簡介：最新精品WORD歡迎下載可修改綜合練習(xí)綜合練習(xí)一、單項(xiàng)選擇題（共一、單項(xiàng)選擇題（共2525小題，小題，1分/題，共題，共2525分）分）1、真核生物的TATA盒是（）A、DNA合成的起始位點(diǎn)B、RNARNA聚合酶與聚合酶與DNADNA模板穩(wěn)定結(jié)合處模板穩(wěn)定結(jié)合處C、RNA聚合酶的活性中心D、翻譯起始點(diǎn)E、轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)2、下列哪中雜交方式不屬于核酸分子雜交（、下列哪中雜交方式不屬于核酸分子雜交（））A、原位雜交；B、斑點(diǎn)雜交；C、SOUTHERN雜交；D、NORTHERN雜交；E、WESTERNWESTERN雜交。雜交。3、指導(dǎo)合成蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因大多數(shù)為（）A、高度重復(fù)序列；B、回文序列；C、單拷貝序列、單拷貝序列；D、中度重復(fù)序列4、下列關(guān)于大腸桿菌DNA聚合酶Ⅲ的敘述哪一項(xiàng)是正確的（）A、具有、具有3’→’→5’核酸外切酶活性’核酸外切酶活性B、不需要引物C、需要4種不同的三磷酸核苷D、DUTP是它的一種作用物E、可以將二個DNA片段連起來5、下列不屬于真核生物基因表達(dá)調(diào)控的反式作用因子是（、下列不屬于真核生物基因表達(dá)調(diào)控的反式作用因子是（）A、GCGC島；B、亮氨酸拉鏈；C、同源異形域蛋白；D、HLH蛋白PSSZINCZINCFINGERFINGER、LEULEUZIPPERZIPPER（亮氨酸拉鏈）（亮氨酸拉鏈）、HTHHTH、BHLHBHLH6、真核細(xì)胞中的MRNA帽子結(jié)構(gòu)是（）A、77甲基鳥嘌呤核苷三磷酸；甲基鳥嘌呤核苷三磷酸；B、7甲基尿嘧啶核苷三磷酸；C、7甲基腺嘌呤核苷三磷酸；D、7甲基胞嘧啶核苷三磷酸7、下列是幾種DNA分子的堿基組成比例，哪一種DNA的TM值最高（）。A、GC35B、GC25C、GC40D、AT80E、AT15AT158、真核生物中，存在于核仁的、真核生物中，存在于核仁的RNARNAPOLPOL是（是（）A、RNAPOLⅢ（核質(zhì)TRNA\5SRRNA\ALU序列和部分SNRNA）；B、RNAPOLⅡ（核質(zhì)HNRNA\SNRNA）；C、RNARNAPOLPOLⅠ核仁RRNA9、在DNA復(fù)制時(shí)，下列所有因子對DNA鏈解旋和解鏈都是必需的，但（）除外A、負(fù)超螺旋傾向解旋B、通過解旋酶解開不穩(wěn)定的堿基對最新精品WORD歡迎下載可修改E、都有5’→3’核酸內(nèi)切酶活性1919、在真核生物中，、在真核生物中，RNARNA聚合酶Ⅲ催化的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是（聚合酶Ⅲ催化的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是（）A、TRNATRNA、5S5S–RRNARRNA和SNRNASNRNAB、HNRNAC、28S–RRNAD、58S–RRNAE、SNRNA20、DNA的復(fù)性速度與以下哪些有關(guān)（）A、溫度B、分子內(nèi)的重復(fù)序列C、PHD、變性DNA的起始濃度E、以上全部、以上全部21、真核生物DNA纏繞在組蛋白上構(gòu)成核小體，核小體含有的蛋白質(zhì)是（）A、H1、H2、H3、H4各兩分子B、H1A、H1B、H2B、H2A各兩分子C、H2A、H2B、H3A、H3B各兩分子D、H2AH2A、H2BH2B、H3H3、H4H4各兩分子各兩分子E、H2A、H2B、H4A、H4B各兩分子22、選出下列所有正確的敘述。A、外顯子以相同順序存在于基因組和CDNA中；B、內(nèi)含子經(jīng)?？梢员环g；C、人體內(nèi)所有的細(xì)胞具有相同的一套基因；、人體內(nèi)所有的細(xì)胞具有相同的一套基因；D、人體內(nèi)所有的細(xì)胞表達(dá)相同的一套基因E、人體內(nèi)所有的細(xì)胞以相同的一種方式剪接每個基因的MRNA23、模板鏈DNA序列5’ACGCATTA3’對應(yīng)的MRNA序列是A、5’ACGCAUUA3’B、5’TAATGCGT3’C、5’UGCGUAAU3’D、5’UAATGCGT3’E、5’UAAUGCGU3UAAUGCGU3’24、轉(zhuǎn)錄的含義是（）A、以DNA為模板合成DNA的過程B、以、以DNADNA為模板合成為模板合成RNARNA的過程的過程C、以RNA為模板合成RNA的過程D、以RNA為模板合成DNA的過程E、以DNA為模板合成蛋白質(zhì)的過程25、克隆基因CDNA序列時(shí)，首先需分離細(xì)胞的（）染色體DNAB、線粒體DNAC、總、總MRNAMRNAD、TRNAE、RRNA二、填空題（共二、填空題（共6題，每空題，每空1分，共分，共2020分）分）1、原核基因調(diào)控機(jī)制根據(jù)操縱子對調(diào)節(jié)蛋白（阻遏蛋白或激活蛋白）的應(yīng)答，可分為正轉(zhuǎn)錄調(diào)控正轉(zhuǎn)錄調(diào)控；負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控；根據(jù)操縱子對某些能調(diào)節(jié)它們的小分子的應(yīng)答，可分為可誘導(dǎo)調(diào)節(jié)可誘導(dǎo)調(diào)節(jié)；可阻遏調(diào)節(jié)可阻遏調(diào)節(jié)兩大類。2、基因克隆是借助于克隆載體，在特定宿主細(xì)胞內(nèi)增殖目的基因或DNA片段，其具體過程分為目的基因的分離目的基因的分離、載體的選擇和構(gòu)建載體的選擇和構(gòu)建、載體與目的片段的鏈載體與目的片段的鏈接、重組子轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞重組子轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞、篩選并無性繁殖轉(zhuǎn)化子篩選并無性繁殖轉(zhuǎn)化子。3、遺傳重組可分為同源重組、位點(diǎn)特異性重組和同源重組、位點(diǎn)特異性重組和轉(zhuǎn)座重組轉(zhuǎn)座重組等類型。4、PCR技術(shù)是體外擴(kuò)增DNA的技術(shù)，每個擴(kuò)展循環(huán)分為變性、退火和延伸三個步驟，因此其擴(kuò)增也需要引物，其引物的性質(zhì)通常是DNA。

簡介：分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的常見問題與解決方案分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的常見問題與解決方案11一、一、SOUTHERNSOUTHERN雜交雜交問題問題1電泳后發(fā)現(xiàn)凝膠中DNA擴(kuò)散，導(dǎo)致結(jié)果難以確定，如何解決這一問題解決方案解決方案（1）在操作上電泳時(shí)隔孔上樣，電泳后要對凝膠及時(shí)處理使凝膠干燥；（2）瓊脂糖的質(zhì)量應(yīng)該較好，尤其是不應(yīng)含有內(nèi)切酶，否則有時(shí)將使低拷貝數(shù)基因的雜交結(jié)果難以解釋。問題問題2傳統(tǒng)方法中轉(zhuǎn)膜不完全的問題如何克服解決方案解決方案經(jīng)典的向上轉(zhuǎn)移法會使凝膠短時(shí)間內(nèi)變薄,此時(shí)即使延長轉(zhuǎn)移時(shí)間至24小時(shí)以上,也不能使大分子DNA良好地轉(zhuǎn)移出去,因此,轉(zhuǎn)膜不完全。向下轉(zhuǎn)膜法由于不需在吸水紙上增加重量,凝膠基本不變形；加之吸水紙的吸力與水受到的重力方向一致,故可以良好地完成DNA的轉(zhuǎn)移,它不需要特殊的儀器,轉(zhuǎn)移速度較快,轉(zhuǎn)移效率高。利用地高辛標(biāo)記探針進(jìn)行SOUTHERN雜交時(shí)，對于大于15KB的DNA片斷，轉(zhuǎn)膜之前用鹽酸進(jìn)行脫嘌呤可以促進(jìn)轉(zhuǎn)膜效率,但脫嘌呤過度可導(dǎo)致分子量相對較小的DNA被打斷成過小的片段而難以和尼龍膜結(jié)合。如果實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)膜過程中同時(shí)含有大于15KB的DNA通常為基因組和小片段DNA通常是基因組酶切產(chǎn)物，那么在轉(zhuǎn)移的過程中傾斜容器，僅使凝膠上半部分浸泡于鹽酸，這樣既可以提高大片斷DNA的轉(zhuǎn)移效率，又不會打碎小片段DNA。另外，等采用瓊指糖凝膠直接雜交的方法，來解決這一難題以轉(zhuǎn)基因鼠的檢測為例，實(shí)驗(yàn)步驟如下1轉(zhuǎn)基因鼠的建立以鼠乳清酸蛋白WAP基因5’調(diào)控區(qū)指導(dǎo)人GCSF基因?yàn)闃?gòu)件，建立轉(zhuǎn)基因小鼠。轉(zhuǎn)基因小鼠的檢測采用剪取鼠尾DNA做SOUTHERN進(jìn)行鑒定。2瓊脂糖凝膠直接雜交L用BANHI150U對由假孕鼠產(chǎn)生的仔鼠剪尾提取基因組DNA10ΜG酶切過液，取少量電泳檢查酶切完全后，上樣電泳8小時(shí)，2將電泳槽板連同凝膠置50℃放置3小時(shí)，用鑷子輕輕揭起凝膠，放于變性液05MNAOH，05MNACL20分鐘，轉(zhuǎn)置中和液05MTRISHCL，015MNACL20分鐘，將膠放于玻璃板上瀝干液體，室溫放置30分鐘。3干膠應(yīng)立即雜交。先將膠在水中泡一下，以利于操作。4將膠放人解決方案解決方案將煮沸的5G/LSDS溶液倒在膜上,待溶液自然冷卻至室溫,可除去膜上已雜交的DNA探針。洗脫后的尼龍膜,可反復(fù)用于其他探針的雜交至少可耐5輪雜交與洗脫。問題問題6SOUTHERN雜交中，探針的背景高，應(yīng)如何解決解決方案解決方案用隨機(jī)引物法標(biāo)記的探針要想得到最低的背景，在向尼龍膜上加PROBDIGEASYHYB混合物前,要用045ΜM醋酸纖維素膜過濾，勿用硝酸纖維素濾膜過濾。對每一個探針和目的片段，總是要根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定最合適的雜交條件，探針濃度很關(guān)鍵，如果太高，將會非特異性結(jié)合到膜上；太低，敏感性會降低。利用地高辛標(biāo)記探針進(jìn)行SOUTHERN雜交時(shí)，以下2種措施可降低背景1適當(dāng)延長梯度洗膜的時(shí)間和提高洗膜溫度；2控制地高辛抗體的濃度。使用足夠量的地高辛抗體可以獲得較好的雜交信號,但過量的地高辛抗體會在膜上產(chǎn)生非特異結(jié)合斑點(diǎn)。問題問題7SOUTHERN雜交沒有檢測出出雜交信號的原因，如何解決解決方案解決方案（1）目的DNA在總DNA中所占的比例，一般需要10ΜGDNA樣品,如果樣品中目的基因含量較高,可以按比例減少DNA用量。如果基因組中目的基因的拷貝數(shù)較低,致使常規(guī)的基因組用量不能滿足SOUTHERN雜交的需要,此時(shí)可加大基因組的用量；（2）探針的濃度和比活性在雜交袋中雜交需要02ML/CM2的雜交液；使用圓筒狀瓶子進(jìn)行雜交可以使用較小的體積，約01ML/CM2。（3）轉(zhuǎn)移到濾膜上的DNA量以及探針與目的DNA間的配對（見問題2，3）二、藍(lán)白斑篩選二、藍(lán)白斑篩選問題問題1做藍(lán)白斑篩選只見白斑，不見藍(lán)斑，該如何做解決方案解決方案（1）做空白對照，將沒有進(jìn)行重組的宿主菌直接接入含有IPTG和XGALLB瓊脂糖平板在37℃下培養(yǎng)17小時(shí)以上以便顯色。顯色后將平板置于4

