環(huán)境中甾體化合物的熒光檢測方法的建立與應(yīng)用.pdf

1、睪丸酮叢毛單胞菌(Comamonas testosteroni，C．T．)中的3α-羥基類固醇脫氫酶/碳酰基還原酶(3α-HSD/CR)是降解環(huán)境中甾體類化合物的關(guān)鍵酶。本文通過同源整合的方法將綠色熒光蛋白(GFP)基因整合到C.T.菌的染色體DNA中的3α-HSD/CR基因下游，得到C.T-GFP突變菌株。該突變株GFP的表達強度與甾體化合物的含量在一定范圍內(nèi)成正相關(guān)。比較了CT-GFP細胞體系和非細胞體系在檢測甾體化合物時的差別，分

2、別探討了GFP的熒光強度與甾體化合物的濃度及作用時間關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)非細胞體系比細胞體系檢測系統(tǒng)靈敏度高，并且兩種生物檢測系統(tǒng)對雌二醇檢測靈敏度高于睪丸酮，且靈敏性達到fg級水平。利用非細胞體系檢測方法對吉林省主要水源進行了檢測分析，并與高效液相色譜法(HPLC)進行了對比，結(jié)果顯示該方法具有可行性，并且檢測的靈敏度高于高效液相方法6個數(shù)量級。本文所研究的熒光檢測系統(tǒng)具有快速、操作簡單、穩(wěn)定、敏感等特點，為食品安全及環(huán)境監(jiān)測提供新的技術(shù)方