鈴夜蛾屬二近緣種凝集素性質(zhì)的研究.pdf

1、本研究以煙夜蛾Helicoverpa assulta(Guenée)和近緣種棉鈴蟲Helicoverpa armigera(Hübner)為試驗(yàn)材料，對煙夜蛾和棉鈴蟲凝集素的理化特性和7個(gè)凝集素基因表達(dá)的發(fā)育特性和組織特異性進(jìn)行了對比研究。初步明確了煙夜蛾血淋巴凝集素的凝集活性，煙夜蛾凝集素的理化性質(zhì)、棉鈴蟲凝集素活性及理化性質(zhì)，以及7個(gè)凝集素基因在煙夜蛾與棉鈴蟲不同發(fā)育期和組織中的表達(dá)特性。取得以下研究結(jié)果:
　　一、煙夜蛾血淋

2、巴凝集素活性
　　利用血凝法檢測煙夜蛾Helicoverpa assulta血淋巴對紅細(xì)胞的凝集活性和不同發(fā)育期凝集素水平，同時(shí)選取13種糖進(jìn)行凝集素糖抑制反應(yīng)，以明確該凝集素與煙夜蛾發(fā)育的關(guān)系和糖結(jié)合特性。研究結(jié)果表明，在煙夜蛾的不同發(fā)育期均檢測有凝集素，但各齡幼蟲及不同日齡蛹的凝集活性存在明顯差異，雌蛹凝集素水平高于同日齡的雄蛹，表明凝集素與發(fā)育期、蟲齡及蛻皮過程有關(guān)，且與性別相關(guān)。煙夜蛾蛹血淋巴凝集素活性與近緣種棉鈴蟲H.a

3、rmigera的相類似，均被D-半乳糖、L-鼠李糖、麥芽糖、乳糖明顯抑制;D-葡萄糖、D-果糖、L-巖藻糖和蔗糖等也有抑制作用，但抑制程度不同;L-阿拉伯糖與棉鈴蟲凝集索的專一性結(jié)合更強(qiáng):N-乙酰葡萄糖胺和L-山梨糖只對棉鈴蟲凝集素有抑制作用，而對煙夜蛾凝集素?zé)o抑制作用，說明這2個(gè)近緣種的凝集素不完全相同。
　　二、煙夜蛾凝集素的理化性質(zhì)
　　利用鴨紅血細(xì)胞檢測反復(fù)凍融、加熱、EDTA、金屬離子、胰蛋白酶以及酚氧化酶對煙夜蛾

4、H.assulta血淋巴中凝集素凝集活性的影響。結(jié)果表明:反復(fù)凍融對凝集素的活性沒有影響。但是，隨處理溫度的升高或持續(xù)時(shí)間的延長，其凝集活性下降，在60℃處理15 min后凝集活性完全喪失，說明煙夜蛾血淋巴凝集素的熱穩(wěn)定性較差。10 mmol/L EDTA能顯著抑制煙夜蛾凝集素的凝集活性，加入Ca2+能使凝集活性恢復(fù)，說明煙夜蛾凝集素是一種C型凝集素。凝集素對經(jīng)胰蛋白酶修飾后的鴨紅血細(xì)胞的凝集活性明顯增強(qiáng)。血淋巴中酚氧化酶的存在不會對煙

5、夜蛾凝集素的凝集活性產(chǎn)生影響。
　　三、棉鈴蟲血淋巴凝集素活性
　　利用血凝法檢測棉鈴蟲H.armigera血淋巴不同發(fā)育期凝集素水平，同時(shí)選取13種糖進(jìn)行凝集素糖抑制反應(yīng)，以明確該凝集素與棉鈴蟲發(fā)育的關(guān)系和糖結(jié)合特性。研究結(jié)果表明，在棉鈴蟲的不同發(fā)育期均檢測有凝集素，相比而言，卵和成蟲體內(nèi)的凝集素水平較低，而幼蟲血淋巴中凝集素活性最高，高齡幼蟲的凝集活性明顯高于低齡幼蟲，同一蟲齡的幼蟲所含凝集素水平差異顯著。不同日齡蛹的凝

6、集活性也存在較大差異。此外，雌性個(gè)體凝集素水平高于同齡的雄性個(gè)體。由此表明，凝集素與棉鈴蟲發(fā)育期、幼蟲蟲齡、蛹的不同日齡及蛻皮過程有關(guān)，且與性別相關(guān)。棉鈴蟲幼蟲和蛹血淋巴凝集素活性均被麥芽糖、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、乳糖、D-半乳糖明顯抑制:D-葡萄糖、蔗糖、甘露糖、L-山梨糖等也有抑制作用，但抑制程度不同;D-果糖和N-乙酰葡萄糖胺只對棉鈴蟲蛹凝集素有抑制作用，而對棉鈴蟲幼蟲凝集素?zé)o抑制作用，說明幼蟲和蛹的凝集素種類不完全相同。

7、r>　　四、煙夜蛾與棉鈴蟲二近緣種凝集素基因時(shí)空表達(dá)對比研究
　　首先分別選取煙夜蛾和棉鈴蟲的5齡幼蟲，預(yù)蛹，不同日齡的蛹，采用RT-PCR法初步分析了2種血細(xì)胞凝集素其因ctlh1和ctlh2，以及5種脂肪體凝集素基因ctlf3、ctlf4、ctlf5、ctlf6和ctlf8等7個(gè)凝集素基因在兩個(gè)近緣種不同發(fā)育期的表達(dá)。在煙夜蛾中發(fā)現(xiàn)與棉鈴蟲相似的7個(gè)凝集素基因mRNA的表達(dá)。這7個(gè)凝集素基因無論在煙夜蛾還是在棉鈴蟲的不同發(fā)育期

8、表達(dá)都具有顯著差異。同一種基因在兩個(gè)近緣種之間的表達(dá)也存在差異。此外，通過選取煙夜蛾和棉鈴蟲的脂肪體和血細(xì)胞，采用RT-PCR法分析7個(gè)凝集素基因在不同組織中的表達(dá)情況。結(jié)果表明，血細(xì)胞凝集素基因ctlh1除在煙夜蛾的血細(xì)胞中表達(dá)，還在脂肪體表達(dá)，組織表達(dá)的特異性不強(qiáng)。ctlh2卻只在脂肪體表達(dá)。脂肪體凝集素基因僅ctlf3和ctl4在煙夜蛾和棉鈴蟲的脂肪體中表達(dá)，具有顯著的組織表達(dá)特異性;ctlf8只在煙夜蛾脂肪體內(nèi)特異性表達(dá)，但在棉