簡介：第2部分重要問答題總結(jié)1細(xì)胞學(xué)說的內(nèi)容有哪些THECONTENTOFTHECELLTHEORYHAVE①一切動植物都由細(xì)胞發(fā)育而來，即生物是由細(xì)胞和細(xì)胞產(chǎn)物所組成。②所有細(xì)胞在結(jié)構(gòu)和組成上基本相似。③生物體是通過其細(xì)胞的活動反映其功能的。④新細(xì)胞由已存在的細(xì)胞分裂而來；⑤生物的疾病是因?yàn)槠浼?xì)胞機(jī)能失常導(dǎo)致的。2早期主要有哪些試驗(yàn)證實(shí)了DNA是遺傳物質(zhì)1944，AVERY肺炎球菌轉(zhuǎn)化小鼠試驗(yàn)；1952，HERSHEY噬菌體侵染細(xì)菌實(shí)驗(yàn)。4通常所說的分子生物學(xué)的三條基本原則是什么舉例說明之。USUALLYSAYOFMOLECULARBIOLOGYOFTHREEBASICPRINCIPLESISWHATTHEEXAMPLES①構(gòu)成生物體的各類有機(jī)大分子的單體在不同的生物中都是相同的。②生物體內(nèi)一切有機(jī)大分子的建成都遵循共同的規(guī)則。③某一生物體所擁有的核酸及蛋白質(zhì)分子決定了它的屬性。5現(xiàn)代分子生物學(xué)的主要研究領(lǐng)域有哪些列舉不少于三條。MODERNMOLECULARBIOLOGYMAJORRESEARCHFIELDSHAVELISTOFNOTLESSTHANTHREE①DNA重組技術(shù)②基因表達(dá)調(diào)控研究③生物大分子的結(jié)構(gòu)和功能④基因組、功能基因組與生物信息學(xué)研究6簡述DNA的化學(xué)組成。THISCHEMICALCOMPOSITIONOFDNADNA由單體核苷酸首尾相接，以3′,5′磷酸二酯鍵鏈接而成。每個核苷酸由脫氧核苷和磷酸組成，而脫氧核苷由脫氧核糖和堿基ATCG組成。7染色體具有哪些作為遺傳物質(zhì)載體的特征CHROMOSOME,WHICHHAVETHECHARACTERISTICSOFGENETICMATERIALASACARRIERDNA分子結(jié)構(gòu)應(yīng)具有多樣性和相對穩(wěn)定性并能準(zhǔn)確地自我復(fù)制。8列表對比原核細(xì)胞和真核細(xì)胞的異同。造成兩者基因表達(dá)極大差異的主要是哪些方面LISTCONTRASTPROKARYOTESANDEUKARYOTESSIMILARITIESANDDIFFERENCESCAUSETHEGREATDIFFERENCEOFGENEEXPRESSIONISMAINLYWHATASPECTS造成兩者基因表達(dá)極大差異的主要是細(xì)胞基本生活方式的不同。原核生物一般為單細(xì)胞生物，對營養(yǎng)狀況和環(huán)境因素反應(yīng)迅速，以轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)為主。真核生物以多細(xì)胞生物為主，以激素調(diào)節(jié)和發(fā)育調(diào)節(jié)為主要手段，有嚴(yán)格的時(shí)空限制，調(diào)節(jié)范圍寬廣。9分析染色體的化學(xué)組成。THECHEMICALCOMPOSITIONOFCHROMOSOMEANALYSI真核生物的染色體由DNA、組蛋白、非組蛋白和少量RNA組成10簡要回答原核生物DNA的主要特征BRIEFANSWERPROKARYOTESTHEMAINCHARACTERISTICSOFDNA。原核生物中一般只有一條染色體，且大都帶有單拷貝基因，只有很少基因以多拷貝形式存在；整個染色體DNA幾乎全部由功能基因與調(diào)控序列所組成；幾乎每個基因序列都與它編碼的蛋白質(zhì)序列呈線性對應(yīng)狀態(tài)11什麼是核小體簡述其形成過程。WHATISNUCLEARSMALLBODYBRIEFLYINTRODUCESTHEFORMINGPROCESS核小體是染色體的一種基本結(jié)構(gòu)單位，它由DNA和組蛋白HISTONE構(gòu)成。由4種組蛋白H2A、H2B、H3和H4，每一種組蛋白各兩個分子，形成一個組蛋白八聚體，約200BP的DNA分子盤繞在組蛋白八聚體構(gòu)成的核心結(jié)構(gòu)外面，形成了一個核小體。列。17原核生物基因組有何特征列舉并簡要說明。PROKARYOTESGENOMEWHATFEATURESLISTANDBRIEFLY①基因組通常由單一閉環(huán)雙鏈DNA分子組成；②基因組DNA只有一個復(fù)制起點(diǎn)；③基因組所含基因數(shù)量較多，而且形成操縱子結(jié)構(gòu)；④基因組編碼序列一般不重疊；⑤基因是連續(xù)的，無內(nèi)含子；⑥編碼序列約占基因組的50，比例高于真核生物基因組，但低于病毒基因組；⑦非編碼序列主要是一些調(diào)控序列；⑧多拷貝基因很少；⑨基因組中存在稱為轉(zhuǎn)座子的可移動序列；⑩在DNA分子中存在各種特異序列。18如何定義DNA的一二三級結(jié)構(gòu)分別有何特征HOWTODEFINETHEDNAOFTHETWOTERTIARYSTRUCTUREHOWDOESTHISFEATUREDNA一級結(jié)構(gòu)是指4種核苷酸的鏈接和排列順序。有線性和環(huán)狀之分。DNA二級結(jié)構(gòu)是指兩條多核苷酸鏈反向平行盤繞所生成的雙螺旋結(jié)構(gòu)。有左旋和右旋之分。DNA三級結(jié)構(gòu)即超螺旋結(jié)構(gòu)是指DNA雙螺旋進(jìn)一步盤旋形成的特定空間結(jié)構(gòu)。有負(fù)超螺旋和正超螺旋之分。19常見的DNA的構(gòu)象有哪些其中WATSONCRICK所提出的經(jīng)典模型是哪個哪些是左旋哪些是右旋COMMONDNACONFORMATIONHAVETHEWATSONCRICKPROPOSEDCLASSICALMODELISWHICHWHATISLEFTHANDEDWHATISRIGHT常見的DNA構(gòu)象有A、B、C、Z型。其中WATSONCRICK所提出的經(jīng)典模型是B型。其中Z型左旋，其余皆右旋。20什么是ZDNAZDNA在基因表達(dá)調(diào)控中起什么作用WHATISTHEZDNAZDNAINGENEEXPRESSIONREGULATIONWHATROLEZDNA指左手螺旋DNA。在鄰近調(diào)控系統(tǒng)中，與調(diào)節(jié)區(qū)相鄰的轉(zhuǎn)錄區(qū)被ZDNA抑制，只有當(dāng)ZDNA轉(zhuǎn)變?yōu)锽DAN后轉(zhuǎn)錄才能活化，而在遠(yuǎn)距離調(diào)控中，ZDNA可通過改變負(fù)超螺旋水平，決定聚合酶能否與模板鏈結(jié)合而調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄起始的。21試述DNA二級結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)（以B型DNA雙螺旋模型為例說明）DESCRIBETHECHARACTERISTICSOFTHESECONDARYSTRUCTUREOFDNATYPEBDNADOUBLEHELIXMODELFORANEXAMPLE。1兩股反向平行的DNA鏈繞成同軸右手雙螺旋，雙螺旋表面有大溝和小溝。2脫氧核糖和磷酸通過3,5磷酸二酯鍵相連，構(gòu)成DNA主鏈，位于雙螺旋的外表面，糖基平面與螺旋軸平行；堿基則位于雙螺旋的內(nèi)部，堿基平面與螺旋軸垂直。3兩股DNA鏈通過WATSONCRICK堿基對結(jié)合，即A與T通過兩個氫鍵結(jié)合，G與C通過三個氫鍵結(jié)合，稱為堿基互補(bǔ)原則。這樣，一股DNA的堿基序列決定了另一股DNA的堿基序列，兩股DNA鏈互相稱為互補(bǔ)鏈。4雙螺旋直徑為2NM。相鄰堿基的堆砌距離為034NM，旋轉(zhuǎn)夾角為36°。據(jù)此，每一螺旋含10BP，螺距為34NM。不過，在溶液狀態(tài)下，每一螺旋含105BP，螺距為36NM。22拓?fù)洚悩?gòu)酶I、II分別在DNA高級結(jié)構(gòu)的調(diào)整中起到了什麼樣的作用它們分別是如何其作用的TOPOISOMERASEI,IIRESPECTIVELYINDNAADVANCEDSTRUCTURALADJUSTMENT

簡介：1、試述利用基因工程的技術(shù)調(diào)控基因表達(dá)的主要方法試述利用基因工程的技術(shù)調(diào)控基因表達(dá)的主要方法（1）、基因表達(dá)系列分析技術(shù)基因表達(dá)系列分析技術(shù)是一種以測序?yàn)榛A(chǔ)定量分析全基因組表達(dá)模式的技術(shù)，能夠直接讀出任何一種類型細(xì)胞或組織的基因表達(dá)信息。其基本原理是根據(jù)理論上任何長度超過910個堿基的核苷酸片段可代表一種轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的特意序列，因此，選擇特定的限制性內(nèi)切酶分離轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中這些代表基因特異性的910各堿基的核苷酸序列并制成標(biāo)簽連接、克隆測序，根據(jù)其占總標(biāo)簽數(shù)的比例即可分析其對應(yīng)編碼基因的表達(dá)頻率。（2）、RNA選擇性剪切機(jī)制RNA的選擇性剪切是指用不同的剪切方式選擇不同的剪切位點(diǎn)組合從一個MRNA前體產(chǎn)生不同的MRNA剪切異構(gòu)體的過程。一般將選擇性剪切分為如下幾類平衡剪切、5’選擇性剪切、3’選擇性剪切，外顯子遺漏，相互排斥性剪切?？梢訰TPCR的方法研究一個基因是否存在選擇性剪切。其步驟是首先以CRNA兩端特異性引物或來自不同外顯子的引物序列在不同組織來源的RNA樣品中進(jìn)行擴(kuò)增，觀察PCR產(chǎn)物大小是否存在差異。如果發(fā)現(xiàn)差異，測序后可以分析出這種差異是否來自于選擇性剪切。選擇性剪切使一個基因翻譯為多種蛋白質(zhì)序列，是基因表達(dá)多樣性的重要表現(xiàn)形式。（3）、原位雜交技術(shù)原位雜交INSITUHYBRIDIZATION,ISH是用標(biāo)記的核酸探針，經(jīng)放射自顯影或非放射檢測體系，在組織、細(xì)胞、間期核及染色體上對核酸進(jìn)行定位和相對定量研究的一種手段。通?？梢苑譃镽NA原位雜交和染色體原位雜交兩大類1、RNA原位雜交用放射性或非放射性如地高辛、生物素等標(biāo)記的特異性探針與被固定的組織切片反應(yīng)，若細(xì)胞中存在與探針互補(bǔ)的MRNA分子，兩者雜交產(chǎn)生雙鏈RNA，就可以通過檢測放射性標(biāo)記或經(jīng)酶促免疫顯色，對該基因的表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞水平上作出定性定量分析；2、熒光原位雜交FLUORESCENCEINSITUHYBRIDIZATION,FISH技術(shù)首先對于寡核苷酸探針做特殊修飾和標(biāo)記，然后用原位雜交法與靶染色體或DNA上特定的序列結(jié)合，再通過與熒光素分子相偶聯(lián)的單克隆抗體來確定該DNA序列在染色體的位置。