子宮內(nèi)膜雌激素受體a基因多態(tài)性及表達(dá)與原因不明月經(jīng)過(guò)少的關(guān)系研究.pdf

1、每周期總經(jīng)量少于30毫升，稱為月經(jīng)過(guò)少，是婦科常見癥狀。臨床上導(dǎo)致月經(jīng)過(guò)少的原因多為①子宮內(nèi)膜損傷，②雌激素水平下降，③先天性子宮發(fā)育不良等。但我們對(duì)月經(jīng)過(guò)少患者行宮腔鏡檢查，發(fā)現(xiàn)不少患者的子宮內(nèi)膜光滑菲薄，表現(xiàn)為生長(zhǎng)發(fā)育不良。與傳統(tǒng)的子宮內(nèi)膜損傷、疤痕學(xué)說(shuō)不吻合。檢測(cè)性激素水平在正常范圍，性激素替代治療無(wú)效，我們稱之為原因不明月經(jīng)過(guò)少。這類患者常因孕卵不易在子宮內(nèi)膜種植，導(dǎo)致反復(fù)流產(chǎn)、不孕。用輔助生殖技術(shù)的成功率極低，即使妊娠成功，也

2、極易流產(chǎn)，嚴(yán)重影響了患者的身心健康。對(duì)此類患者的治療，已成為目前臨床上十分棘手的問(wèn)題。 雌激素是調(diào)節(jié)月經(jīng)的主要激素，雌激素主要通過(guò)與雌激素受體結(jié)合而發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。作用體現(xiàn)在：一方面促進(jìn)子宮內(nèi)膜血管的周期性重建；另一方面促進(jìn)子宮內(nèi)膜的增生修復(fù)。原因不明月經(jīng)過(guò)少病人雌激素水平正常，是否雌激素受體環(huán)節(jié)出現(xiàn)障礙?我們前期以免疫組化法檢測(cè)子宮內(nèi)膜雌激素受體(estrogen receptor，ER)，發(fā)現(xiàn)原因不明月經(jīng)過(guò)少患者ER表達(dá)較

3、月經(jīng)量正常婦女者明顯減少。 ER分ERa和ERβ兩個(gè)亞型。在ERa基因上游有多種多態(tài)性位點(diǎn)存在，其中PvuⅡ和XbaⅠ2個(gè)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性的確切酶切位點(diǎn)已被確定，其位于1號(hào)內(nèi)含子，1號(hào)內(nèi)含子含有增強(qiáng)子、啟動(dòng)子等重要序列，其中發(fā)生的點(diǎn)突變有可能影響到ERa的表達(dá)與功能。而且ERa基因上游1Kb處存在T(thymine)，A(adenine)重復(fù)序列，它屬于基因的調(diào)控區(qū)，對(duì)基因表達(dá)起調(diào)控作用。Nilsson M認(rèn)為ER基因多態(tài)性

4、(gene polymorphismss)可能導(dǎo)致基因在轉(zhuǎn)錄、翻譯水平失調(diào)，導(dǎo)致ERa表達(dá)、功能異常。目前對(duì)雌激素受體基因多態(tài)性與婦科激素依賴性疾病相關(guān)性的研究較為普遍，如：習(xí)慣性流產(chǎn)，卵巢功能障礙，子宮內(nèi)膜異位癥，子宮內(nèi)膜癌等。但國(guó)內(nèi)外尚無(wú)雌激素受體基因多態(tài)性與月經(jīng)過(guò)少關(guān)系的研究報(bào)道。本研究擬從原因不明月經(jīng)過(guò)少患者ERa基因多態(tài)性及其表達(dá)，探討原因不明月經(jīng)過(guò)少的發(fā)病機(jī)制，為進(jìn)一步深入研究和治療提供理論依據(jù)。 第一部分雌激素受體

