免標(biāo)記生物傳感器的制備與應(yīng)用.pdf

1、本論文主要研究工作如下:
　　1.研制了一種基于介孔二氧化硅負(fù)載納米金和適體DNA的免標(biāo)記電化學(xué)傳感器，用于檢測凝血酶(thrombin)的含量。實(shí)驗(yàn)中，我們先用三甲基氯硅烷(TMCS)封閉介孔二氧化硅(MPS)前驅(qū)體外壁硅羥基的活性，煅燒除去模板劑后，再用氨基丙基三乙氧基硅烷(APTS)與孔道內(nèi)壁硅羥基反應(yīng)，接枝氨基，得到內(nèi)壁修飾氨基的介孔硅材料(APTS-TMCS-MPS)。將介孔硅材料加入到氯金酸和硼氫化鈉溶液中，由于介孔內(nèi)

2、壁氨基的影響，在孔內(nèi)原位合成了金納米粒子（GNPs），組裝到介孔孔道內(nèi)，得到了GNPs/APTS-TMCS-MPS。巰基修飾的適體DNA與GNPs/APTS-TMCS-MPS的金納米粒子通過金硫鍵相結(jié)合，從而將DNA組裝到介孔材料內(nèi)部，制得免標(biāo)記探針(DNA/GNPs/APTS-TMCS-MPS)。將探針修飾在玻碳電極(GCE)表面，制得免標(biāo)記DNA電化學(xué)傳感器。將該傳感器與含有凝血酶的待測液溫育反應(yīng)后，凝血酶和固定在介孔內(nèi)的適體DNA

3、發(fā)生特異性反應(yīng)，形成空間位阻較大的適體DNA和凝血酶的復(fù)合物，從而增加了介孔孔道內(nèi)的空間位阻，導(dǎo)致電流信號(hào)降低。根據(jù)電流信號(hào)的降低，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)凝血酶的免標(biāo)記測定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，APTS-TMCS-MPS孔內(nèi)的GNPs，可以提高孔道內(nèi)電子的傳遞效率。在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，該DNA電化學(xué)傳感器對(duì)凝血酶的線性檢測范圍是1.0×10-8-1.0×10-6molL-1，檢測限是7.5×10-9molL-1(3σ)。
　　2.研制了一種基于Lu

4、minol-H2O2-HRP和CdSe化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移體系的免標(biāo)記化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，并用于檢測腫瘤標(biāo)志物甲胎蛋白(AFP)的含量。首先水相合成帶羧基的CdSe量子點(diǎn)，通過CdSe的羧基基團(tuán)與APTS-TMCS-MPS的氨基共價(jià)結(jié)合，使CdSe組裝到介孔孔道內(nèi)，形成CdSe/APTS-TMCS-MPS，然后將甲胎蛋白單克隆抗體(anti-AFP)固定在CdSe/APTS-TMCS-MPS介孔內(nèi)部，制得免標(biāo)記免疫探針(anti-AFP

5、/CdSe/APTS-TMCS-MPS)。依次將辣根過氧化物酶(HRP)、過氧化氫(H2O2)和魯米諾(Luminol)溶液加入到該免疫探針的懸濁液中，將該免疫探針的混合溶液與含有AFP的待測液溫育反應(yīng)后，AFP和固定在介孔內(nèi)的anti-AFP發(fā)生特異性反應(yīng)，形成空間位阻較大的免疫復(fù)合物，覆蓋了CdSe的部分表面，從而削弱了孔道內(nèi)部Luminol-H2O2-HRP和CdSe體系的共振能量轉(zhuǎn)移作用，導(dǎo)致化學(xué)發(fā)光信號(hào)的降低。根據(jù)化學(xué)發(fā)光信號(hào)