FISH技術(shù)不需要放射性同位素，實(shí)驗(yàn)周期短，檢測靈敏度高。（4）定點(diǎn)突變技術(shù)定點(diǎn)突變是重組DNA進(jìn)化的基礎(chǔ)，該方法通過改變基因特定位點(diǎn)核苷酸序列來改變所編碼的氨基酸序列，常用于研究某個氨基酸殘基對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、催化活性以及結(jié)合配體能力的影響，也可用于改造DNA調(diào)控元件特征序列、修飾表達(dá)載體、引入新的酶切位點(diǎn)等。但目前為止選擇氨基酸突變的位點(diǎn)存在一定的盲目性。主要是采用兩種PCR方法來實(shí)現(xiàn)重疊延伸技術(shù)和大引物誘變法在基因序列中進(jìn)行定點(diǎn)突變。（5）RNAI技術(shù)RNA干擾RNAINTERFERENCE,RNAI技術(shù)利用雙鏈小RNA高效、特異性降解細(xì)胞內(nèi)同源MRNA，從而阻斷體內(nèi)靶基因表達(dá)，使細(xì)胞出現(xiàn)靶基因缺失的表型。其過程一般為在DICER的參與下，細(xì)胞中的雙鏈RNA首先被降解形成2125個核苷酸的小片段雙鏈RNASIRNA，然后又SIRNA中的反義鏈指導(dǎo)合成一種被稱為RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體RISC的核蛋白體，再又RISC介導(dǎo)切割目的MRNA分子中與SIRNA反義鏈互補(bǔ)的區(qū)域，從而實(shí)現(xiàn)干擾基因表達(dá)的功能。同時(shí)，SIRNA可作為特殊引物，在依賴于RNA的RNA聚合酶的作用下，以目的MRNA為模板合成DSRNA，后者又可被降解為新的SIRNA，重新進(jìn)入上述循環(huán)。6一些基本分子生物學(xué)手段在啟動子上游構(gòu)建增強(qiáng)子、細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)加入誘導(dǎo)物誘導(dǎo)產(chǎn)物生成等。2、論述原核生物和真核生物基因組的異同、論述原核生物和真核生物基因組的異同1原核生物的基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)原核生物的基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)原核生物的基因表達(dá)調(diào)控特點(diǎn)原核生物的基因表達(dá)調(diào)控特點(diǎn)1轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控?zé)o論原核生物還是真核生物的基因調(diào)控主要是轉(zhuǎn)錄水平的,原核生物不同于真核生物的基因結(jié)構(gòu),存在轉(zhuǎn)錄單元,即操縱子，原核生物的轉(zhuǎn)錄受操縱子控制。11RNA聚合酶與啟動子的影響DNA轉(zhuǎn)錄RNA合成起始時(shí),只有帶有Σ因子的全酶才能專一地與DNA上的啟動子結(jié)合，Σ因子能提高酶辨認(rèn)啟動子的能力，若啟動子與聚合酶結(jié)合緊密,則基因獲得較高水平的轉(zhuǎn)錄,否則,轉(zhuǎn)錄水平較低，另外,還發(fā)現(xiàn)有些基因有增強(qiáng)子，位于轉(zhuǎn)錄起始的上游,是強(qiáng)化轉(zhuǎn)錄起始的序列。12代謝產(chǎn)物的調(diào)控可誘導(dǎo)調(diào)節(jié)在代謝產(chǎn)物或化合物的誘導(dǎo)下,使基因活化,操縱子由關(guān)閉狀態(tài)轉(zhuǎn)為工作狀態(tài)，如大腸桿菌的乳糖操縱子無誘導(dǎo)物存在時(shí)，阻遏物與操作基因結(jié)合使得結(jié)構(gòu)基因不能正常轉(zhuǎn)錄；誘導(dǎo)物（乳糖或IPTG）存在，與阻遏物結(jié)合時(shí)，阻遏物從操縱基因上脫離下來，RNA聚合酶便可通過啟動子和操作基因正常轉(zhuǎn)錄出一條多順反子MRNA從而翻譯得到三種酶?？勺瓒粽{(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄平時(shí)是開啟的,但由于某些特殊代謝產(chǎn)物或化合物的積累將其關(guān)閉,阻遏基因的轉(zhuǎn)錄,不能合成蛋白質(zhì)或酶。如大腸桿菌的色氨酸操縱子TRP操縱子轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控是通過阻遏蛋白實(shí)現(xiàn)的。產(chǎn)生阻遏蛋白的基因是TRPR，它結(jié)合于TRP操縱基因特異序列,阻止轉(zhuǎn)錄起始。當(dāng)TRP水平低時(shí),阻遏蛋白以一種非活性形式存在,不能結(jié)合DNA。這時(shí)TRP生物合成途徑被激活；TRP操縱子轉(zhuǎn)錄終止的調(diào)控是通過弱化作用實(shí)現(xiàn)的。在大腸桿菌TRPOPERON,前導(dǎo)區(qū)的堿基序列包括4個分別以1、2、3和4表示的片段,能以兩種不同的方式進(jìn)行堿基配對,12和34配對,或23配對,34配對區(qū)正好位于終止密碼子的識別區(qū)。前導(dǎo)序列有相鄰的兩個色氨酸密碼子,當(dāng)培養(yǎng)基中TRP濃度很低時(shí),負(fù)載有TRP的TR2NATRP也就少,這樣翻譯通過兩個相鄰色氨酸密碼子的速度就會很慢,當(dāng)4區(qū)被轉(zhuǎn)錄完成時(shí),核糖體滯留1區(qū),這時(shí)的前導(dǎo)區(qū)結(jié)構(gòu)是23配對,不形成34配對的終止結(jié)構(gòu),所以轉(zhuǎn)錄可繼續(xù)進(jìn)行。反之,核糖體可順利通過兩個相鄰的色氨酸密碼子,在4區(qū)被轉(zhuǎn)錄之前,核糖體就到達(dá)2區(qū),這樣使23不能配對,34區(qū)可以配對形成終止子結(jié)構(gòu),轉(zhuǎn)錄停止。13降解物對基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)細(xì)菌在有葡萄糖存在的培養(yǎng)基情況下,即使加入乳糖、半乳糖等誘導(dǎo)物,與其相應(yīng)的操縱子也不會啟動，這是由于葡萄糖抑制了細(xì)菌的腺苷酸環(huán)化酶,減少環(huán)腺苷酸CAMP的合成。當(dāng)培養(yǎng)基中的葡萄糖減少時(shí),則環(huán)腺苷酸的活力提高,CAMP的合成增加,CAMP與CRP形成復(fù)合物并與操縱子結(jié)合,促進(jìn)乳糖的表達(dá)。降解物的抑制作用是通過促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄來正常調(diào)節(jié)基因表達(dá)的。14細(xì)菌的應(yīng)急反應(yīng)對基因表達(dá)的調(diào)控細(xì)菌在生存條件危急時(shí),如氨基酸全面匱乏,細(xì)菌會產(chǎn)生一個應(yīng)急反應(yīng)包括生產(chǎn)各種RNA、糖、脂肪、蛋白質(zhì)在內(nèi)的幾乎全部生物化學(xué)反應(yīng)過程均被停止，因?yàn)榇藭r(shí)細(xì)菌細(xì)胞中存在大量不載氨基酸的TRNA,空載的TRNA激活焦磷酸轉(zhuǎn)移酶,使鳥苷四磷酸PPGPP大量合成,PPGPP的出現(xiàn)會關(guān)閉許多基因除PPGPP外,實(shí)施應(yīng)急反應(yīng)的額信號還有鳥苷五磷酸PPPGPP它們的作用十分廣泛,影響一大批操縱子,是基因轉(zhuǎn)錄的超級調(diào)控因子。15亮氨酸的影響亮氨酸通過亮氨酸反應(yīng)蛋白LRP對基因表達(dá)的激活或阻遏起調(diào)節(jié)作用，某些亮氨酸影響基因表達(dá)的操縱子，外加丙氨酸也有類似效果。

簡介：1生物化學(xué)與分子生物學(xué)重點(diǎn)生物化學(xué)與分子生物學(xué)重點(diǎn)第二章第二章蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能一、氨基酸一、氨基酸1．結(jié)構(gòu)特點(diǎn)氨基酸AMINOACID是蛋白質(zhì)分子的基本組成單位。構(gòu)成天然蛋白質(zhì)分子的氨基酸約有20種，除脯氨酸為Α亞氨基酸、甘氨酸不含手性碳原子外，其余氨基酸均為LΑ氨基酸。2．分類根據(jù)氨基酸的R基團(tuán)的極性大小可將氨基酸分為四類①非極性中性氨基酸8種；②極性中性氨基酸7種；③酸性氨基酸GLU和ASP；④堿性氨基酸LYS、ARG和HIS。二、二、肽鍵與肽鏈肽鍵與肽鏈肽鍵PEPTIDEBOND是指由一分子氨基酸的Α羧基與另一分子氨基酸的Α氨基經(jīng)脫水而形成的共價(jià)鍵CONH。氨基酸分子在參與形成肽鍵之后，由于脫水而結(jié)構(gòu)不完整，稱為氨基酸殘基。每條多肽鏈都有兩端即自由氨基端N端與自由羧基端C端，肽鏈的方向是N端→C端。三、肽鍵平面三、肽鍵平面肽單位肽單位肽鍵具有部分雙鍵的性質(zhì)，不能自由旋轉(zhuǎn)；組成肽鍵的四個原子及其相鄰的兩個Α碳原子處在同一個平面上，為剛性平面結(jié)構(gòu)，稱為肽鍵平面。四、蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)四、蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)可人為分為一級、二級、三級和四級結(jié)構(gòu)等層次。一級結(jié)構(gòu)為線狀結(jié)構(gòu)，二、三、四級結(jié)構(gòu)為空間結(jié)構(gòu)。1．一級結(jié)構(gòu)指多肽鏈中氨基酸的排列順序，其維系鍵是肽鍵。蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)決定其空間結(jié)構(gòu)。2．二級結(jié)構(gòu)指多肽鏈主鏈骨架盤繞折疊而形成的構(gòu)象，借氫鍵維系。主要有以下幾種類型⑴Α螺旋其結(jié)構(gòu)特征為①主鏈骨架圍繞中心軸盤繞形成右手螺旋；②螺旋每上升一圈是36個氨基酸殘基，螺距為054NM；③相鄰螺旋圈之間形成許多氫鍵；④側(cè)鏈基團(tuán)位于螺旋的外側(cè)。影響Α螺旋形成的因素主要是①存在側(cè)鏈基團(tuán)較大的氨基酸殘基；②連續(xù)存在帶相同電荷的氨基酸殘基；③存在脯氨酸殘基。⑵Β折疊其結(jié)構(gòu)特征為①若干條肽鏈或肽段平行或反平行排列成片；②所有肽鍵的CO和NH形成鏈間氫鍵；③側(cè)鏈基團(tuán)分別交替位于片層的上、下方。⑶Β轉(zhuǎn)角多肽鏈180°回折部分，通常由四個氨基酸殘基構(gòu)成，借1、4殘基之間形成氫鍵維系。⑷無規(guī)卷曲主鏈骨架無規(guī)律盤繞的部分。3．三級結(jié)構(gòu)指多肽鏈所有原子的空間排布。其維系鍵主要是非共價(jià)鍵（次級鍵）氫鍵、疏水鍵、范德華力、離子鍵等，也可涉及二硫鍵。4．四級結(jié)構(gòu)指亞基之間的立體排布、接觸部位的布局等，其維系鍵為非共價(jià)鍵。亞基是指參與構(gòu)成蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)的而又具有獨(dú)立三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈。五、五、蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)1．兩性解離與等電點(diǎn)蛋白質(zhì)分子中仍然存在游離的氨基和游離的羧基，因此蛋白質(zhì)與氨基酸一樣具有兩性解離的性質(zhì)。蛋白質(zhì)分子所帶正、負(fù)電荷相等時(shí)溶液的PH值稱為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。2．蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)蛋白質(zhì)具有親水溶膠的性質(zhì)。蛋白質(zhì)分子表面的水化膜和表面電荷是穩(wěn)定蛋白質(zhì)親水溶膠的兩個重要因素。3核苷酸是由核苷與磷酸經(jīng)脫水縮合后生成的磷酸酯類化合物，包括核糖核苷酸和脫氧核糖核酸兩大類。最常見的核苷酸為5’核苷酸（5’常被省略）。5’核苷酸又可按其在5’位縮合的磷酸基的多少，分為一磷酸核苷（核苷酸）、二磷酸核苷和三磷酸核苷。此外，生物體內(nèi)還存在一些特殊的環(huán)核苷酸，常見的為環(huán)一磷酸腺苷（CAMP）和環(huán)一磷酸鳥苷（CGMP），它們通常是作為激素作用的第二信使。核苷酸通常使用縮寫符號進(jìn)行命名。第一位符號用小寫字母D代表脫氧，第二位用大寫字母代表堿基，第三位用大寫字母代表磷酸基的數(shù)目，第四位用大寫字母P代表磷酸。三、核酸的一級結(jié)構(gòu)三、核酸的一級結(jié)構(gòu)核苷酸通過3’,5’磷酸二酯鍵連接起來形成的不含側(cè)鏈的多核苷酸長鏈化合物就稱為核酸。核酸具有方向性，5’位上具有自由磷酸基的末端稱為5’端，3’位上具有自由羥基的末端稱為3’端。DNA由DAMP、DGMP、DCMP和DTMP四種脫氧核糖核苷酸所組成。DNA的一級結(jié)構(gòu)就是指DNA分子中脫氧核糖核苷酸的種類、數(shù)目、排列順序及連接方式。RNA由AMP，GMP，CMP，UMP四種核糖核苷酸組成。RNA的一級結(jié)構(gòu)就是指RNA分子中核糖核苷酸的種類、數(shù)目、排列順序及連接方式。四、四、DNADNA的二級結(jié)構(gòu)的二級結(jié)構(gòu)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)是DNA二級結(jié)構(gòu)的一種重要形式，它是WATSON和CRICK兩位科學(xué)家于1953年提出來的一種結(jié)構(gòu)模型，其主要實(shí)驗(yàn)依據(jù)是CHARGAFF研究小組對DNA的化學(xué)組成進(jìn)行的分析研究，即DNA分子中四種堿基的摩爾百分比為AT、GC、AGTC（CHARGAFF原則），以及由WILKINS研究小組完成的DNA晶體X線衍射圖譜分析。天然DNA的二級結(jié)構(gòu)以B型為主，其結(jié)構(gòu)特征為①為右手雙螺旋，兩條鏈以反平行方式排列；②主鏈位于螺旋外側(cè)，堿基位于內(nèi)側(cè)；③兩條鏈間存在堿基互補(bǔ)，通過氫鍵連系，且AT、GC（堿基互補(bǔ)原則）；④螺旋的穩(wěn)定因素為氫鍵和堿基堆砌力；⑤螺旋的螺距為34NM，直徑為2NM。五、五、DNADNA的超螺旋結(jié)構(gòu)的超螺旋結(jié)構(gòu)雙螺旋的DNA分子進(jìn)一步盤旋形成的超螺旋結(jié)構(gòu)稱為DNA的三級結(jié)構(gòu)。絕大多數(shù)原核生物的DNA都是共價(jià)封閉的環(huán)狀雙螺旋，其三級結(jié)構(gòu)呈麻花狀。在真核生物中，雙螺旋的DNA分子圍繞一蛋白質(zhì)八聚體進(jìn)行盤繞，從而形成特殊的串珠狀結(jié)構(gòu)，稱為核小體。核小體結(jié)構(gòu)屬于DNA的三級結(jié)構(gòu)。六、六、DNADNA的功能的功能DNA的基本功能是作為遺傳信息的載體，為生物遺傳信息復(fù)制以及基因信息的轉(zhuǎn)錄提供模板。DNA分子中具有特定生物學(xué)功能的片段稱為基因（GENE）。一個生物體的全部DNA序列稱為基因組（GENOME）?；蚪M的大小與生物的復(fù)雜性有關(guān)。七、七、RNARNA的空間結(jié)構(gòu)與功能的空間結(jié)構(gòu)與功能RNA分子的種類較多，分子大小變化較大，功能多樣化。RNA通常以單鏈存在，但也可形成局部的雙螺旋結(jié)構(gòu)。1．MRNA的結(jié)構(gòu)與功能MRNA是單鏈核酸，其在真核生物中的初級產(chǎn)物稱為HNRNA。大多數(shù)真核成熟的MRNA分子具有典型的5’端的7甲基鳥苷三磷酸（M7GTP）帽子結(jié)構(gòu)和3’端的多聚腺苷酸POLYA尾巴結(jié)構(gòu)。MRNA的功能是為蛋白質(zhì)的合成提供模板，分子中帶有遺傳密碼。MRNA分子中每三個相鄰的核苷酸組成一組，在蛋白質(zhì)翻譯合成時(shí)代表一個特定的氨基酸，這種核苷酸三聯(lián)體稱為遺傳密碼（CODEN）。2．TRNA的結(jié)構(gòu)與功能TRNA是分子最小，但含有稀有堿基最多的RNA。TRNA的二級結(jié)構(gòu)由于局部雙螺旋的形成而表現(xiàn)為“三葉草”形，故稱為“三葉草”結(jié)構(gòu)，可分為五個部分①氨基酸臂由TRNA的5’端和3’端構(gòu)成的局部雙螺旋，3’端都帶有CCAOH順序，可與氨基酸結(jié)合而攜帶氨

簡介：第二章1．想想核酸的A260為什么會下降肯定是形成雙螺旋結(jié)構(gòu)引起的。那為什么相同序列的核酸，RNA的A260下降，DNA的A260不變這說明RNA能形成雙鏈，DNA不能。那么，為什么RNA能形成雙鏈呢原因肯定就在RNA和DNA序列上不同的堿基U和T上面。U和T的含義完全一樣，差別在于RNA分子上的U可以和G配對，而DNA分子上的T不能和G配對。如果這時(shí)候能想到這一點(diǎn)，題目的答案也就有了。本題正確的答案是1個核酸的A260主要是4個堿基的Π電子。當(dāng)一個核酸是單鏈的時(shí)候，Π電子能吸收較大的光；但核酸為雙鏈的時(shí)候，堿基對的堆積效應(yīng)使Π電子吸收較少的光。于是，題目中的數(shù)據(jù)告訴我們，第一種序列的DNA和RNA在二級結(jié)構(gòu)上沒有什么大的差別。而對于第二種序列的RNA光吸收大幅度減少，意味著RNA形成了某種雙鏈二級結(jié)構(gòu)，RNA二級結(jié)構(gòu)的一個常見的特征是G和U能夠配對。從第二種序列不難看出，它能夠自我配對，形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，而降低光吸收。2．RNA的小溝淺而寬，允許接近堿基邊緣。2′－OH位于小溝，提供氫鍵供體和受體，起穩(wěn)定作用。GU搖擺堿基對讓G的氨基N2位于小溝，能夠與蛋白質(zhì)相互作用（如在TRNAALA和同源的氨酰－TRNA合成酶之間）。3．（1）核酶由RNA組成，所以一定是RNA雙螺旋，為A型。（2）序列交替出現(xiàn)嘌呤和嘧啶，應(yīng)該是Z型雙螺旋。（3）既然是DNA，在上述濕度條件下，要么是B型，要么是Z型。由于B型比Z型更緊密（螺距比Z型短，每個螺旋單位長度具有更多的電荷，相同數(shù)目堿基對的總長度要短）。因此，1號一定是B型，2號為Z型DNA。4．（1）（2）ARG（3）ASN和GLN5．使用DUTP代替DTTP并不能改變DNA雙螺旋的結(jié)構(gòu)。T和U的差別只是在T嘧啶環(huán)上是否有一個甲基，這個甲基位于雙螺旋的大溝之中。如果用2′－OH取代2′－H，則合成出來的是RNA，于是螺旋變成A－型。多出來的羥基產(chǎn)生空間位阻，致使RNA無法形成B－型雙螺旋。6．AT堿基對只有2個氫鍵，容易斷裂，從而容易與溶液中的重氫發(fā)生交換。第三章1．K值是指某一物質(zhì)染色體的數(shù)目，N值是指某一物質(zhì)基因的數(shù)目。3．（1）RNA既可以充當(dāng)遺傳物質(zhì)，又可以作為核酶；（2）先有核苷酸，后有脫氧核苷酸；（3）先有尿苷酸后有胸苷酸。5．這種突變將使游離的Σ因子和RNA聚合酶全酶競爭性結(jié)合啟動子，從而競爭性抑制RNA聚合酶全酶與啟動子的結(jié)合，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄的起始受到抑制。最后的結(jié)果有可能是致命的。第八章1．（1）Γ；（2）Β或Γ；（3）Α。2．略3．略4．節(jié)省時(shí)間，有利于在較短的時(shí)間內(nèi)大量表達(dá)，以保持與DNA復(fù)制的同步。5．（1）轉(zhuǎn)錄照樣起始，但RNA因不能形成帽子，穩(wěn)定性下降，還在轉(zhuǎn)錄的時(shí)候就有可能發(fā)生降解。（2）轉(zhuǎn)錄可以完成，但轉(zhuǎn)錄物不能形成POLYA尾部，這樣的MRNA不能運(yùn)輸出細(xì)胞核，而且穩(wěn)定性下降，容易被降解。（3）轉(zhuǎn)錄可以完成，但RNA前體不能剪接，也不能被運(yùn)輸出細(xì)胞核。（4）所有的S/T都突變成ALA意味著CTD完全不能進(jìn)行磷酸化，結(jié)果必然是無轉(zhuǎn)錄的延伸和轉(zhuǎn)錄的后加工。第九章1．略2．略3．TYR比PHE多出的基團(tuán)是1個羥基，故可以通過作為氫鍵供體或受體形成氫鍵而得到很大結(jié)合能。而ILE－TRNA合成酶僅僅是疏水的，在形狀上與ILE很像，在底物和蛋白質(zhì)之間無特異性的化學(xué)鍵。范德華力既弱，又沒有方向性，而氫鍵既有方向性，又較強(qiáng)。所以，TYR－TRNA合成酶很容易識別PHE和TYR之間的差別，也就不需要額外的校對位點(diǎn)了。4．略5．略6．略7．略第十章1．在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)剪接照樣能夠發(fā)生。2．略3．略4．因?yàn)樵诩?xì)胞分裂的時(shí)候，細(xì)胞核發(fā)生解體，在重新形成細(xì)胞核的時(shí)候，需要信號序列的幫助，方可讓蛋白質(zhì)回到細(xì)胞核內(nèi)。5．有利于將翻譯和定向分揀偶聯(lián)在一起；方便后來的切除。6．過氧化物酶體內(nèi)是一種氧化的環(huán)境，蛋白質(zhì)在進(jìn)入它之前事先折疊后有利于其正確的折疊和結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。第十一章1．乳糖操縱子的正調(diào)控機(jī)制將變得多余，從而導(dǎo)致葡萄糖效應(yīng)減弱甚至喪失。2．溶原階段的轉(zhuǎn)錄物3′－端僅含有INT的閱讀框架，不會形成被RNA酶識別的降解信號。3．（1），（4），（5）4．略第十二章1．略2．（1）通過異源二聚化可以增加細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子組合的數(shù)目。（2）通過二聚體化的調(diào)節(jié)可以增加調(diào)節(jié)它們與DNA結(jié)合的機(jī)會。