5、a基因PvaⅡ、XbaⅠ多態(tài)性與原因不明經(jīng)過(guò)少的關(guān)系 目的：探討重慶地區(qū)雌激素受體a基因PvuⅡ、XbaⅠ多態(tài)性與原因不明月經(jīng)過(guò)少的關(guān)系。 方法：選擇重慶地區(qū)100名原因不明月經(jīng)過(guò)少患者為實(shí)驗(yàn)組，100名月經(jīng)正常者作為對(duì)照組。應(yīng)用PCR-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-restriction fragment length polymorphisms，PCR-RFLP)的方法分析ERa基因1號(hào)內(nèi)含子Pvu Ⅱ、Xba Ⅰ多

6、態(tài)性，觀察ERa基因多態(tài)性在實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中的分布，分析各基因型、等位基因型及單倍體型特征，比較ERa基因各基因型與年齡、人流次數(shù)等指標(biāo)的關(guān)系。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組ERa基因Pvu Ⅱ基因型PP，Pp，pp頻率與對(duì)照組相比差異有顯著性(x<'2>=14.915，P=0.001)。P基因型頻率實(shí)驗(yàn)組為47.5％，對(duì)照組為30.5％，OR值：2.062(95％CI=1.369～3.105)，P=0.001；X基因型頻率實(shí)驗(yàn)組為20.5％，

7、對(duì)照組為30.5％，OR值：0.588(95％CI=0.372～0.928)，P=0.022。PvuⅡ和XbaⅠ限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性在兩組中均呈多態(tài)性分布。實(shí)驗(yàn)組Ppxx基因型構(gòu)成比(36％)高于對(duì)照組(15％)，而ppXx、ppxx基因型構(gòu)成比(4％、19％)低于對(duì)照組(20％、29％)。原因不明月經(jīng)過(guò)少患者ERa基因不同基因型與年齡的比較，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而與人流次數(shù)的比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：ERa基因多態(tài)性與原因

8、不明月經(jīng)過(guò)少有關(guān)，P等位基因可能是其危險(xiǎn)因素：X等位基因可能是其保護(hù)因素。Ppxx基因型可能是原因不明月經(jīng)過(guò)少潛在危險(xiǎn)因素。原因不明月經(jīng)過(guò)少患者ERa基因的Pvu Ⅱ基因型及XbaⅠ基因型與年齡無(wú)相關(guān)，而與人流次數(shù)相關(guān)。 第二部分雌激素受體a基因TA重復(fù)序列多態(tài)性與原因不明月經(jīng)過(guò)少的關(guān)系 目的：研究雌激素受體a基因TA二核苷酸重復(fù)序列多態(tài)性與原因不明月經(jīng)過(guò)少的關(guān)系。 方法：選擇重慶地區(qū)的100名原因不明月經(jīng)過(guò)少患

9、者為實(shí)驗(yàn)組，100名月經(jīng)正常者作為對(duì)照組。對(duì)雌激素受體基因上游的高變區(qū)二核苷酸(TA)重復(fù)序列進(jìn)行純化、克隆和序列分析，研究TA重復(fù)序列的多態(tài)性在實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中的分布情況，將TA重復(fù)序列多態(tài)性與年齡、人流次數(shù)等指標(biāo)進(jìn)行比較。 結(jié)果：共分離出7種等位基因，其(TA)n重復(fù)數(shù)目為11至17，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的(TA)n重復(fù)序列等位基因的分布頻率不同，差異有顯著性(x<'2>=27.717，P<0.001)。再用Fisher’s確切概

10、率法比較兩組各等位基因的分布頻率：對(duì)照組中最常見的等位基因?yàn)門A14；實(shí)驗(yàn)組TA13等位基因頻率(33％)高于對(duì)照組(12％)，差異有顯著性(P=0.001)，OR=3.612(1.735～7.519)；TA15等位基因頻率(13％)低于對(duì)照組(31％)，差異有顯著性(P=0.003)，OR=0.333(0.162～0.684)。原因不明月經(jīng)過(guò)少患者ERa基因不同TA等位基因型與年齡和人流次數(shù)的差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：ERa

