簡介：安徽農(nóng)業(yè)大學博士學位論文二苯并噻吩單加氧酶DSZC和二苯并噻吩砜單加氧酶DSZA的蛋白晶體學結構研究姓名蒲順昌申請學位級別博士專業(yè)微生物學指導教師黃勃李增智201012安徽農(nóng)業(yè)大學博士學位論文摘要株布氏白僵菌分成8種帶型。8種帶型的ITS序列在線BLAST比對發(fā)現(xiàn)這些原先被鑒定為布氏白僵菌的菌株中多數(shù)刁I是布氏白僵菌，其中有12株的ITS序列和布氏白僵菌相似率為100％。這12株布氏白僵菌包含在4種基因型中，其中B基因型有9個菌株，通過形態(tài)學特征研和分子數(shù)據(jù)，將這12株確定為布氏白僵菌結合形態(tài)學特征和ITS序列，將5個A帶型菌株鑒定為假球孢白僵菌；屬于G帶型以及與G帶型類似的共有5L株，G帶型代表菌株RCEFL697序列在NCBI上比對發(fā)現(xiàn)和狹義球孢白僵菌相似率為100％，結合形態(tài)學特征將這種帶型或者類似帶型的菌株鑒定為球孢白僵茵；C帶型的菌株RCEF4715序列與GENBANK登錄的一株蟲草的白僵菌無性型相差6個堿基，相似率為99％，結合形態(tài)特征和分子數(shù)據(jù)將C帶型鑒定為“E”分支的種；屬于H帶型的RCEF3903菌株ITS序列與最接近的馬拉維白僵菌BEAUVERIAMALAWIENSIS序列相似率為98％，根據(jù)其在系統(tǒng)發(fā)育樹上的位置，加上其獨特的形態(tài)特征，確認該菌株是白僵菌屬的一個新種，命名為中國白僵菌BEAUVERIASINENS。利用SSR分子標記對麻姑山球孢白僵菌遺傳多樣性進行研究，并探討了寄主轉移問題。通過SSR電泳，102株球孢白僵菌分成31個多位點微衛(wèi)星基因型。按時間和寄主劃分群體研究這些菌株的遺傳分化指數(shù)均表明種群內(nèi)的遺傳變異主要來源于居群內(nèi)部，并且種群內(nèi)的遺傳分化系數(shù)GST達到了高度分化水平。麻姑山球孢白僵菌的NEI臺基因多樣性指數(shù)Ⅳ和SHANNON信息指數(shù)，分別為01987不W02789。在該地區(qū)的5種主要微衛(wèi)星基因型中，基因型XCL可以通過不同寄主完成在全年采集月份的延續(xù)，這表明，球孢白僵菌在自然環(huán)境中隨著寄主的種類改變而不斷改變其寄生目標，即通過寄主轉移完成此類基因型株系在森林生態(tài)系中的傳播和繁殖。其他基因型基本上可以完成在2至1J3個月的延續(xù)。同時發(fā)現(xiàn)，同一基因型菌株可以侵染不同的寄主昆蟲，而相同寄主也可以被不同基因型菌株侵染，兇此該地區(qū)的球孢白僵菌不僅在種水平而且在菌株水平上寄主?；暂^低。在對瑯琊山地區(qū)378株球孢白僵的遺傳多樣性和寄主轉移的研究中，發(fā)現(xiàn)SSR電泳將這些菌株分成145個多位點微衛(wèi)星基因型；按照寄主和季節(jié)劃分居群研究這378株球孢白僵菌的基因分化系數(shù)GST分別為01815和01964，都達到了高度分化水平，基因流∞W分別為11208汞1100瑯琊山球孢白僵蔭總的肫J量基因多樣性指數(shù)H和SHANNON信息指數(shù)，分別為02101和03299。綜合分析表明，瑯琊山地區(qū)的球孢白僵菌種群內(nèi)的遺傳變異也是來源于居群內(nèi)。比較發(fā)現(xiàn)，瑯琊山地區(qū)這種天然次生林中的球孢白僵菌種群內(nèi)的遺傳多樣性明顯高于宣城的麻姑山人工馬尾松林。在這7個相對優(yōu)勢的基因型中，LYSL4基因型通過轉寄主幾乎完成了其在一整年內(nèi)的延續(xù)，而其他基因型基本上都可以延續(xù)47個月的時間。LYS8基因型寄主為斑衣蠟蟬占有該基因型中菌株的42％，這表明，在部分基因型咔，由于寄主的EFILL，可能會導致了這類基因型菌株成為某些月份的相對優(yōu)勢基因型菌株。綜合分析表明瑯I(yè)I