簡介：1廣石化分子生物學(xué)試題及答案一、名詞解釋1．CDNACDNA與CCCDNACCCDNACDNA是由MRNA通過反轉(zhuǎn)錄酶合成的雙鏈DNA；CCCDNA是游離于染色體之外的質(zhì)粒雙鏈閉合環(huán)形DNA。2．標(biāo)準(zhǔn)折疊單位標(biāo)準(zhǔn)折疊單位蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)單元?。菪cΒ－折疊通過各種連接多肽可以組成特殊幾何排列的結(jié)構(gòu)塊，此種確定的折疊類型通常稱為超二級結(jié)構(gòu)。幾乎所有的三級結(jié)構(gòu)都可以用這些折疊類型，乃至他們的組合型來予以描述，因此又將其稱為標(biāo)準(zhǔn)折疊單位。3．CAPCAP環(huán)腺苷酸（CAMP）受體蛋白CRP（CAMPRECEPTORPROTEIN），CAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP（CAMPACTIVATEDPROTEIN）4．回文序列回文序列DNA片段上的一段所具有的反向互補(bǔ)序列，常是限制性酶切位點(diǎn)。5．MICRNAMICRNA互補(bǔ)干擾RNA或稱反義RNA，與MRNA序列互補(bǔ)，可抑制MRNA的翻譯。6．核酶核酶具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工過程中起到自我催化的作用。7．模體模體蛋白質(zhì)分子空間結(jié)構(gòu)中存在著某些立體形狀和拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)頗為類似的局部區(qū)域8．信號肽信號肽在蛋白質(zhì)合成過程中N端有1536個氨基酸殘基的肽段，引導(dǎo)蛋白質(zhì)的跨膜。9．弱化子弱化子在操縱區(qū)與結(jié)構(gòu)基因之間的一段可以終止轉(zhuǎn)錄作用的核苷酸序列。10．魔斑魔斑當(dāng)細(xì)菌生長過程中，遇到氨基酸全面缺乏時(shí)，細(xì)菌將會產(chǎn)生一個應(yīng)急反應(yīng)，停止全部基因的表達(dá)。產(chǎn)生這一應(yīng)急反應(yīng)的信號是鳥苷四磷酸PPGPP和鳥苷五磷酸（PPPGPP）。PPGPP與PPPGPP的作用不只是一個或幾個操縱子，而是影響一大批，所以稱他們是超級調(diào)控子或稱為魔斑。11．上游啟動子元件上游啟動子元件是指對啟動子的活性起到一種調(diào)節(jié)作用的DNA序列，10區(qū)的TATA、35區(qū)的TGACA及增強(qiáng)子，弱化子等。12．DNADNA探針探針是帶有標(biāo)記的一段已知序列DNA，用以檢測未知序列、篩選目的基因等方面廣泛應(yīng)用。13．SDSD序列序列是核糖體與MRNA結(jié)合序列，對翻譯起到調(diào)控作用。14．單克隆抗體單克隆抗體只針對單一抗原決定簇起作用的抗體。15．考斯質(zhì)粒考斯質(zhì)粒是經(jīng)過人工構(gòu)建的一種外源DNA載體，保留噬菌體兩端的COS區(qū)，與質(zhì)粒連接構(gòu)成。16．藍(lán)白斑篩選白斑篩選含LACZ基因（編碼Β半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物XGAL5溴4氯3吲哚ΒD半乳糖苷產(chǎn)生藍(lán)色，從而使菌株變藍(lán)。當(dāng)外源DNA插入后，LACZ基因不能表達(dá)，菌株呈白色，以此來篩選重組細(xì)菌。稱之為藍(lán)白斑篩選。17．順式作用元件順式作用元件在DNA中一段特殊的堿基序列，對基因的表達(dá)起到調(diào)控作用的基因元件。18．KLENOWKLENOW酶DNA聚合酶I大片段，只是從DNA聚合酶I全酶中去除了5’→3’外切酶活性19．錨定錨定PCRPCR用于擴(kuò)增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚DG的尾巴，然后分別用多聚DC和已知的序列作為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。20．融合蛋白融合蛋白真核蛋白的基因與外源基因連接，同時(shí)表達(dá)翻譯出的原基因蛋白與外源蛋白結(jié)合在一起所組成的蛋白質(zhì)。二、填空1．DNA的物理圖譜是DNA分子的（限制性內(nèi)切酶酶解限制性內(nèi)切酶酶解）片段的排列順序。2．RNA酶的剪切分為（自體催化自體催化）、（異體催化異體催化）兩種類型。3．原核生物中有三種起始因子分別是（IF1IF1）、（IF2IF2）和（IF3IF3）。4．蛋白質(zhì)的跨膜需要（信號肽信號肽）的引導(dǎo)，蛋白伴侶的作用是（輔助肽鏈折疊成天然構(gòu)象3分別是（TFIID）、（SP1SP1）和（CTF/NF1CTF/NF1）。21．RNA聚合酶Ⅱ的基本轉(zhuǎn)錄因子有、TFⅡA、TFⅡB、TFIID、TFⅡE他們的結(jié)合順序是（D、A、B、E）。其中TFIID的功能是（與TATATATA盒結(jié)合盒結(jié)合）。22．與DNA結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子大多以二聚體形式起作用，轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合的功能域常見有以下幾種（螺旋螺旋轉(zhuǎn)角轉(zhuǎn)角螺旋螺旋）、（鋅指模體鋅指模體）、（堿性堿性亮氨酸拉鏈模體亮氨酸拉鏈模體）。23．限制性內(nèi)切酶的切割方式有三種類型分別是（在對稱軸在對稱軸55側(cè)切割產(chǎn)生側(cè)切割產(chǎn)生55粘端粘端）、（在對稱軸對稱軸33側(cè)切割產(chǎn)生側(cè)切割產(chǎn)生33粘端粘端）（在對稱軸處切割產(chǎn)生平段在對稱軸處切割產(chǎn)生平段）。24．質(zhì)粒DNA具有三種不同的構(gòu)型分別是（SCSC構(gòu)型構(gòu)型）、（OCOC構(gòu)型構(gòu)型）、（L構(gòu)型構(gòu)型）。在電泳中最前面的是（SCSC構(gòu)型構(gòu)型）。25．外源基因表達(dá)系統(tǒng)，主要有（大腸桿菌大腸桿菌）、（酵母酵母）、（昆蟲昆蟲）和（哺乳類細(xì)胞表哺乳類細(xì)胞表）。26．轉(zhuǎn)基因動物常用的方法有（逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法）、（DNADNA顯微注射法顯微注射法）、（胚胎干細(xì)胞胚胎干細(xì)胞法）。三、簡答1．分別說出分別說出5種以上種以上RNARNA的功能的功能轉(zhuǎn)運(yùn)RNATRNA轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸；核蛋白體RNARRNA核蛋白體組成成；信使RNAMRNA蛋白質(zhì)合成模板；不均一核RNAHNRNA成熟MRNA的前體；小核RNASNRNA參與HNRNA的剪接；小胞漿RNASCRNA/7SLRNA蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成的信號識別體的組成成分；反義RNAANRNA/MICRNA對基因的表達(dá)起調(diào)節(jié)作用；核酶RIBOZYMERNA有酶活性的RNA2．原核生物與真核生物啟動子的主要差別．原核生物與真核生物啟動子的主要差別原核生物TTGACATATAAT起始位點(diǎn)3510真核生物增強(qiáng)子GCCAATTATAA5MGPP起始位點(diǎn)11070253．對天然質(zhì)粒的人工構(gòu)建主要表現(xiàn)在哪些方面．對天然質(zhì)粒的人工構(gòu)建主要表現(xiàn)在哪些方面天然質(zhì)粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對之進(jìn)行改造構(gòu)建A、加入合適的選擇標(biāo)記基因，如兩個以上，易于用作選擇,通常是抗生素基因。B、增加或減少合適的酶切位點(diǎn)，便于重組。C、縮短長度，切去不必要的片段，提高導(dǎo)入效率，增加裝載量。D、改變復(fù)制子，變嚴(yán)緊為松弛，變少拷貝為多拷貝。E、根據(jù)基因工程的特殊要求加裝特殊的基因元件4．舉例說明差示篩選組織特異．舉例說明差示篩選組織特異CDNACDNA的方法的方法制備兩種細(xì)胞群體，目的基因在其中一種細(xì)胞中表達(dá)或高表達(dá)，在另一種細(xì)胞中不表達(dá)或低表達(dá)，然后通過雜交對比找到目的基因。例如在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中，腫瘤細(xì)胞會呈現(xiàn)與正常細(xì)胞表達(dá)水平不同的MRNA，因此，可以通過差示雜交篩選出與腫瘤相關(guān)的基因。也可利用誘導(dǎo)的方法，篩選出誘導(dǎo)表達(dá)的基因。5．雜交瘤細(xì)胞系的產(chǎn)生與篩選．雜交瘤細(xì)胞系的產(chǎn)生與篩選脾B細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞，加聚乙二醇（PEG）促進(jìn)細(xì)胞融合，HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)（內(nèi)含次黃嘌呤、氨基蝶呤、T）生長出來的脾B骨髓瘤融合細(xì)胞繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)。細(xì)胞融合物中包含脾脾融合細(xì)胞不能生長，脾細(xì)胞不能體外培養(yǎng)。

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簡介：一、名詞解釋1SNP單核苷酸多態(tài)性SINGLENUCLEOTIDEPOLYMORPHISM，SNP,主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。它是人類可遺傳的變異中最常見的一種。占所有已知多態(tài)性的90以上。SNP在人類基因組中廣泛存在，平均每500～1000個堿基對中就有1個，估計(jì)其總數(shù)可達(dá)300萬個甚至更多。；2MRNA的選擇性剪切；的選擇性剪切；前體MRNA的剪接是基因表達(dá)調(diào)控中的重要環(huán)節(jié)，也是生物功能多樣性的分子機(jī)制之一目前已知它包括兩種互相關(guān)聯(lián)的機(jī)制組成性剪接和選擇性剪接或稱調(diào)節(jié)性剪接。在組成性剪接中，剪接位點(diǎn)不因細(xì)胞種類發(fā)育階段或環(huán)境而改變，因而最終形成的基因表達(dá)產(chǎn)物也是不變的。而選擇性剪接則不同，作為基因多樣性的分子機(jī)理，它選擇性地對內(nèi)含子或外顯子進(jìn)行剪接，從而將同一種前體MRNA剪接成多種不同的成熟MRNA，進(jìn)而表達(dá)多個可能具有不同生理學(xué)功能的蛋白質(zhì)，最終影響生理功能的調(diào)節(jié)3抑癌基因；抑癌基因；編碼對腫瘤形成起阻抑作用的蛋白質(zhì)的基因。正常情況下負(fù)責(zé)控制細(xì)胞生長和增殖。當(dāng)這些基因不能表達(dá)，或者當(dāng)其產(chǎn)物失去活性時(shí)，可導(dǎo)致細(xì)胞癌變。如P53基因和成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤基因RB基因。4基因芯片；基因芯片；固定有寡核苷酸、基因組DNA或互補(bǔ)DNA等的生物芯片。利用這類芯片與標(biāo)記的生物樣品進(jìn)行雜交，可對樣品的基因表達(dá)譜生物信息進(jìn)行快速定性和定量分析。二、簡答題1限制性內(nèi)切酶及影響因素；限制性內(nèi)切酶及影響因素；生物體內(nèi)能識別并切割特異的雙鏈DNA序列的一種內(nèi)切核酸酶。