鵝脫氧膽酸：一個潛在的結直腸癌生物標志物及其作為結直腸癌潛在治療靶點的研究.pdf

1、目的：
　　結直腸癌是胃腸道中常見的惡性腫瘤，是我國第三大最常見腫瘤，也是第五大癌癥相關死亡原因，其發(fā)病原因很復雜。在我們課題組前期的研究中，通過代謝譜分析，發(fā)現(xiàn)結直腸癌代謝物中有一些物質含量發(fā)生了異常變化，或上升或降低，鵝脫氧膽酸（CDCA）就是其中一種。本研究的主要目的是為了探索鵝脫氧膽酸對結直腸癌細胞功能的影響，從而為結直腸癌的治療提供一個新思路。
　　方法：
　　1、通過代謝組學技術，對健康對照組、結直腸癌良性

2、組和結直腸癌惡性組中各種代謝物的含量進行分析。
　　2、用CCK-8法檢測不同CDCA濃度下活細胞的OD值，通過改良蔻式法算出CDCA對結直腸上皮正常細胞株FHC、結直腸癌細胞株SW480和DLD-1的半抑制濃度，選出合適的作用濃度，進行后續(xù)試驗。
　　3、根據(jù)篩選出的CDCA濃度，進行腫瘤細胞生物學特性實驗，包括克隆形成實驗、劃痕實驗和transwell小室遷移實驗。
　　4、進行WB實驗，檢測相關凋亡蛋白的表達量。

3、
　　5、細胞流式實驗，檢測不同藥物濃度下細胞的凋亡情況。
　　6、線粒體功能實驗，檢測不同CDCA濃度對線粒體功能的影響，包括MMP、ROS和ATP的影響。
　　結果：
　　1、根據(jù)代謝譜結果，分析發(fā)現(xiàn)鵝脫氧膽酸的含量在健康對照組，結直腸癌良性組和結直腸癌惡性組中依次降低。
　　2、根據(jù)CCK-8篩選結果，計算得到正常結直腸細胞FHC的半抑制濃度為185μM，兩株結直腸癌細胞系中，SW480細胞株的半抑制

4、濃度為145μM，DLD-1細胞株的半抑制濃度為71μM，選定SW480細胞株的CDCA工作濃度為0μM、150μM、160μM和180μM；DLD-1細胞株的工作濃度為0μM、80μM、130μM和180μM。
　　3、腫瘤細胞生物學特性實驗中，DLD-1細胞株的克隆形成能力隨著CDCA濃度的增加而降低，劃痕閉合速率隨著CDCA濃度的增加而減慢；兩株細胞的transwell小室遷移遷移能力也隨著藥物濃度增加而降低。
　　4

5、、WB實驗中，兩株細胞系的凋亡蛋白Bax表達量隨著藥物濃度增加而上升，抗凋亡蛋白Bcl-xl表達量隨著藥物濃度增加而降低。
　　5、進行流式細胞術檢測，發(fā)現(xiàn)兩株細胞的凋亡細胞百分比隨著藥物濃度的增加而上升。
　　6、線粒體功能實驗中，線粒體膜電位隨著CDCA濃度升高而降低，線粒體ROS含量隨著CDCA濃度上升而下降，而ATP產生量隨著CDCA濃度上升而上升。
　　結論：
　　根據(jù)代謝譜結果，得到鵝脫氧膽酸在血清中

6、的含量，在健康對照組，結直腸癌良性組和結直腸癌惡性組中依次降低，據(jù)此我們推測鵝脫氧膽酸的代謝異常可能跟結直腸癌的發(fā)生發(fā)展相關，因此鵝脫氧膽酸是一種潛在的結直腸癌生物標志物。根據(jù)代謝譜的結果，我們通過細胞水平，對鵝脫氧膽酸的作用進行了更深入的研究，包括腫瘤細胞生物學特性實驗和細胞凋亡的檢測，以及線粒體功能檢測，發(fā)現(xiàn)鵝脫氧膽酸對結直腸癌細胞系的增殖，有明顯的抑制作用，對細胞遷移也有抑制作用。根據(jù)細胞凋亡蛋白表達量的檢測和流式細胞術結果，發(fā)現(xiàn)