簡介：1固氮作用是由固氮菌中的固氮復合物完成的。固氮復合物由固氮酶和固氮還原酶組成，其中固氮酶是一個由NIFD和NIFK蛋白組成的Α2Β2異四聚體，固氮還原酶是一個由NIFH蛋白組成的同二聚體。目前，已經(jīng)在沒有固氮作用的嗜熱產(chǎn)烷生物詹氏甲烷球菌中發(fā)現(xiàn)了固氮酶NIFDK和NIFH同源物的表達（命名為NFLDK和NLFH，NFLNIFLIKE，MJANNHII中的NLFH在這里被稱作MJNIFH1），但是其功能還不清楚。解出MJNIFH1的晶體結構將對理解其功能以及了解其在進化上的作用提供很大的幫助。在本課題中，構建了MJNIFH1的表達載體，并通過鎳柱親和和HILOAD1660SUPERDEX200SIZEEXCLUSIONCOLUMN凝膠層析等方法得到了純化后的目的蛋白。目的蛋白通過懸滴氣相擴散法在287K進行晶體生長，并得到可以進行X射線衍射和數(shù)據(jù)收集的蛋白晶體。在上海同步輻射加速器收集到一套最高分辨率為33的衍射數(shù)據(jù)。晶體的空間群是P4132，晶胞參數(shù)為ABC13945，確定每個不對稱單位含有一個蛋白分子。2動力蛋白DYNEIN）是一種細胞中的馬達蛋白，可以將包含ATP在內(nèi)的化學能轉換為運動過程中的機械能，在有絲分裂、膜轉運和胞內(nèi)運輸中起著關鍵作用。動力蛋白作用的發(fā)揮需要許多蛋白的共同協(xié)調(diào)作用，如NUDEL家族中的一員NDL1，對于動力蛋白正常地定位到動粒上非常關鍵。NDL1可以激活動力蛋白調(diào)節(jié)的蛋白轉運，而當它結合到分裂激素和動力蛋白時，可以穩(wěn)定動力蛋白或動力蛋白激活蛋白，使其不會進行微管依賴的脫落過程，從而進一步產(chǎn)生分子馬達的作用。NDL1缺失時會導致結合到微管正極的動力蛋白減少，從而影響有絲分裂等過程。在本課題中，為獲得釀酒酵母中NDL1蛋白SCNDL1的晶體結構，為進一步了解其發(fā)揮功能的分子機制提供線索，構建了SCNDL1的表達載體，并表達、純化得到目的蛋白，并進行晶體生長。目前得到一顆SCNDL1蛋白晶體，晶體優(yōu)化正在進行中。

簡介：中文摘要增殖細胞核抗原PROLIFERATINGCELLNUCLEARANTIGEN，PCNA，在DNA復制、DNA損傷修復、細胞周期調(diào)控、染色質新陳代謝等生理活動中發(fā)揮重要作用。為獲得全長的PCNA的晶體結構，本研究對果蠅源的PCNA在大腸桿菌BL21DE3中進行表達，并采用親和層析、凝膠過濾層析進行純化，獲得狀態(tài)穩(wěn)定均一、純度高、適于結晶的蛋白。蛋白結晶后運用X射線晶體衍射方法進行了初步晶體學分析，所得晶體分辨率達20A，屬于H3空間群，晶胞參數(shù)ABL1516A，C3828A，0【P90。，丫120。。果蠅PCNA蛋白晶體結構由分子置換的方法確定，以首尾相接的方式形成一個對稱的同源三聚體，N端和C一端結構域通過結構域間連接環(huán)連接，另外N一端和C一端結構域也通過疏水作用力相互結合。與人源的PCNA相比，果蠅PCNA的結構域間連接環(huán)存在構象上的變化，這為兩者功能上的差異提供了依據(jù)。本研究為深入研究PCNA的功能提供了結構生物學基礎。關鍵詞果蠅PCNA’蛋白晶體結構同源三聚體DNA復制與修復細胞周期調(diào)控目錄弓L言1第1章材料與方法311材料3111實驗材料3112試劑3113實驗儀器3114試劑配制412實驗方法。6121果蠅CDNA文庫的獲得一6122果蠅PCNA蛋白序列信息一7123目的基因的克隆8124目的基因的初步鑒定11125目的蛋白的表達12126目的蛋白的純化14127蛋白結晶17128結構的解析與完善18第2章實驗結果與討論。