它可以將外來的DNA切斷，即能夠限制異源DNA的侵入并使之失去活力，但對自己的DNA卻無損害作用，這樣可以保護(hù)細(xì)胞原有的遺傳信息。由于這種切割作用是在DNA分子內(nèi)部進(jìn)行的，故名限制性內(nèi)切酶簡稱限制酶。2熒光定量熒光定量PCR及影響因素；及影響因素；熒光定量PCR是一種新定量試驗(yàn)技術(shù)，它是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測樣品模板的初始濃度。引物的設(shè)計(jì)和選擇符合熒光PCR的探針并進(jìn)行設(shè)計(jì)對于實(shí)時(shí)熒光PCR尤其重要。1靶基因的確定選擇檢測組共有的基因以避免檢測的假陰性漏檢。2檢測片段的確定選擇檢測組內(nèi)的保守突變少（避免假陰性）、組間特異的序列突變多（避免假陽性）作為引物探針的設(shè)計(jì)位置。片段長度70150BP。3引物長度1725BPGC含量3080退火溫度TM值5860℃；避免穩(wěn)定的引物二聚體（特別是多聯(lián)檢測）及發(fā)夾結(jié)構(gòu)自由能大于35KC/M；序列不能出現(xiàn)連續(xù)的G，3’端避免G或C，最后5個堿基內(nèi)避免兩個以上的G或C。4探針長度2030BP（TAQMAN或1625BPMGB；GC含量3080；TM值為6870℃；避免穩(wěn)定的二聚體及發(fā)夾結(jié)構(gòu)自由能大于35KC/M；5’端不能是G；位置盡量靠近上游引物；選擇波長差異較大（多聯(lián)檢測）或FAM單聯(lián)檢測）的熒光標(biāo)記。5其他引物退火溫度,引物濃度引物、探針的純度和穩(wěn)定性熱啟動鎂離子濃度模板質(zhì)量模板濃度防止殘余CARRYOVER污染3癌基因活化的分子機(jī)制；癌基因活化的分子機(jī)制；（一）獲得啟動子與增強(qiáng)子。當(dāng)逆轉(zhuǎn)錄病毒的長末端重復(fù)序列含強(qiáng)啟動子和增強(qiáng)子插入原癌基因附近或內(nèi)部時(shí)，啟動下游基因的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致癌變。（二）基因易位染色體易位重排，導(dǎo)致原來無活性的原癌基因移至強(qiáng)啟動子或增強(qiáng)子附近而活化。（三）原癌基因擴(kuò)抑制序列可在抑制病毒復(fù)制的同時(shí)避免對正常組織的毒副作用。同時(shí)將抑制序列選擇在特定的位點(diǎn)，可對部分有明確基因突變的惡性腫瘤細(xì)胞如含有BCL/ABL或AML1/MTG8融合基因的白血病細(xì)胞產(chǎn)生凋亡誘導(dǎo)作用。此外尚可通過使用腫瘤特異性啟動子如HTERT啟動子、SURVIVIN啟動子或組織特異性啟動子如酪氨酸酶啟動子、骨鈣素啟動子引導(dǎo)針對某些癌基因或抗凋亡分子的SIRNA或SHRNA表達(dá)，從而達(dá)到特異性殺傷腫瘤細(xì)胞的目的。RNAI在整形外科領(lǐng)域的應(yīng)用前景已證實(shí)NRAS或BRAF的激活型突變是引發(fā)黑素瘤的主要病因，其中66的病例為BRAF激酶作用域突變。而約80的BRAF突變病例是因胸腺嘧啶突變?yōu)橄汆堰试斐傻?99位的纈氨酸突變?yōu)楣劝彼崴隆Ｊ褂肦NAI技術(shù)剔除黑素瘤細(xì)胞的BRAF表達(dá)，不僅抑制了腫瘤細(xì)胞生長，而且減弱了其侵襲能力，為黑素瘤基因治療奠定了基礎(chǔ)。最近研究表明趨化因子受體CXCR4是乳腺癌轉(zhuǎn)移的重要調(diào)節(jié)因素，其配體CXCL12可趨化腫瘤細(xì)胞并調(diào)節(jié)其增生和侵襲特性。使用RNAI干擾技術(shù)剔除CXCR4證實(shí)該分子為原位移植腫瘤生長和轉(zhuǎn)移所必需。此外，剔除BCRP表達(dá)可以逆轉(zhuǎn)其介導(dǎo)的腫瘤耐藥。瘢痕疙瘩是一種較為難治的疾病，目前尚無有確切療效的治療方法。使用特異性SIRNA剔除TGFΒII型受體表達(dá)可以抑制角膜成纖維細(xì)胞表達(dá)纖維粘連蛋白并降低其遷移能力。剔除CTGF表達(dá)可使皮膚成纖維細(xì)胞內(nèi)I型和III型前膠原蛋白、堿性成纖維細(xì)胞生長因子、組織金屬蛋白酶抑制因子（TISSUEINHIBITOROFMETALLOPROTEINASE，TIMP）1，TIMP2和TIMP3等基因表達(dá)水平降低。這些結(jié)果提示TGFΒ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和CTGF均可能是瘢痕疙瘩治療的潛在靶點(diǎn)。病毒性疾病的治療加州大學(xué)洛杉磯分校和加州理工學(xué)院的研究人員開發(fā)出使用RNAI技術(shù)來阻止艾滋病病毒進(jìn)入人體細(xì)胞。這個研究小組設(shè)計(jì)合成的LENTI病毒載體引入SIRNA，激發(fā)RNAI使其抑制了HIV1的CORECEPTORCCR5進(jìn)入人體外周T淋巴細(xì)胞，而不影響另一種HIV1主要的CORECEPTORCCR4，從而使以LENTI病毒載體為媒介引導(dǎo)SIRNA進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生了免疫應(yīng)答，由此治療HIV1和其他病毒感染性疾病的可行性大大增加。RNAI還可應(yīng)用于其它病毒感染如脊髓灰質(zhì)炎病毒等，SIRNA已證實(shí)介導(dǎo)人類細(xì)胞的細(xì)胞間抗病毒免疫，用SIRNA對MAGI細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理可使其對病毒的抵抗能力增強(qiáng)。在最近全世界約30個國家和地區(qū)散發(fā)或流行的嚴(yán)重急性呼吸綜合征SEVEREACUTERESPIRATORYSYNDROME，SARS）的防治研究中，RNAI也受到了重視。SIRNA在感染的早期階段能有效地抑制病毒的復(fù)制，病毒感染能被針對病毒基因和相關(guān)宿主基因的SIRNA所阻斷，這些結(jié)果提示RNAI能勝任許多病毒的基因治療，RNAI將成為一種有效的抗病毒治療手段。這對于許多嚴(yán)重的動物傳染病的防治具有十分重大的意義。遺傳性疾病的治療美國西北大學(xué)的CARTHEWRW和日本基因研究所的ISHIZUKAA等人發(fā)現(xiàn)RNAI同脆性X染色體綜合征（與FMR1基因異常有關(guān)的導(dǎo)致智力低下的染色體?。┲g的關(guān)系密切，揭示了與RNAI相關(guān)機(jī)制的缺陷可能導(dǎo)致人類疾病的病理機(jī)制。遺傳性疾病的RNAI治療成為當(dāng)今研究RNAI的又一大熱點(diǎn)。腫瘤病的治療腫瘤是多個基因相互作用的基因網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的結(jié)果，傳統(tǒng)技術(shù)誘發(fā)的單一癌基因的阻斷不可能完全抑制或逆轉(zhuǎn)腫瘤的生長，而RNAI可以利用同一基因家族的多個基因具有一段同源性很高的保守序列這一特性，設(shè)計(jì)針對這一區(qū)段序列的DSRNA分子，只注射一種DSRNA即可以產(chǎn)生多個基因同時(shí)剔除的表現(xiàn)，也可以同時(shí)注射多種DSRNA而將多個序列不相關(guān)的基因同時(shí)剔除。MAEN等應(yīng)用RNAI技術(shù)成功地阻斷了MCF7乳腺癌細(xì)胞中一種異常表達(dá)的與細(xì)胞增殖分化相關(guān)的核轉(zhuǎn)錄因子基因SP1的功能。盡管化療能有效消滅腫瘤細(xì)胞，卻不能有效的靶向腫瘤細(xì)胞，因此，在治療過程中導(dǎo)致很多正常細(xì)胞的死亡，實(shí)現(xiàn)靶向腫瘤細(xì)胞同樣也是以RNA干擾為基礎(chǔ)的腫瘤治療的重要發(fā)展方向。目前已有很多針對

簡介：重要實(shí)驗(yàn)重要實(shí)驗(yàn)1、RNA酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)（RNASEPROTECTIONASSAY）它在許多方面與S1核酸酶分析方法類似。它是用人工合成的具35S或32P標(biāo)記的反義RNA探針同目的MRNA雜交，所形成的雙鏈體分子用只切割單鏈的RNASEA和RNASET1消化，之后將仍保留著的RNA做大小分部分離，于是被保護(hù)的RNA探針便給出了在樣品中存在的目的MRNA的大小數(shù)值。此法同樣可鑒定樣品中MRNA的數(shù)量。2、DNA酶足跡法（DNASEFOOTPRINTING）也叫足跡實(shí)驗(yàn)（FOOTPRINTINGASSAY），是一種用來檢測被特定蛋白特異性結(jié)合的DNA序列的位置及其核苷酸序列結(jié)構(gòu)特征的實(shí)驗(yàn)方法?；驹懋?dāng)DNA分子中的某一區(qū)段同特異蛋白結(jié)合之后，便會得到保護(hù)而免受DNASEⅠ的切割作用，結(jié)果不會產(chǎn)生出相應(yīng)長度的切割分子，于是在凝膠電泳放射自顯影圖片上便會出現(xiàn)一個空白區(qū)，俗稱“足跡”。通過與沒有蛋白保護(hù)的對照DNA序列比較，便可得知相應(yīng)于足跡部位的核苷酸序列結(jié)構(gòu)。3、S1核酸酶定位法（NUCLEASES1MAPPING）用于揭示MRNA序列結(jié)構(gòu)特征的一種技術(shù)。將從一個克隆基因分離的經(jīng)放射性標(biāo)記的單鏈DNA片段同其相應(yīng)的MRNA退火形成雙鏈分子，然后用S1核酸酶消化此雜合分子上未互補(bǔ)配對的單鏈序列，再用PAGE及放射自顯影方法，檢測保留下來的DNA片段的分子大小。此法可測定克隆基因中的內(nèi)含子數(shù)目及大體位置，MRNA分子的5’端位置及MRNA5’端任何不均一性的程度。4、染色體步移（CHROMOSOMEWALKING）借助反向PCR（INVERSEPCR）通過使部分序列已知的限制片段自身環(huán)化連接，然后在已知序列部位設(shè)計(jì)一對反向引物，經(jīng)PCR而使未知序列得到擴(kuò)增。重復(fù)進(jìn)行反向PCR，從染色體已知序列出發(fā)，逐步擴(kuò)增出未知序列，稱染色體步移。5、凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)（GELRETARDATIONASSAY）又叫DNA遷移率變動實(shí)驗(yàn)（DNAMOBILITYSHIFTASSAY），或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)（ELECTROPHORETICMOBILITYSHIFTASSAY，EMSA），或條帶阻滯實(shí)驗(yàn)（BANDRETARDATIONASSAY）。它是根據(jù)裸露的DNA與結(jié)合有某種蛋白的相同大小的DNA在電泳中具有不同的遷移率（DNAPROTEIN復(fù)合物由于具有較高的分子量，因此通過凝膠的速度要比裸露的DNA緩慢）這一原理，在20世紀(jì)80年代初期設(shè)計(jì)出來的用于檢測與特定DNA片段相結(jié)合的特定蛋白的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。目前也可用于RNA結(jié)合PROTEIN的研究。