海洋嗜殺酵母Wickerhamomyces anomalus YF07b菌株新型嗜殺因子的研究.pdf

1、嗜殺因子(Killer toxin)是一些酵母菌分泌的具有抗微生物活力的外毒素，它們一般是分子量較小的蛋白質(zhì)或者糖蛋白，通常首先作用于敏感酵母的細胞壁，可以不通過細胞接觸而殺死一些同種或親緣關(guān)系較近的酵母菌。能夠產(chǎn)生嗜殺因子的酵母菌稱為嗜殺酵母(Killeryeasts)，它們對自己所產(chǎn)生的嗜殺因子具有免疫性；能夠被嗜殺酵母殺死的菌株稱為敏感菌株；既不能被其他嗜殺酵母菌株殺死也不能殺死其他菌株的酵母稱之為中性酵母。
　　海洋酵母W

2、ickerhamomyces anomalus YF07b菌株是一株從海鞘（Sea squirts）腸道中分離的嗜殺菌株，具有較廣的殺菌譜，其分泌的嗜殺因子可以殺死梭子蟹―乳化病‖的病原菌梅奇酵母（Metschnikowia bicuspidata)WCY菌株。
　　通過對海洋嗜殺酵母W. anomalus YF07b菌株產(chǎn)嗜殺因子的培養(yǎng)條件和嗜殺因子最適作用條件的優(yōu)化，確定了產(chǎn)嗜殺因子的最佳培養(yǎng)條件：pH為3.5，NaCl的濃度

3、為2.0％(w/v)，在20℃條件下180rpm振蕩培養(yǎng)3d；嗜殺因子作用的最佳條件：pH3.5，NaCl的濃度為4.0%(w/v)，作用溫度為16℃。曾有研究發(fā)現(xiàn)海洋嗜殺酵母W. anomalus YF07b菌株可以產(chǎn)生一種分子量為47.0kDa的嗜殺因子，該嗜殺因子既有嗜殺活性又有β-1,3-葡聚糖酶活性。但是在本研究中通過發(fā)酵上清液的制備、發(fā)酵上清液透析、DEAE-Sephorose Fast Flow陰離子交換、超濾濃縮、Sep

4、hadex G-75凝膠過濾層析、超速離心濃縮和SDS-PAGE電泳等步驟分離純化出一種分子量約為67.0kDa的嗜殺因子，并且該純化的嗜殺因子只具有嗜殺活性沒有β-1,3-葡聚糖酶活性，所以本研究中純化出的嗜殺因子是一種新型的嗜殺因子。純化的新型嗜殺因子對Yarrowia lipolytica, Saccharomyces cerevisiae, M. bicuspidata WCY, Candida tropicalis, Cand

5、ida albicans和Kluyveromyces aestuartii具有嗜殺作用，在 pH3.5和 NaCl濃度為4.0%(w/v)的嗜殺活性檢測平板上在16℃培養(yǎng)條件下對敏感菌株WCY的嗜殺活性最強。
　　對純化的新型嗜殺因子的嗜殺機理進行初步探究：純化的嗜殺因子不能殺死WCY菌株的原生質(zhì)體，卻可以殺死完整的WCY菌株細胞，說明該嗜殺因子發(fā)揮嗜殺作用需要完整的細胞壁；吸附試驗表明該嗜殺因子的初始結(jié)合位點存在于敏感酵母的細胞