11、基因TA重復(fù)序列多態(tài)性與原因不明月經(jīng)過(guò)少有關(guān)；TA13等位基因可能是原因不明月經(jīng)過(guò)少的危險(xiǎn)因素；TA15等位基因可能是其保護(hù)因素。原因不明月經(jīng)過(guò)少ERa基因的不同TA等位基因型與患者的年齡無(wú)相關(guān)；與人流次數(shù)亦無(wú)相關(guān)，可能是TA等位基因型較多，而樣本量相對(duì)較少之故。 第三部分原因不明月經(jīng)過(guò)少子宮內(nèi)膜雌激素受體a表達(dá) 目的：通過(guò)比較ERa在原因不明月經(jīng)過(guò)少和月經(jīng)量正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)，探討ERa在原因不明月經(jīng)過(guò)少發(fā)生、發(fā)

12、展中的意義。從而了解原因不明月經(jīng)過(guò)少的發(fā)病機(jī)制及影響預(yù)后的因素，為臨床早預(yù)防、早診斷、早治療并改善預(yù)后提供理論依據(jù)。 方法：從上述兩組人群中分別選取原因不明月經(jīng)過(guò)少子宮內(nèi)膜組織40例，月經(jīng)量正常子宮內(nèi)膜組織40例，標(biāo)本保存于液氮或-70℃低溫冰箱。通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄一多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)，半定量檢測(cè)雌激素受體amRNA在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)。從凍存組織中提取蛋白質(zhì)，運(yùn)用Western印跡法半定量檢測(cè)雌激素受體a蛋白在子宮內(nèi)膜組織

13、中的表達(dá)。分析實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組ERamRNA及蛋白的表達(dá)情況，將年齡、人流次數(shù)、ERa基因的各基因型、等位基因型與子宮內(nèi)膜ERamRNA及蛋白的表達(dá)之間分別進(jìn)行比較。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組ERamRNA表達(dá)量為0.8879±0.2741，對(duì)照組為1.2630±0.3532，實(shí)驗(yàn)組ERa-mRNA比對(duì)照組表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-2.653，P=0.016)。實(shí)驗(yàn)組ERa蛋白質(zhì)表達(dá)量為600.8100±212.8439，對(duì)照組為79

14、7.2750±85.3860，實(shí)驗(yàn)組ERa-蛋白質(zhì)比對(duì)照組表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-2.709，P=0.014)。兩組人群不同年齡ERa表達(dá)比較，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組不同人流次數(shù)ERa表達(dá)的比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.985，P=0.019)。人流≥3次與2次人流、1次人流均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P分別為0.035、0.007)。實(shí)驗(yàn)組PP基因型ERa-mRNA表達(dá)(0.7843±0.1690)比pp基因型(0.9857±0.1

15、345)表達(dá)下降(P=0.039)，實(shí)驗(yàn)組PP基因型ERa-蛋白質(zhì)表達(dá)(544.0170±118.9401)比pp基因型表達(dá)(672.5840±150.1515)下降(P=0.035)。實(shí)驗(yàn)組xx基因型ERa-mRNA表達(dá)(0.7629±0.1727)比XX基因型表達(dá)(0.9671±0.1531)下降(P=0.028)，實(shí)驗(yàn)組XX基因型ERa-蛋白質(zhì)表達(dá)(540.0580±123.5944)比XX基因型表達(dá)(659.9980±148.8

16、788)下降(P=0.046)。兩組TA重復(fù)序列基因型ERa表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為-0.5.8、-0.866;P值分別為0.618、0.398)。 結(jié)論：原因不明月經(jīng)過(guò)少患者ERamRNA及蛋白在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)低于月經(jīng)量正常子宮內(nèi)膜，其可能與月經(jīng)量減少有關(guān)。原因不明月經(jīng)過(guò)少患者子宮內(nèi)膜ERa的表達(dá)與年齡無(wú)關(guān)，而與人流次數(shù)有關(guān)，人流次數(shù)多，患病風(fēng)險(xiǎn)增高。在子宮內(nèi)膜中，ERaPP基因型比pp基因型的ERa表達(dá)下降、xx