殼聚糖酶的制備及應用.pdf

1、殼寡糖是一種低分子量的殼聚糖，分子量在500-10000之間，水溶性比殼聚糖好，可以直接被機體吸收，現已廣泛應用于醫(yī)藥、保健食品和農業(yè)領域中。殼寡糖的制備可分為物理降解法、化學降解法和酶降解法。目前市場上大多數殼寡糖生產仍然采用酸降解或氧化降解方法，其生產工藝復雜，對環(huán)境污染大，產品分子量大，溶解性和生物活性低。而酶解法反應條件溫和、整個降解過程中無其他反應試劑的加入、不至于發(fā)生其它副反應、降解過程及降解產物相對分子質量分布易于控制、殼

2、寡糖得率高、不造成環(huán)境污染。
　　本研究所用的高產殼聚糖酶的微生物菌株是從自然界中分離篩選出的，經過鑒定為蠟樣芽孢桿菌SHS-0903，提取此菌種殼聚糖酶基因，連接到原核表達載體pET28a上，以大腸桿菌BL21為宿主轉化表達，獲得了工程菌，并對其發(fā)酵產酶條件進行優(yōu)化，研究確定其最適產酶培養(yǎng)基。在此培養(yǎng)條件下，經過破壁離心后的殼聚糖酶活力可達到1500U/mL。發(fā)酵粗酶液經離心，20％-70%硫酸銨鹽析后經濃縮得到殼聚糖精酶。酶學

3、性質研究表明，其酶解最適溫度為55℃，最適pH在4.8，該酶在60℃以下穩(wěn)定，4℃冷藏30天后酶活保持在90%以上。Mn2+對酶活有促進作用，Cu2+，Fe3+對酶活有抑制作用。該殼聚糖酶為專一性內切酶，此酶的比活性比己知的殼聚糖酶酶活都要高，應用此酶使得酶法生產殼寡糖實現工業(yè)化生產成為可能。
　　研究了殼寡糖的酶法生產條件，分別考察了酶促反應中溫度，pH，底物濃度，酶用量，反應時間的影響。結果表明在pH4.8-5.3，殼聚糖濃度