP65在TNFΑ、IL6、IL1Β及ICAM1基因啟動子區(qū)的募集量明顯下降P＜005，而在MMP9及COX2基因啟動子區(qū)的募集量無明顯變化。3LACL3組與對照組相比，NFΚBP65在TNFΑ、ICAM1基因啟動子區(qū)的募集量明顯升高P＜005，而在IL6、IL1Β、及COX2基因啟動子區(qū)的募集量無顯著差異，在MMP9基因啟動子區(qū)的募集量則顯著下降P＜005可見LACL3可以抑制阻斷LPS誘導(dǎo)的NFΚBP65在促炎基因啟動子區(qū)的富集，而單獨(dú)使用LACL3作用細(xì)胞，胞內(nèi)NFΚBP65在促炎基因啟動子區(qū)富集的調(diào)控則存在多樣性，使其募集量在TNFΑ及ICAM1基因啟動子區(qū)明顯升高，在IL6、IL1Β及COX2基因啟動子區(qū)無明顯變化，而在MMP9基因啟動子區(qū)的募集量則顯著下降。5、JMJD3與炎性基因啟動子結(jié)合水平分析JMJD3關(guān)聯(lián)的DNA文庫結(jié)合實(shí)時(shí)定量PCR分析提示1與對照組相比，LPS組及LACL3組JMJD3在上述基因啟動子區(qū)的募集量均顯著升高P＜0052LPSLACL3組JMJD3在上述基因啟動子區(qū)的募集量要明顯低于LPS組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005與對照組相比，JMJD3在IL1Β及COX2基因啟動子區(qū)的募集量明顯下降，在IL10及ICAM1基因啟動子區(qū)的募集量明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005，而在TNFΑ、MMP9及IL6基因啟動子區(qū)的募集量無明顯變化。表明LACL3可以抑制LPS誘導(dǎo)的JMJD3在TNFΑ、MMP9、IL6、IL1Β、COX2及ICAM1基因啟動子區(qū)的富集，而單獨(dú)使用LACL3孵育HUVECS發(fā)現(xiàn)JMJD3在促炎基因啟動子區(qū)的募集量均顯著升高。6、炎性基因啟動子區(qū)H3K27ME3甲基化水平分析H3K27ME3關(guān)聯(lián)的DNA文庫結(jié)合實(shí)時(shí)定量PCR分析提示1LPS組H3K27ME3在上述基因啟動子區(qū)的水平明顯低于CONTROL組P＜0052LPSLACL3組在上述所有基因啟動子區(qū)的水平要明顯高于LPS組，但同時(shí)低于對照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0052LACL3組與對照組相比，H3K27ME3在TNFΑ、IL6、COX2及ICAM1基因啟動子區(qū)的水平明顯升高P＜005，在MMP9基因啟動子區(qū)的水平明顯低于對照組P＜005，而在IL1Β基因啟動子區(qū)的水平無明顯變化。可見LACL3可以抑制上述炎性基因啟動子區(qū)的H3K27ME3去甲基化，單獨(dú)使用LACL3處理HUVECS，H3K27ME3的水平在TNFΑ、IL6、COX2及ICAM1基因啟動子區(qū)升高，在MMP9基因啟動子區(qū)則下降，在IL1Β基因啟動子區(qū)則無明顯變化。7、LACL3抑制LPS誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎性介質(zhì)的表達(dá)與釋放RTQPCR及ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）分別在MRNA及蛋白水平顯示，與對照組相比，TNFΑ、IL6、IL1Β、ICAM1及MMP9在LPS組表達(dá)量顯著增多，LACL3組無顯著變化，而在LPSLACL3組，上述炎性介質(zhì)的表達(dá)與釋放明顯低于LPS組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。表明LACL3可以有效抑制LPS引起的TNFΑ、MMP9、IL6、IL1Β及ICAM1的分泌。結(jié)論1、LPS通過誘導(dǎo)HUVECS中NFΚBP65的活化并使其轉(zhuǎn)位入核進(jìn)而上調(diào)JMJD3的表達(dá)。JMJD3入核作用于炎性基因啟動子區(qū)的H3K27ME3使其去甲基化，暴露目標(biāo)基因轉(zhuǎn)錄起始序列，并促進(jìn)NFΚBP65及JMJD3在促炎基因啟動子區(qū)富集，三者相互協(xié)同，激活炎性基因TNFΑ、MMP9、IL6、IL1Β、COX2及ICAM1的表達(dá)。2、LACL3通過阻斷LPS誘導(dǎo)的HUVECS中NFΚBP65的活化及核轉(zhuǎn)位，抑制JMJD3的表達(dá)上調(diào)。減少LPS誘導(dǎo)的NFΚBP65及JMJD3在促炎基因啟動子區(qū)的富集，并抑制促炎基因啟動子區(qū)H3K27ME3的去甲基化，使炎性基因保持沉默狀態(tài)，從而抑制LPS誘導(dǎo)的HUVECS分泌炎性因子TNFΑ、MMP9、IL6、IL1Β及ICAM1。3、在本研究中作為對照的LACL3組中，筆者發(fā)現(xiàn)雖然LACL3可促使HUVECS中JMJD3在促炎基因啟動子區(qū)募集量的顯著增加，但這一現(xiàn)象并未導(dǎo)致促炎因子的表達(dá)上調(diào)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，NFΚBP65JMJD3的表達(dá)與活性均受到LACL3的抑制，上述促炎基因啟動子區(qū)NFΚBP65及H3K27ME3的水平的調(diào)控則存在多樣性，且在促炎癥因子表達(dá)上調(diào)的精細(xì)調(diào)控過程中NFΚBP65的募集與活性以及H3K27ME3去甲基化缺一不可，體現(xiàn)出鑭對促炎基因的表達(dá)的差異化調(diào)控機(jī)制。