Lhx3GFP和Lhx3loxp小鼠的構(gòu)建與分析.pdf

1、Lhx3是LIM-HD家族轉(zhuǎn)錄因子，同時也是人類疾病相關(guān)基因。Lhx3在人類的垂體和神經(jīng)系統(tǒng)中均有表達(dá)，臨床研究發(fā)現(xiàn)Lhx3與先天性聯(lián)合垂體激素缺乏癥，頸椎僵硬，智力缺陷，先天性神經(jīng)性聽力損失，促腎上腺皮質(zhì)激素不足和垂體低密度病變相關(guān)。臨床上在病人中發(fā)現(xiàn)了LHX3的數(shù)十個突變，主要是單堿基突變造成的錯義突變或無義突變，以及由剪接位點或片段缺失產(chǎn)生的突變。同時在小鼠中發(fā)現(xiàn)Pou4f3缺失小鼠Lhx3陽性細(xì)胞表達(dá)明顯減少，這表明他們之間存在

2、這相互作用關(guān)系，而Pou4f3在聽力系統(tǒng)已被證明有著重要作用。而Lhx3在聽覺系統(tǒng)中的作用及機(jī)制鮮少得到研究，基于此本課題以深入研究Lhx3功能的目的，鑒于Lhx3全敲除小鼠不能正常存活，我們構(gòu)建了Lhx3GFP報告小鼠和Lhx3loxp小鼠，并利用Cre-loxp系統(tǒng)實現(xiàn)了Lhx3的條件性敲除。通過常用的PCR技術(shù)和免疫熒光技術(shù)等常用生物學(xué)技術(shù)，在小鼠視網(wǎng)膜，脊椎和內(nèi)耳組織中進(jìn)行了LHX3和GFP的表達(dá)情況分析。通過P9，P15和P3

3、0三個時期視網(wǎng)膜中GFP和LHX3蛋白的共表達(dá)分析表明GFP蛋白與LHX3蛋白共同表達(dá)在雙極細(xì)胞中;通過E13.5到E17.5五個時期脊椎中GFP和LHX3蛋白的共表達(dá)分析表明GFP蛋白與LHX3蛋白共同表達(dá)在運動神經(jīng)元細(xì)胞中;通過E14.5到P0五個時期內(nèi)耳中GFP和LHX3蛋白的共表達(dá)分析表明GFP蛋白與LHX3蛋白共同表達(dá)在耳蝸和前庭毛細(xì)胞中。綜上我們發(fā)現(xiàn)GFP和LHX3蛋白在時空上具有相同的表達(dá)模式，因此成功構(gòu)建了Lhx3GFP