新型凝膠蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移裝置的研究初探.pdf

1、隨著包括人類(lèi)在內(nèi)的幾十種生物體基因組測(cè)序的完成，生命科學(xué)的研究重點(diǎn)轉(zhuǎn)移到了后基因組時(shí)代的重要組成部分-蛋白質(zhì)組學(xué)。目前在蛋白質(zhì)組研究中將應(yīng)用最多的分離技術(shù)-二維聚丙烯酰胺凝膠電泳(2D-PAGE)和日益普及的生物質(zhì)譜鑒定技術(shù)相連接是當(dāng)前蛋白質(zhì)組學(xué)研究的核心技術(shù)。一種較新的轉(zhuǎn)移技術(shù)是毛細(xì)管電泳轉(zhuǎn)移，相比其它連接技術(shù)此方法在轉(zhuǎn)移時(shí)間和轉(zhuǎn)移裝置的通用性上獲得很大的突破。 本論文建立了一種新型的凝膠蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移裝置，力求實(shí)現(xiàn)垂直方向上的蛋

2、白質(zhì)電提取和電排出轉(zhuǎn)移。在凝膠蛋白質(zhì)毛細(xì)管轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)上加入了兩處改動(dòng)：1．使用未涂層的熔融石英毛細(xì)管和添加了陽(yáng)離子表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨的緩沖液，產(chǎn)生反向電滲流；2．在毛細(xì)管與凝膠的接觸端引入一電極，形成三電極控制的凝膠蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移。通過(guò)實(shí)驗(yàn)室前期的工作及后續(xù)改進(jìn)實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證了改動(dòng)后的凝膠蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移是可行的，并對(duì)一些相關(guān)因素進(jìn)行了考察。在垂直蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移單元的研究中，通過(guò)預(yù)試驗(yàn)和以蛋白質(zhì)溶液及凝膠為轉(zhuǎn)移樣品的電轉(zhuǎn)移離線檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，

3、階段性的分別驗(yàn)證了反向電滲流對(duì)抗重力將下端溶液提升至上端槽的可行性、新裝置在轉(zhuǎn)移過(guò)程中的三電極可操作性以及自制的垂直毛細(xì)管電轉(zhuǎn)移裝置對(duì)凝膠中蛋白質(zhì)的電轉(zhuǎn)移可行性。 用毛細(xì)管電泳紫外檢測(cè)作為離線檢測(cè)手段來(lái)模擬質(zhì)譜，在檢測(cè)靈敏度較低的情況下，仍然取得了一定的初步研究成果。垂直方向上的電泳轉(zhuǎn)移大大縮短了從凝膠蛋白質(zhì)到后續(xù)檢測(cè)的連接時(shí)間；三電極的設(shè)計(jì)使得凝膠中蛋白質(zhì)的提取和之后的轉(zhuǎn)移排出更容易實(shí)現(xiàn)和控制；轉(zhuǎn)移單元制作簡(jiǎn)單，成本低廉，也是