單細(xì)胞酶?jìng)鞲衅鞯闹苽浼皯?yīng)用.pdf

1、本論文用研制的單細(xì)胞酶?jìng)鞲衅鲗?duì)單個(gè)嗜酸性粒細(xì)胞的釋放物-H<,2>O<,2>進(jìn)行了研究。論文分為兩章：第一章．單細(xì)胞酶?jìng)鞲衅鞯闹苽?、表征及?jiǎn)單應(yīng)用。第二章 單細(xì)胞酶?jìng)鞲衅饔糜趩蝹€(gè)嗜酸性粒細(xì)胞受PMA刺激所釋放的H<,2>O<,2>的定量檢測(cè)。 第一章利用光刻和化學(xué)腐蝕的技術(shù)首先在玻璃平板上加工一個(gè)納升的微池陣列，用推片法將單個(gè)中性粒細(xì)胞置入微池中，并用變性膠原固定，然后用毛地黃皂苷(Dig)進(jìn)行細(xì)胞蝕孔，最后微池中加入支持電解質(zhì)

2、并插入一支復(fù)合微電極，制成單細(xì)胞酶?jìng)鞲衅鳌?fù)合微電極由金(Au)圓盤工作電極和Ag/AgCl微參比電極組成，其中Au圓盤電極的直徑為20 μm左右，Ag/AgCl參比電極的直徑為100μm左右。該復(fù)合電極是將兩支電極放入一支θ管內(nèi)制成的，其尖端不到200μm，以適合微池內(nèi)檢測(cè)微量物質(zhì)的需要。單細(xì)胞傳感器對(duì)H<,2>O<,2>的測(cè)定原理是：利用傳感器上中性粒細(xì)胞中所含的過氧化物酶(PO)能夠催化過氧化氫(H<,2>O<,2>)和氫醌(H<

3、,2>Q)的化學(xué)反應(yīng)，生成酶促反應(yīng)的產(chǎn)物一苯醌(BQ)和水，利用微電極對(duì)電活性產(chǎn)物BQ的伏安檢測(cè)，最終實(shí)現(xiàn)對(duì)H<,2>O<,2>的測(cè)定。制作好的單細(xì)胞酶?jìng)鞲衅饔糜贖<,2>O<,2>的測(cè)定，重現(xiàn)性良好，結(jié)果滿意。本章有兩個(gè)難點(diǎn)，一是在復(fù)合電極制作過程中要將工作電極和微參比電極完好地插入θ管內(nèi)，兩者互不接觸，θ管尖端封膠要均勻，不能碰壞電極，能有效防止溶液進(jìn)入θ管內(nèi)部；二是利用光刻和化學(xué)腐蝕法制備微池陣列，并把單個(gè)中性粒細(xì)胞固定在微池底部

4、。 第二章建立了單細(xì)胞酶?jìng)鞲衅鞫繖z測(cè)單個(gè)嗜酸性粒細(xì)胞的釋放物的新方法。通過推片法將人的單個(gè)嗜酸性粒細(xì)胞轉(zhuǎn)移到已裝配有單細(xì)胞酶?jìng)鞲衅鞯奈⒊刂?，用自制的納升加樣器加入含有化學(xué)物質(zhì)佛波酯(PMA)的反應(yīng)液對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞進(jìn)行刺激，刺激時(shí)間120分鐘，使其釋放出H<,2>O<,2>，用單細(xì)胞酶?jìng)鞲衅鲗?duì)釋放物-H<,2>O<,2>進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定的原理是：受PMA的刺激后，嗜酸性粒細(xì)胞能夠釋放出活性氧物質(zhì)，其穩(wěn)定存在形式是H<,2>O