1921果蠅PCNA全長蛋白的表達純化。1922果蠅PCNA全長蛋白晶體學研究。22221果蠅PCNA全長蛋白晶體篩選與優(yōu)化一2223果蠅PCNA全長蛋白晶體數(shù)據(jù)的收集與處理2424果蠅PCNA蛋白的結構。25241果蠅PCNA蛋白的整體結構25242果蠅PCNA蛋白同源三聚體結構形成的作用力25243果蠅PCNA蛋白相鄰兩個單體間作用力一26244果蠅PCNA蛋白與人源PCNA蛋白結構上的比較28第3章結論與展望3031結論3032展望30參考文獻31綜I苤34綜述參考文獻47攻讀學位期間的研究成果51致謝52學位論文獨創(chuàng)性聲明。53學位論文知識產(chǎn)權權屬聲明53

簡介：分類號分類號學號學號M201071478學校代碼學校代碼10487密級密級碩士學位論文碩士學位論文CDK2在畢赤酵母中的異源表達在畢赤酵母中的異源表達及初步晶體學研究及初步晶體學研究學位申請人學位申請人黃林學科專業(yè)學科專業(yè)生物化工生物化工指導教師指導教師張后今張后今教授教授答辯日期答辯日期2013年1月22日獨創(chuàng)性聲明獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除文中已經(jīng)標明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者簽名日期年月日學位論文版權使用授權書學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權華中科技大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。保密□，在年解密后適用本授權書。不保密□。（請在以上方框內(nèi)打“√”）學位論文作者簽名指導教師簽名日期年月日日期年月日本論文屬于

簡介：獨創(chuàng)性聲明學位論文題目型直薟熊叢塑壘K垡2皇熊叢Q2蔓的直隆麥達純化及初壟晶體學研究本人提交的學位論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。論文中引用他人己經(jīng)發(fā)表或出版過的研究成果，文中已加了特別標注。對本研究及學位論文撰寫曾做出貢獻的老師、朋友、同仁在文中作了明確說明并表示衷心感謝。學位論文作者、弩≥強簽字日期7。L鏟‘月弓日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解西南大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權西南大學研究生院籌可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。保密的學位論文在解密后適用本授權書，本論文叼不保密，口保密期限至年月止。學位論文作者簽名、翠五弓舅導師簽名簽字日期7引牛年6月弓日簽字日期日西南大學碩士學位論文4．6ATM025的克隆????????????????????????????294．7ATM025的純化????????????????????????????294．7．1中量表達測試?????????????????????????．．294．7．2寶屯化ATM025??????????????????????????????????．294．7．3ATM025標簽去除????????????????????????304．7．4ATM025分子篩層析???????????????????????304．8ATM025的結晶????????????????????????????314．9TEV酶純化?????????????????????????????．