6、甲基化干擾實(shí)驗(yàn)（METHYLATIONINTERFERENCEASSAY）根據(jù)DMA能使G殘基甲基化，而六氫吡啶又能特異地切割甲基化的G殘基這一原理設(shè)計(jì)的，用于研究PROTEIN與DNA相互作用的一種有效的辦法。7、WESTERNBLOTTING即蛋白質(zhì)印跡（PROTEINBLOTTING），是用來檢測在不均一的蛋白質(zhì)樣品中，是否存在目標(biāo)蛋白質(zhì)的一種技術(shù)。其操作程序與SOUTHERNBLOTTING十分類似。先將蛋白質(zhì)作變性SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，然后轉(zhuǎn)移到諸如硝酸纖維素濾膜一類的固體支持物上，通過專一性抗體探測目標(biāo)蛋白質(zhì)。隨后再用一種標(biāo)記的第二抗體（如125I標(biāo)記的或生物素化的羊抗兔的IGG）檢測在印記中存在的免疫復(fù)合物（即第一抗體與抗原復(fù)合物）。由于本法是在變性和還原條件下進(jìn)行凝膠電泳，因此目標(biāo)蛋白質(zhì)的分子大小是可被檢測出的。名詞解釋一名詞解釋一1、小分子G蛋白單體蛋白，分子量2030KD，與一般G蛋白Α亞基有高度同源性并具有相似性，同時(shí)與RAS蛋白具有較高同源性，又稱為RAS超家族，分為RAS、RHO、ARF、SAR、RAN、RAB六個亞家族，參與多種信號傳遞途徑。其中RAS蛋白是細(xì)胞增殖與分化的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，其基因的突變與許多人類腫瘤有關(guān)。2、大分子G蛋白（鳥苷酸結(jié)合蛋白（GUANINENUCLEOTIDEBINDINGPROTEIN，簡稱G蛋白））G蛋白是一類和GTP或GDP相結(jié)合、位于細(xì)胞膜胞漿面的外周蛋白，由三個亞基組成。他們是Α亞基（45KD）、Β亞基（35KD）和Γ亞基（7KD）。G蛋白有兩種構(gòu)象，一種以ΑΒΓ三聚體存在并與GDP結(jié)合，為非活化型；另一種構(gòu)象是Α亞基與GTP結(jié)合并導(dǎo)致ΒΓ二聚體的脫落，此型為活化型。功能1、調(diào)節(jié)腺苷酸環(huán)化酶活性；2、調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜CGMP磷酸二酯酶活性。3、調(diào)節(jié)磷脂酶C活性，促進(jìn)IP3與DG的生成；4、調(diào)節(jié)離子通道。類似機(jī)制至少出現(xiàn)在六個ECOLI操縱子中，它們編碼的酶均參與AA的合成。13、DNA的體外重組DNA的體外重組是指含有特異目的基因的DNA片段與載體DNA在試管內(nèi)連接的過程。常用的方法1、粘性末端連接法；2、平末端連接法；3、結(jié)尾法；4、人工接頭法（LINKER）。14、“自殺基因”的基因治療也稱活化前體藥物性基因治療。某些病毒或細(xì)菌產(chǎn)生的酶能將對人體無毒或低毒的藥物前體，在人體細(xì)胞內(nèi)一系列酶的催化下轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)胞毒性物質(zhì)，從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。15、限制性核酸內(nèi)切酶（RESTRICTIONENDONUCLEASE）是一類特異性地水解雙鏈（DS）的DNA的磷酸二酯酶。分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。內(nèi)切酶的用途1、制作DNA物理圖譜；2、DNA限制性片段長度多態(tài)性分析（RFLPS）。3、基因克隆及亞克??；4、DNA雜交與序列分析；5、基因組同源性研究；6、基因突變和化學(xué)修飾的研究。16、感受態(tài)細(xì)胞（COPETENTCELL）理化方法誘導(dǎo)細(xì)胞，使其處于最適攝取和容納外來DNA的生理狀態(tài)。17、單順反子（MONOCISTRON）真核基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子，即一個基因編碼一條多肽鏈或RNA鏈，每個基因轉(zhuǎn)錄有各自的調(diào)節(jié)元件。18、包裝細(xì)胞（PAKAGINGCELL）包裝細(xì)胞是通過基因工程技術(shù)對細(xì)胞進(jìn)行修飾，使其產(chǎn)生病毒結(jié)構(gòu)基因GAG、POL、ENV所編碼的蛋白，為逆轉(zhuǎn)錄病毒載體包裝成為重組病毒提供全面的病毒蛋白，同時(shí)，該包裝細(xì)胞并不能轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生編碼完整病毒的基因組RNA，一句話，包裝細(xì)胞本身不能產(chǎn)生任何形式的病毒顆粒。19、基因敲除GENEKNOCKOUT將細(xì)胞基因組的某一序列克隆并加以改造后重新導(dǎo)入細(xì)胞中，這一序列就可以與基因組內(nèi)的同源序列發(fā)生重組，從而將改造后的基因置換到基因組內(nèi)，實(shí)現(xiàn)基因的定位突變。可以用正?；蚯贸蛔兊幕颍赃M(jìn)行性狀的改良和遺傳病的治療，又可以用突變的基因敲除正常的基因，以研究此基因在發(fā)育和調(diào)控方面的作用。GENEKNOCKOUT，基因敲除，定向敲除，基因敲除小鼠。GENEKNOCKIN，基因敲入，定向替代，插入到無關(guān)基因的地方，基因整合，基因重組小鼠。20、基因打靶（GENETARGETING）有些生物，例如釀酒酵母，通過轉(zhuǎn)化后細(xì)胞中發(fā)生的外源DNA與核基因組DNA之間的同源重組，可使外源基因插入到特定的染色體位置，此過程叫基因打靶，有時(shí)也叫基因置換（TRANSPLACEMENT）。應(yīng)用此技術(shù)，我們能夠?qū)Ⅲw外修飾改造的突變基因或是某種新的基因，取代特定的染色體基因，從而在生物活體內(nèi)研究此基因的功能。21、RFLP（RESTRICTIONFRAGMENTLENGTHPOLYMORPHISM，RFLP）限制性片段長度多態(tài)性，人類第一代遺傳標(biāo)記。當(dāng)用限制性內(nèi)切酶切割不同品種或個體的基因組DNA時(shí)，如果限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)的堿基發(fā)生突變，或者酶切位點(diǎn)之間DNA片段發(fā)生堿基的插入或缺失，導(dǎo)致酶切片斷的大小、數(shù)量發(fā)生了變化，產(chǎn)生相當(dāng)多的數(shù)目和大小不等的DNA片段。這種變化可以通過特定的探針雜交進(jìn)行檢測，從而可以比較不同品種或個體之間的DNA水平的差異（或多態(tài)性）。廣泛用于基因組遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位以及生物的進(jìn)化和分類關(guān)系研究。22、RAPD（RANDOMAMPLIFIEDPOLYMORPHISMDNA，RAPD）隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA，利用隨即引物擴(kuò)增尋找多態(tài)性DNA片段的分子標(biāo)記方法。是建立在PCR技術(shù)基礎(chǔ)上，利用一系列（通常數(shù)百）不同的隨機(jī)排列堿基順序的寡聚核苷酸單鏈（一般為10BP）為引物，對所研究的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后用凝膠電泳分開擴(kuò)增片段，EB等染色劑染色后檢測擴(kuò)增產(chǎn)物DNA片段的多態(tài)性。與RAPD技術(shù)相類似的還有APPCR（ARBITRARYPRIMEDPCR，任意引物PCR）和DAF（DNAAMPLIFIEDFINGERPRINTS）2種標(biāo)記技術(shù)。在APPCR分析中，引物長度與常規(guī)PCR相當(dāng)，但退火溫度較低，允許大量錯配，引發(fā)具有隨機(jī)性質(zhì)的擴(kuò)增。所使用的引物較長（通常10～50BP），擴(kuò)增分為3個部分，每個部分要求的條件和組分的濃度存在差異。DAF是一種改進(jìn)的RAPD分析技術(shù)，與RAPD技術(shù)不同的是它使用引物濃度更高，長度更短（一般5～8BP），只有2個溫度循環(huán)，并常用聚丙烯酰胺凝膠電泳，所提供譜帶信息比RAPD大得多。三者合稱任意擴(kuò)增多帶譜。23、AFLP（AMPLIFIEDFRAGMENTLENGTHPOLYMORPHISM，AFLP）擴(kuò)增片段長度多態(tài)性，AFLP是RFLP和PCR結(jié)合的產(chǎn)物，其基本原理是將基因組DNA進(jìn)行限制性內(nèi)切酶酶切，然后選擇特定的片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，使用雙鏈人工“接頭”與基因組DNA的酶切片段相連接作為擴(kuò)增反應(yīng)模板，“接頭”與“接頭”相鄰的酶切片段的幾個堿基序列作為引物的結(jié)合位點(diǎn)。這樣就只有那些兩端序列能與選擇堿

簡介：論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文是我令人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得圓J11農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名Z§．玖紛切，6年，≥月加日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。罅論文不保密?？诒菊撐谋Ｃ埽谝荒杲饷芎筮m用本授權(quán)。請?jiān)谝陨峡趦?nèi)劃“√”研究生簽名如研究生簽名鞘鋤一庇分隆協(xié)，6年，2月幻日加傷IZ月L,O日

