毛細(xì)管電泳高靈敏度分析方法的研究與應(yīng)用.pdf

1、研究蛋白質(zhì)與藥物分子的相互作用具有重要的理論和實際意義，常用的方法有熒光光譜法、紫外．可見光譜法、圓二色譜法、紅外光譜法以及分子模擬等。激光散射技術(shù)在生物大分子溶液性質(zhì)研究方面的應(yīng)用越來越廣泛，它可以提供大分子的重均分子量、均方旋轉(zhuǎn)半徑、第二維里系數(shù)、平動擴(kuò)散系數(shù)及平均流體力學(xué)半徑等重要參數(shù)，這對于研究生物大分子的溶液狀態(tài)行為特別適用。毛細(xì)管電泳具有分離模式多、分離效率高、分析速度快、試劑和樣品用量少、易于調(diào)控等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)在在生物、化學(xué)

2、、醫(yī)藥、環(huán)保、食品等領(lǐng)域中有了廣泛的應(yīng)用。激光誘導(dǎo)熒光檢測器具有很高的靈敏度，可以適應(yīng)毛細(xì)管電泳不同模式的檢測，已成為藥物分析和生命科學(xué)領(lǐng)域的一種重要的分析檢測技術(shù)。因此，本文用毛細(xì)管電泳-激光誘導(dǎo)熒光檢測和激光散射法進(jìn)行研究并提出了分離分析的新體系。 該論文在綜述前人工作的基礎(chǔ)上，開展了如下未見文獻(xiàn)報道的創(chuàng)新性的研究工作： (1) 使用靈敏的衍生試劑對麻黃堿和偽麻黃堿在水體系中的衍生反應(yīng)條件進(jìn)行了系統(tǒng)研究，建立了微乳電

3、動色譜-激光誘導(dǎo)熒光檢測法和膠束電動色譜－激光誘導(dǎo)熒光檢測法測定麻黃堿和偽麻黃堿的靈敏分析新方法，與以前的報道相比，靈敏度和分析時間均有很大改善； (2) 使用熒光素鈉作為背景熒光試劑，建立了同時分析測定六種黃酮類化合物(秦皮甲素、秦皮乙素、異秦皮定、染料木素、柚皮苷和槐角苷)的毛細(xì)管區(qū)帶電泳－間接激光誘導(dǎo)熒光檢測新方法，擴(kuò)大了激光誘導(dǎo)熒光檢測的應(yīng)用范圍，對難衍生化合物的分離分析提供了一種新思路和新途徑； (3) 以熒光

4、素鈉作為背景熒光試劑，建立了一種用于同時測定食品(蘑菇、玉米和大豆)提取DNA中的腺嘌呤和鳥嘌呤含量的膠束電動色譜－間接激光誘導(dǎo)熒光檢測新方法； (4) 用動態(tài)和靜態(tài)激光散射法研究了模擬生理條件下人血清白蛋白與氨比西林鈉鹽相互作用所形成的復(fù)合物，為藥物分子與蛋白質(zhì)的相互作用、藥代動力學(xué)等的研究提供了一種新思路。 論文共分為六章第一章對毛細(xì)管電泳-激光誘導(dǎo)熒光檢測技術(shù)的原理及其應(yīng)用研究進(jìn)行了綜述。主要是近年來通過化學(xué)反應(yīng)衍

5、生標(biāo)記的直接激光誘導(dǎo)熒光檢測的應(yīng)用，及間接激光誘導(dǎo)熒光檢測的原理和應(yīng)用進(jìn)展。 第二章以5-(4,6-三氯-s-三嗪基-2-氨基)熒光素作為衍生試劑，建立了一種膠束電動色譜-激光誘導(dǎo)熒光檢測法分析麻黃堿和偽麻黃堿的新方法。在最佳條件下，8分鐘內(nèi)可實現(xiàn)基線分離，靈敏度高，重現(xiàn)性好，與其他色譜法相比，檢測限至少提高了10<'3>倍。 第三章以 5-(4，6-三氯-s-三嗪基-2-氨基) 熒光素為衍生試劑，建立了一種微乳電動色譜

6、-激光誘導(dǎo)熒光檢測法分析麻黃堿和偽麻黃堿的新方法。在最優(yōu)條件下，分析物可在 11 分鐘內(nèi)實現(xiàn)基線分離。分析物的峰高與濃度之間存在較好的線性關(guān)系，麻黃堿和偽麻黃堿的檢測限分別為 2.39×10<'-3>和3.85×10<'-3>μg l<'-1>。將該法成功用于麻黃及其制劑中兩種生物堿的分析。 第四章建立了一種毛細(xì)管區(qū)帶電泳－間接激光誘導(dǎo)熒光檢測法同時測定6種黃酮類化合物(秦皮甲素、秦皮乙素、異秦皮定、染料木素、柚皮苷和槐角苷)的

7、新方法，擴(kuò)大了LIF檢測的應(yīng)用范圍。將該方法用于含黃酮類化合物的植物分析，得到了 94.7-102.1％的回收率。 第五章建立了一種用于同時測定DNA中腺嘌呤和鳥嘌呤含量的膠束電動色譜－間接激光誘導(dǎo)熒光檢測新方法。該方法簡單、快速，可用于食品樣品DNA 提取物中兩種嘌呤堿的分析，得到的回收率范圍在85.3-110.2％之間。 第六章用動態(tài)和靜態(tài)激光散射法研究了在模擬生理條件下人血清白蛋白與氨比西林鈉鹽相互作用所形成的復(fù)合