31第5章討論????????????????????????????????．．335．1TEV酶活性??．?????????????????????????335．2擬南芥ATMAP4KA2與人源MST4的序列比較????????????．．335．3擬南芥ATMAP4KA2的晶體優(yōu)化??????????????????一335．4擬南芥ATMAP4KA2激酶結構域及WSF基序的純化??????????．335．5擬南芥ATM025與人源M025的序列比較??????????????．345．6擬南芥ATM025的純化??????????????????????．34第6章結論????????????????????????????????．．35參考文獻??????????????????????????????????37附畝毛????????????????????????????????????????????????41致{射????????????????????????????????????????????????43研究生期間發(fā)表文章?????????????????????????????45

簡介：中圈料璽敢求犬謄碩士學位論文核MRNA轉運相關蛋白SWTL的初步晶體學研究作者姓名學科專業(yè)導師姓名完成時間MUSTAFAABBAKARMUSAADAM生物化學與分子生物學滕脈坤教授李旭博士二O一四年五月111111111ILLLLLILLL1LLLLL1LLLLLLLLLLIIIY2590101UNIVERSITYOFSCIENCEANDTECHNOLOGYOFCHINAADISSERTATIONFORMASTER’SDEGREEPURIFICATION，CRYSTALLIZATIONANDPRELIMINARYXRAYDIFFRACTIONANALYSISOFTHENUCLEARMESSENGERRNAEXPORTRELATEDPROTEINAUTHOR’。一～一一一一一一一‘一‘一～一一～”’SNAMEMUSTAFAABBAKARMUSAADAMSPECIALITYBIOCHEMISTRYANDMOLECULARBIOLOGYSUPERVISORPROFMAIKUNTENGDRXULIFINISHEDTIMEMAY20143

簡介：中文摘要酪蛋白激酶1家族CASEINKINASE1FAMILYCKL在細胞的很多生理生化功能方面發(fā)揮著調(diào)節(jié)作用，并在WNT／WINLESS和HEDGEHOG等信號途徑中發(fā)揮著重要作用。本文對人源CKLY的一個同源結構域一果蠅CKLGILGAMESHI、進行了蛋白表達、純化及結晶。晶體形成后，運用X射線晶體衍射方法對晶體進行了初步分析，其分辨率可達285A，屬于尸43212空間群，晶胞參數(shù)AB52025A，C291727A。果蠅GILGAMESHI蛋白晶體結構由分子置換的方法確定。結構解析發(fā)現(xiàn)它有一個保守的催化區(qū)域及一個相對活躍的構象。結構比較表明GILGAMESHI結構域存在一個位于CCL螺旋和P4折疊中間的延伸的環(huán)，然而正是這段折疊環(huán)對其活性和功能起著調(diào)節(jié)作用。