簡介：中山大學(xué)博士學(xué)位論文中山大學(xué)博士學(xué)位論文大蕉脫水蛋白大蕉脫水蛋白MPDHN12的分子生物學(xué)研究的分子生物學(xué)研究MOLECULARBIOLOGICALSTUDIESOFMPDHN12FROMMUSAPARADISIACA專業(yè)遺傳學(xué)業(yè)遺傳學(xué)博士生母培強(qiáng)博士生母培強(qiáng)導(dǎo)師王金發(fā)教授師王金發(fā)教授答辯委員會答辯委員會主席姚席姚楠教授委員梅曼彤員梅曼彤教授劉耀光劉耀光研究員研究員劉良式劉良式教授金立培金立培教授廣州廣州中山大學(xué)中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院二0一一年五月二十日一一年五月二十日I大蕉脫水蛋白大蕉脫水蛋白MPDHN12的分子生物學(xué)研究的分子生物學(xué)研究專業(yè)遺傳學(xué)業(yè)遺傳學(xué)博士生母培強(qiáng)博士生母培強(qiáng)指導(dǎo)教師王金發(fā)教授指導(dǎo)教師王金發(fā)教授中文摘要中文摘要銅離子是植物生長所必須的微量元素之一，但銅離子過量時(shí)，游離的銅離子可催化產(chǎn)生大量活性氧，從而給細(xì)胞帶來很大的毒性。因此，銅離子穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)對植物的正常生長發(fā)育是必不可少的。過量銅離子的結(jié)合主要由一些小分子蛋白質(zhì)、有機(jī)酸和氨基酸等完成。近年來研究發(fā)現(xiàn)脫水蛋白家族的部分成員具有較高的銅離子結(jié)合能力，但其銅離子結(jié)合對脫水蛋白結(jié)構(gòu)的影響及其相關(guān)生理功能仍不清楚。在本研究中，我們通過RACE克隆的方法從大蕉（MUSAPARADISIACAL，ABB群）中克隆到了一個編碼KNS型脫水蛋白的基因MPDHN12。該基因是首個從大蕉中克隆的脫水蛋白基因，其CDNA全長為639BP，ORF全長為321BP，編碼106個氨基酸。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)MPDHN12的氨基酸具有較大偏愛性，主要以帶正電荷的氨基酸和極性氨基酸組成，含有HISXNHIS（N012）銅離子結(jié)合結(jié)構(gòu)基序，具有無序蛋白結(jié)構(gòu)特征。因此，我們在本論文中主要研究了MPDHN12的銅離子結(jié)合特性及銅離子結(jié)合后對MPDHN12結(jié)構(gòu)的影響，同時(shí)我們還通過過表達(dá)煙草、酵母互補(bǔ)和亞細(xì)胞定位等探討了MPDHN12可能的生理功能。取得如下主要結(jié)果1、MPDHN12具有CU2結(jié)合特性IMAC和斯卡查德曲線分析表明每摩爾MPDHN12蛋白在體外能結(jié)合94摩爾CU2，其解離常數(shù)為508。組氨酸修飾削弱了MPDHN12在體外的CU2結(jié)合能力。此外，在CU2處理下，MPDHN12過表達(dá)煙草葉

簡介：分類號分類號Q78授予學(xué)位單位代碼授予學(xué)位單位代碼10434UDC密級級研究生學(xué)號號B20110021山東農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文抗RBSDV轉(zhuǎn)基因水稻田間生物學(xué)調(diào)查及分子特征分析FIELDINVESTIGATIONANDMOLECULARCHARACTERIZATIONOFTRANSGENICRICEWITHTHERESISTANTTORICEBLACKSTREAKEDDWARFVIRUS（RBSDV）2016年6月6日研究生研究生林超學(xué)科專業(yè)林超學(xué)科專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向植物抗病基因工程學(xué)院植物抗病基因工程學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院指導(dǎo)教師生命科學(xué)學(xué)院指導(dǎo)教師溫孚江教授溫孚江教授SHANDONGAGRICULTURALUNIVERSITYPHDDISSERTATIONFIELDINVESTIGATIONANDMOLECULARCHARACTERIZATIONOFTRANSGENICRICEWITHTHERESISTANTTORICEBLACKSTREAKEDDWARFVIRUS（RBSDV）DEPARTMENTLIFESCIENCEMAJORBIOCHEMISTRYANDMOLECULARBIOLOGYPHDCANDIDATELINCHAOSUPERVISORWENFUJIANGJUNE,2016

簡介：分類號R737．9密級公開濤J匆力學(xué)單位代碼10427學(xué)號2011010442碩士學(xué)位論文3．0TMRI表觀擴(kuò)散系數(shù)與乳腺癌病理及分子生物學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性研究研究生姓名于學(xué)娟導(dǎo)師姓名學(xué)科領(lǐng)域任瑞美腫瘤學(xué)濟(jì)南大學(xué)醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院所在學(xué)院山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院申請學(xué)位級別答辯時(shí)間每床醫(yī)學(xué)碩士2014年5月原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。論文作者簽名寸鬈媧日期。MS謝關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解濟(jì)南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借鑒；本人授權(quán)濟(jì)南大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。泓丌口保密年，解密后應(yīng)遵守此規(guī)定論文作者簽名寸嚳嫡導(dǎo)師簽名仫端乞日期沙忡S≥G

簡介：第二章第二章基因組的結(jié)構(gòu)與功能自測題基因組的結(jié)構(gòu)與功能自測題（一）選擇題A型題1．原核生物染色體基因組是A．線性雙鏈DNA分子B．環(huán)狀雙鏈DNA分子C．線性單鏈DNA分子D．線性單鏈RNA分子E．環(huán)狀單鏈DNA分子2．真核生物染色體基因組是A．線性雙鏈DNA分子B．環(huán)狀雙鏈DNA分子C．線性單鏈DNA分子D．線性單鏈RNA分子E．環(huán)狀單鏈DNA分子3．有關(guān)原核生物結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄，敘述正確的是A．產(chǎn)物多為多順反子RNAB．產(chǎn)物多為單順反子RNAC．不連續(xù)轉(zhuǎn)錄D．對稱轉(zhuǎn)錄E．逆轉(zhuǎn)錄4．原核生物的基因組主要存在于A．質(zhì)粒B．線粒體C．類核D．核糖體E．高爾基體5．下列有關(guān)原核生物的說法正確的是A．原核生物基因組DNA雖然與蛋白結(jié)合，但不形成真正的染色體結(jié)構(gòu)B．結(jié)構(gòu)基因中存在大量的內(nèi)含子C．結(jié)構(gòu)基因在基因組中所占比例較小D．原核生物有真正的細(xì)胞核E．基因組中有大量的重復(fù)序列6．下列有關(guān)原核生物的說法不正確的是A．原核生物的結(jié)構(gòu)基因與調(diào)控序列以操縱子的形式存在B．在操縱子中，功能上關(guān)聯(lián)的結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)在一起C．在一個操縱子內(nèi)，幾個結(jié)構(gòu)基因共用一個啟動子D．操縱元件也是結(jié)構(gòu)基因E．基因組中只存在一個復(fù)制起點(diǎn)7．真核生物染色質(zhì)中的非組蛋白是A．堿性蛋白質(zhì)B．序列特異性DNA結(jié)合蛋白C．識別特異DNA序列的信息存在于蛋白上D．不能控制基因轉(zhuǎn)錄及表達(dá)E．不參與DNA分子的折疊和組裝8．真核生物染色質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位是A．Α螺旋B．核小體C．質(zhì)粒D．?片層E．結(jié)構(gòu)域9．關(guān)于真核生物結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄，正確的說法是A．產(chǎn)物多為多順反子RNAB．產(chǎn)物多為單順反子RNAC．不連續(xù)轉(zhuǎn)錄D．對稱轉(zhuǎn)錄E．新生鏈延伸方向?yàn)?→510．外顯子的特點(diǎn)通常是A．不編碼蛋白質(zhì)B．編碼蛋白質(zhì)C．只被轉(zhuǎn)錄但不翻譯D．不被轉(zhuǎn)錄也不被翻譯E．調(diào)節(jié)基因表達(dá)11．下列有關(guān)衛(wèi)星DNA說法錯誤的是A．是一種高度重復(fù)序列B．重復(fù)單位一般為210BPC．重復(fù)頻率可達(dá)106D．能作為遺傳標(biāo)記E．在人細(xì)胞基因組中占56以上12．下列有關(guān)真核生物結(jié)構(gòu)基因的說法不正確的是A．結(jié)構(gòu)基因大都為斷裂基因B．結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄是不連續(xù)的C．含有大量的重復(fù)序列D．結(jié)構(gòu)基因在基因組中所占比例較小E．產(chǎn)物多為單順反子RNA13．染色體中遺傳物質(zhì)的主要化學(xué)成分是D磷酸二酯鍵E以上都是7最嚴(yán)重的DNA損傷是A錯配B堿基置換CDNA雙鏈斷裂DDNA交聯(lián)E移碼突變8不會造成DNA損傷的是AGLUCOSEBBASEANALOGUECFREERADICALDACTIVEOXYGENSPECIESEULTRAVIOLET9最簡單的修復(fù)方式是A回復(fù)修復(fù)B切除修復(fù)C重組修復(fù)D錯配修復(fù)ESOS修復(fù)10REC蛋白在哪種修復(fù)機(jī)制中起作用A非同源性重組B同源性重組C切除修復(fù)D錯配修復(fù)E回復(fù)修復(fù)11容易產(chǎn)生突變的修復(fù)方式是ASOS修復(fù)B同源性重組C切除修復(fù)D錯配修復(fù)E回復(fù)修復(fù)12關(guān)于嘧啶二聚體形成下列說法錯誤的是A屬于DNA鏈內(nèi)交聯(lián)B形式有TT、CT、CCC屬于DNA鏈間交聯(lián)D可由光復(fù)活酶修復(fù)E紫外線照射可引起此種損傷13關(guān)于XP蛋白下列說法錯誤的是A參與DNA損傷的切除修復(fù)B該基因的遺傳缺陷可導(dǎo)致著色性干皮病C是一種光復(fù)活酶D與“毛發(fā)硫營養(yǎng)不良病”有關(guān)E是一個多基因家族14關(guān)于非同源性重組下列說法錯誤的是A是雙鏈斷裂損傷的一種修復(fù)方式B是一種不精確修復(fù)C需要連接酶參與DREC蛋白起關(guān)鍵作用EDNAPK起關(guān)鍵作用15關(guān)于光復(fù)活修復(fù)的敘述中錯誤的是A是高等生物修復(fù)嘧啶二聚體的主要方式B光復(fù)活酶受紫外線作用而激活C是修復(fù)DNA鏈上嘧啶二聚體的最直接方式D光復(fù)活酶能與嘧啶二聚體結(jié)合E可使DNA結(jié)構(gòu)完全恢復(fù)正常16關(guān)于DNA雙鏈斷裂的敘述錯誤的是A是最嚴(yán)重的DNA損傷B有DNAPK參與修復(fù)C靠同源性重組修復(fù)D其修復(fù)不是原位修復(fù)E靠非同源性重組修復(fù)17關(guān)于5溴尿嘧啶的敘述哪一項(xiàng)錯誤A可取代正常堿基與互補(bǔ)鏈上堿基配對B是堿基類似物C可引起點(diǎn)突變D可引起移碼突變E是胸腺嘧啶類似物18關(guān)于DNA單鏈斷裂的敘述哪一項(xiàng)錯誤A可以得到完全修復(fù)B對真核生物來說是致死性的C電離輻射可以導(dǎo)致該類損傷D堿基破壞和脫落易導(dǎo)致DNA單鏈斷裂E脫氧核糖破壞是直接原因之一19有關(guān)同源性重組的敘述錯誤的是A原核生物中起關(guān)鍵作用的是RECA蛋白B真核生物中起關(guān)鍵作用的是RAD51蛋白C是哺乳動物雙鏈斷裂的修復(fù)方式D具有很高的忠實(shí)性E需要ATP參與20關(guān)于錯配修復(fù)下列說法正確的是ARAD51蛋白參與B沒有連接酶參與C可對DNA雙鏈斷裂進(jìn)行修復(fù)DMUT蛋白參與E是一種不精確的修復(fù)21關(guān)于DNA損傷的修復(fù)下列說法錯誤的是