出芽短梗霉雙產(chǎn)物發(fā)酵及其應(yīng)用研究.pdf

1、聚蘋果酸poly(β-L-malic acid)(PMLA)是一種以L-蘋果酸為唯一單體的完全生物可降解性高分子聚合物，具有極佳的水溶性、易修飾性、易代謝性和生物相溶性，是一種具有廣闊應(yīng)用前景的生物學(xué)材料。
　　 本研究利用出芽短梗霉Aureobasidium pullulans IFO6353發(fā)酵合成PMLA，同時(shí)得到其胞外水溶性多糖普魯蘭。普魯蘭是一種優(yōu)良的高分子材料，具有重要的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值。
　　 有機(jī)溶劑沉淀法和

2、透析法對(duì)發(fā)酵液中的PMLA和普魯蘭多糖進(jìn)行分離純化。核磁共振(NMR)和傅立葉紅外吸收光譜(FT-IR)對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)分析。凝膠滲透色譜(GPC)測定PMLA的分子量，其Mw和Mn分別是是8505和8326。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上應(yīng)用正交試驗(yàn)法對(duì)Aureobasidium pullulans IFO6353發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化。利用優(yōu)化后的培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵，與優(yōu)化前相比較，其產(chǎn)率提高了41.8％。優(yōu)化后的最高產(chǎn)率比初始培養(yǎng)基的產(chǎn)率提高了約1

3、2倍，最高產(chǎn)率達(dá)2.0809 g/L。
　　 利用ATMT(Agrobacterum tumefaciens-mediated transformation)方法，通過與重組根癌農(nóng)桿菌LBA4404Hyg共培養(yǎng)，得到了一株黑色素合成缺陷的基因工程菌。利用細(xì)胞核染色和PCR方法對(duì)于獲得的工程菌進(jìn)行了檢證。采用潮霉素特異性引物對(duì)該突變株的基因組總DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳顯示得到了目的條帶。對(duì)該基因工程菌進(jìn)行發(fā)酵研究，其初

4、始聚蘋果酸合成產(chǎn)率為0.1058 g/L。
　　 聚蘋果酸與十四烷基三甲基溴化銨(MTAB)通過靜電作用生成兩親型梳形復(fù)合物PMLA-MTAB。利用核磁共振法檢測產(chǎn)物。應(yīng)用透析法制備復(fù)合物包載紫杉醇的納米粒子。通過MTT法比較膠束包載紫杉醇與單純紫杉醇對(duì)Hela癌細(xì)胞的增殖抑制作用。結(jié)果顯示，PMLA-MTAB載藥膠束與單純紫杉醇給藥方式對(duì)比，相同濃度下能起到相似的抑制效果。兩親型疏水型復(fù)合物PMLA-MTAB有望作為疏水性抗癌