殼聚糖酶的研制及酶法生產(chǎn)殼寡糖.pdf

1、本研究從自然界中分離篩選出一株高產(chǎn)殼聚糖酶的微生物菌株，經(jīng)鑒定為Aspergillusfumigams。通過誘變選育，獲得了菌株AspergillusfumigatusJxsd-97，并對其發(fā)酵產(chǎn)酶條件進行優(yōu)化，研究確定其最適產(chǎn)酶培養(yǎng)基組分為(‰w／v)：殼聚糖1．6，蛋白胨0．4，MgS04·7H200．04，KH2P040．04，KCl0．05，F(xiàn)eS04·7H200．001，起始pH為5．0；最適產(chǎn)酶培養(yǎng)條件是：250mL搖瓶裝液

2、量為50mL，培養(yǎng)溫度為28*(2，接種量為0．6mL，培養(yǎng)時間為96h。在最適產(chǎn)酶培養(yǎng)條件下，發(fā)酵液中殼聚糖酶活力可達(dá)到9．35U／mL。采用75％乙醇分級沉淀、透析(分子量：8000～14400)、SP-SepharoseFF離子交換層析對菌AsspergillusfumigatusJxsd-97發(fā)酵液中的殼聚糖酶進行分離提純，獲得了SDS-PAGE呈單條帶的殼聚糖酶，分子量為25kD。對該酶進行了酶學(xué)性質(zhì)的研究，利用薄層層析分析確

3、認(rèn)酶解產(chǎn)物為殼寡糖，不含氨基葡萄糖，證明了該酶為內(nèi)切殼聚糖酶。該殼聚糖酶的最適溫度和最適pH分別為63'(2和pH5．8，酶活力在pH4．5～8．0范圍內(nèi)和45*(2以下時相對穩(wěn)定；金屬離子Mn2+對內(nèi)切殼聚糖酶有強烈的激活作用，而Hg2+，Ag+，F(xiàn)e3+，Cd2+，pb2+則有強烈抑制作用。對內(nèi)切殼聚糖酶的N．端氨基酸序列進行測定，結(jié)果為YNLPNNLKQ。N．端氨基酸序列的測定，為克隆表達(dá)該殼聚糖酶的基因做好了準(zhǔn)備。 研究