關鍵詞果蠅CKL；結晶；結構；折疊環(huán)；信號通路目錄弓I言1第1章材料與方法311材料3111實驗材料3112試劑3113實驗儀器3114試劑配制412實驗方法6121果蠅CDNA文庫的獲得6122果蠅GILGAMESHI蛋白序列信息8123目的基因的克隆9125目的蛋白的表達13126目的蛋白的純化15227賴氨酸甲基化20128蛋白結晶20129結構的解析與完善21第2章實驗結果與討論2321果蠅GILGAMESHI蛋白的表達純化及賴氨酸甲基化2322果蠅GILGAMESHI蛋白晶體學研究一27221果蠅GILGAMESHI蛋白晶體篩選與優(yōu)化2723果蠅GILGAMESHI蛋白晶體數(shù)據(jù)的收集與處理2824果蠅GILGAMESHI蛋白的結構30241果蠅GILGAMESHI激酶結構域蛋白的整體結構30242果蠅GILGAMESHI激酶結構域蛋白與人源CKL一蛋白結構的比較31第3章結論與展望3231結侖3232展望32參考文獻33綜述35綜述參考文獻51攻讀學位期間的研究成果56致射S7學位論文獨創(chuàng)性聲明58學位論文知識產(chǎn)權權屬聲明58

簡介：南京農(nóng)業(yè)大學博士學位論文PSEUDOMONASPUTIDADLLE4124苯三酚1，2雙加氧酶的晶體結構及兩種農(nóng)藥降解相關酶的蛋白質晶體學研究姓名劉衛(wèi)東申請學位級別博士專業(yè)微生物學指導教師崔中利201006件下晶體的三維結構PNPC的主體由6個較長A螺旋、7個B折疊及轉角組成，其主鏈走向與1TMX的主鏈走向一致。PNPC結構分為2個結構域N端A螺旋結構域NHD和C端催化域CCD，處于CCD的活性中心的四個氨基酸殘基分別為TYR160、N瓜194、HIS218以及HIS220，其中N瓜160和HIS218處于同一個平面，并垂直于TⅥT194和HIS220所在的平面。PNPC的二聚體模型中，兩個單亞基NHD的HL、H3、H4、H5、H6、H7互相作用構成二聚體的連接區(qū)，而且在連接區(qū)的中心有一個疏水通道，有兩個長鏈磷脂分子貫穿疏水通道，它們的疏水尾部在通道的中心，親水區(qū)在疏水通道的外部在兩個單亞基NHD組成的連接區(qū)里，一個亞基中的H1和另外一個亞基中的H6距離接近，兩個亞基的H3互相靠近并且反向平行，通道口由H3、H4及H7構成，H4、H5中的部分氨基酸殘基參與了通道的構成，H5、H7距離CCD的活性中心氨基酸接近疏水通道主要由兩個亞基分別提供以下氨基酸殘基組成PHE28、ILE3L、LEU35、LEU39、PHE42、LEU48、ILE57、PHE59、LEU60、LEU78、LEU82、ILE76以及AL久208。PNPC蛋白在兩種不同結晶條件下的結構的活性中心的四個氨基酸殘基之間的距離不同，以檸檬酸三鈉作沉淀劑的晶體結構中，R限160和HIS218的距離為246A，TⅥT194和HIS220的距離為423A，而以硫酸銨作沉淀劑的晶體結構中，聊己160和HIS218距離為233A，TYR194和HIS220的距離為470A。它們的疏水通道中心的磷脂類尾部也有區(qū)別，檸檬酸三鈉結晶的晶體的結構該區(qū)域可能連接有一個BENZO類似物，并且和兩個分子中的LEU35有作用，而以硫酸銨作沉淀劑的晶體結構中則沒有利用PET表達系統(tǒng)構建了表達從PNPC蛋白質序列N端開始，依次截短23、46以及64個氨基酸的三個表達質粒，并在大腸桿菌ECOLIBL21DE3PLYSS中對它們進行表達。它們的表達產(chǎn)物分別對應于從PNPC蛋白質的N端結構域中截去一個，兩個，三個組成連接區(qū)的較長A螺旋的突變體，這些表達產(chǎn)物均失去了催化1，2，4苯三酚分解的能力這表明，PNPCNHD的三個A螺旋對PNPC的催化能力是必需的對硝基苯酚4單加氧酶PNPA是一個FAD依賴性單加氧酶，它在NADH和FAD存在下，通過加氧作用使PNP脫硝基生成苯醌。通過NINTA親和層析以及分子篩對重組表達于ECOLIBL21DE3PLYSS中的PNPA蛋白質進行純化。利用坐滴氣相擴散法在293K初篩并優(yōu)化荻得一個PNPA的結晶條件蛋白質濃度為10MG／ML，結晶池母液為O1MHEPESPH70，15％PEG4000。該條件下長出的晶體能衍射到224A，空間群為P2T2121，晶胞參數(shù)為A5447，B7756，C20917，A90000，B90OOO，丫90000。通過分子置換找出了PNPA結構的部分主鏈。另外還采集到PNPAII

