不同條件下小鼠子宮內(nèi)膜雌激素受體及HOXA10基因表達(dá)的研究.pdf

1、在正常生殖發(fā)育過(guò)程中,胚胎著床是決定妊娠成功的關(guān)鍵。而胚胎著床是一個(gè)復(fù)雜的生理過(guò)程,它取決于容受狀態(tài)的子宮內(nèi)膜和具有侵入性胚胎的同步發(fā)育。子宮內(nèi)膜容受性變化在胚胎著床過(guò)程中起到關(guān)鍵性作用。其中,雌激素受體(Estrogen Receptor,ER)和HOXA-10基因在調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜容受性方面起到重要作用。雌激素通過(guò)其受體調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜的容受性,HOXA-10基因在生殖與胚胎著床、發(fā)育等方面有重要作用。與自然妊娠相比,體外受精-胚胎移植(I

2、VF-ET)過(guò)程中存在多種因素的影響,同時(shí),子宮內(nèi)膜容受性在形成過(guò)程中受多種細(xì)胞因子、蛋白分子和基因的調(diào)控,這些特定調(diào)控因子在子宮內(nèi)膜發(fā)育分化過(guò)程中呈現(xiàn)較為顯著的時(shí)空表達(dá)特征,對(duì)內(nèi)膜容受性形成有重要作用。
　　本研究從ER分布的角度,利用免疫組化法檢測(cè)了不同條件處理的小鼠雌激素受體在小鼠發(fā)情周期子宮內(nèi)膜中的表達(dá)規(guī)律,探討不同時(shí)期ER受體在小鼠子宮內(nèi)膜上的分布表達(dá)是否存在有差異,結(jié)合分析ER的相應(yīng)分布與胚胎在子宮著床的窗口期是否一致

3、,探討ER對(duì)小鼠子宮窗口期著床和子宮內(nèi)膜容受性變化的調(diào)節(jié)作用。同時(shí),采用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR(Real-time qPCR, RT-qPCR)法分別檢測(cè)不同處理?xiàng)l件下各組小鼠子宮內(nèi)膜上HOXA-10基因表達(dá),觀察在人工注射超排激素、有無(wú)胚胎存在等因素下對(duì)HOXA-10基因表達(dá)的影響,進(jìn)而探討這些因素對(duì)子宮內(nèi)膜容受性的作用。為探討雌激素對(duì)小鼠子宮容受性的影響,實(shí)現(xiàn)主動(dòng)干預(yù)子宮內(nèi)膜容受性、提高IVF-ET的成功率。本研究利用免疫組織化學(xué)法檢

4、測(cè)了ER在小鼠發(fā)情周期子宮內(nèi)膜中的表達(dá)規(guī)律。將36只同日齡雌鼠,根據(jù)處理方式的不同隨機(jī)分為3組:自然發(fā)情受孕組、自然發(fā)情假孕組(對(duì)照組)和超數(shù)排卵組,3組小鼠在見(jiàn)栓后第2、4、6、8天分別取子宮樣,采用免疫組織化學(xué)法,對(duì)不同處理組小鼠子宮內(nèi)膜雌激素受體不同時(shí)期的表達(dá)進(jìn)行定位和半定量研究,觀察小鼠子宮內(nèi)膜中ER的分布變化情況。免疫組化法檢測(cè)結(jié)果顯示,自然發(fā)情受孕組、自然發(fā)情假孕組(對(duì)照組)和超數(shù)排卵組小鼠在見(jiàn)栓后第2天,子宮內(nèi)膜上ER表達(dá)

5、量3組之間差異不顯著(P>0.05);之后的第4、6、8天,超數(shù)排卵組雌激素受體表達(dá)量顯著高于其他2組(P<0.05);自然發(fā)情受孕組小鼠子宮內(nèi)膜中ER的表達(dá)在第4、6天時(shí)顯著高于自然發(fā)情假孕組(P<0.05),在第8天時(shí),自然發(fā)情受孕組小鼠子宮內(nèi)膜中的ER陽(yáng)性率與自然發(fā)情假孕組差異不顯著(P>0.05)。與自然發(fā)情受孕組相比,自然發(fā)情假孕組和超數(shù)排卵組小鼠子宮內(nèi)膜容受性下降,窗口期開(kāi)放延遲,而自然發(fā)情假孕組和超數(shù)排卵組差異不明顯(P>

6、0.05)。
　　本文通過(guò)測(cè)定在自然發(fā)情受孕組和超數(shù)排卵組中小鼠子宮HOXA-10基因表達(dá)量的不同,探討在人工注射超排激素、有無(wú)胚胎存在等因素下對(duì)HOXA-10基因表達(dá)的影響。將生長(zhǎng)發(fā)育均勻、一致性較好的實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分成3組:自然發(fā)情受孕組、自然發(fā)情假孕組(對(duì)照組)和超數(shù)排卵組,3組小鼠在見(jiàn)栓后第2、4、6、8天分別取其子宮樣,采用SYBR Green I RT-qPCR檢測(cè)方法,分別對(duì)3組不同處理?xiàng)l件下小鼠子宮內(nèi)膜上HOXA-1

7、0基因表達(dá)量的變化情況進(jìn)行檢測(cè),并進(jìn)行兩組間的比較分析。熒光定量PCR法檢測(cè)結(jié)果顯示,HOXA-10基因在超數(shù)排卵組和妊娠組小鼠的子宮內(nèi)膜上均有表達(dá),但兩組在表達(dá)時(shí)間和表達(dá)量上存在差異。自然發(fā)情受孕組和超數(shù)排卵組的小鼠,在發(fā)情周期子宮內(nèi)膜HOXA-10基因表達(dá)均呈陽(yáng)性,在妊娠第2天以后表達(dá)強(qiáng)度呈現(xiàn)增加趨勢(shì),第6天以后逐漸下降;與自然發(fā)情假孕組小鼠比較,自然發(fā)情受孕組和超數(shù)排卵組小鼠子宮內(nèi)膜HOXA-10基因表達(dá)強(qiáng)度均有所增加,但增加幅度