日本血吸蟲SjIrV1基因的特性及其重組蛋白免疫保護(hù)效果的初步評估.pdf

1、鈣結(jié)合蛋白是日本血吸蟲生長發(fā)育不可或缺的蛋白，執(zhí)行著非常廣泛而重要的功能。本研究在課題組日本血吸蟲體被表膜蛋白研究基礎(chǔ)上，利用PCR技術(shù)克隆了中國大陸株日本血吸蟲66kDa鈣結(jié)合蛋白(SjIrV1)編碼基因的cDNA序列，BLAST分析與菲律賓株日本血吸蟲SjIrV1cDNA編碼序列一致，熒光定量PCR分析表明該基因在童蟲和成蟲期不同發(fā)育階段均有表達(dá)，其中在35d和42d成蟲中表達(dá)量較高，在42d雌蟲中該基因表達(dá)水平遠(yuǎn)高于42d雄蟲。構(gòu)

2、建重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)-SjIrV1，在大腸桿菌中成功誘導(dǎo)表達(dá)，重組蛋白主要以可溶性形式存在，通過高效液相色譜法(RP-HPLC)以及串聯(lián)質(zhì)譜法(MS/MS)鑒定所獲蛋白為目的蛋白SjIrV1。蛋白質(zhì)印跡（Westernblotting）分析結(jié)果顯示重組蛋白能被感染日本血吸蟲鼠血清和免疫鼠血清所識別，sjIrV1蛋白在蟲體各發(fā)育階段中均表達(dá)。免疫熒光染色實驗觀察表明SjIrV1主要分布在日本血吸蟲成蟲的表膜。應(yīng)用重組蛋白免疫B

3、ALB/c小鼠后，免疫鼠血清中檢測到較高水平的特異性IgG、IgG1和IgG2a抗體，且IgG1/IgG2a比值呈下降趨勢，同時誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較高滴度的IL-12p70和IFN-γ細(xì)胞因子，說明rsjIrV1免疫小鼠后誘導(dǎo)了Th1/Th2混合型免疫應(yīng)答，但以Th1型占主導(dǎo)。動物保護(hù)實驗結(jié)果表明，rSjIrV1誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生12.25％的減蟲率和34.07％的肝臟減卵率。本研究結(jié)果提示，SjIrV1可能在日本血吸蟲的生長發(fā)育過程中起著重要作用