簡介：⑧論文作者簽名蕉鍾，塑指導教師簽名論文評閱人1評閱人2評閱人3評閱人4評閱人5答辯委員會主席委員1委員2委員3委員4委員5答辯日期一院一院一出究一塑垃研一研一。|芏學一吐盟鹽盈僉金略生一生一幽浙一浙一敦＼一＼一J生授一授一幔一教一教一O|＼一、VR_J一平一型叢總一永一趔羞一浙江大學碩士畢業(yè)論文致謝致謝該研究在浙江大學生命科學研究院完成，在這兒度過的兩年半時間里，有困難與挫折，更有成長與收獲。在此，感謝各位老師的指導、師兄師姐的幫助和同學親友的支持，讓我在科研的路上不斷進步，受益匪淺。感謝我最敬愛的導師宋海衛(wèi)老師，用最專業(yè)的態(tài)度，豐富的知識和經(jīng)驗，給我科研上的指導，使我們的實驗得以有序進行，不斷取得新的成果。更重要的是，宋老師正直的人品、嚴謹?shù)膽B(tài)度、隨和謙遜的性格和父親般的慈愛，讓我除了科研和學J上的收獲，也在為人處事和人生規(guī)劃方面，有了正確的認識和清晰的目標。宋老師是我一生的楷模，他的教導將使我受益終生感謝在該研究過程中，參與相關實驗的成員，感謝郭玄宗、劉舟、周香蓮等先后在我實驗上的指導和幫助，該研究成果與他們的參與和幫助密不可分，希望他們在科研的道路上越走越好，不斷實現(xiàn)新的高度感謝實驗室其他成員的幫助和支持，任文丹、何洋等師兄師姐的指導，使我學會許多實驗方法和操作技能，得到了科研思路和思維方法的啟發(fā)；孫強祖、鄭曉笑、王怡雯、賈羽等同學的幫助，使我很好地融入科研生活和實驗室環(huán)境；同時感謝潘曉霞、王珂和其他實驗員的幫助和支持，使本課題的實驗得以順利進行。感謝大家對于我無私的幫助和指導，這些是我在浙大最難忘的回憶。感謝浙江大學生命科學研究院的葉升老師、夏總平老師、朱永群老師等對我科研上指導、幫助和建議，讓我受益匪淺。感謝蘇麗老師、劉湛老師在學習和生活很多方面的指導，是你們的辛苦工作，讓我們在擁有科研機會的同時，也擁有了豐富的校園生活，也給了我珍貴的個人關懷和幫助。感謝我的家人，無論我選擇什么道路，都可以一直堅定地支持我，給我最偉大的精神鼓勵和物質幫助。感謝我的朋友們，在學7和生活的各方面，都能給我建議和鼓勵，讓我有堅持和努力的勇氣和信心，謝謝大家最后，感謝論文審閱的評審專家，給我專業(yè)的評審意見感謝各位答辯委員會成員，給我中肯的建議和指導

簡介：分類號Q窆3窆窆學校代碼Q5壘2密級利用蛋白質組學技術研究蘇云金桿菌晶體蛋白CRY6AA2對線蟲的作用ASTUDYONTHEEFFECTSOFBACILLUSTHURING““CRYSTALPROTEINCRY6AA2THUNNLGWNSTSCSTALPROTEIN6AA2AGAINSTCAENORHABDITISELEGANSBYPROTEOMICSTECHNOLOGY指導教師姓名、職稱金王全進至湖南師范大學學位評定委員會辦公室二零一四年六月中也出現(xiàn)相應的變化為線蟲提供足夠的能量。同時，結果顯示CRY6AA2能夠刺激DAF．2的上調(diào)，抑制DAF．16，因此可能縮短線蟲的壽命。本論文首先初步對確定了CRY6AA2對根結線蟲的多種毒力作用，證明CRY6AA2對根結線蟲具有很好的防治效果，但是還需要將CRY6AA2用于盆栽實驗和田間實驗，去驗證其在盆栽實驗和田間實驗的效果。其次，該論文初步探索了CRY6AA2與線蟲之間的相互作用，在以后的研究中我們需要對以下幾個方面進行深入的探討1與能量相關的酶及其所在的途徑在線蟲防御CRY6AA2毒素時的具體作用過程；2DIM．1如何發(fā)揮防御CRY6AA2毒素的作用；3CRY6AA2如何影響線蟲壽命。關鍵詞蛋白質組學技術；蘇云金芽胞桿菌；CRY6AA2；根結線蟲；秀麗小桿線蟲；