UGT78D1在黃酮苷化合物合成中的應(yīng)用.pdf

1、黃酮類化合物，泛指二個(gè)苯環(huán)(A環(huán)和B環(huán))通過(guò)三個(gè)碳原子相互連接而成的一系列化合物的總稱，即具有C6-C3-C6結(jié)構(gòu)的一類化合物的總稱，是自然界廣泛存在的一大類有機(jī)化合物。對(duì)于天然黃酮化合物，糖基化是一種非常重要的結(jié)構(gòu)修飾方式，它可以改善黃酮化合物的理化性質(zhì)及其生理活性，與黃酮苷元相比，黃酮苷具有更好的水溶性、穩(wěn)定性以及生物利用度。糖基化的方法一般來(lái)說(shuō)有化學(xué)法與酶法兩種，與化學(xué)法相比，酶法的選擇性更好，條件也更溫和。
　　 UGT

2、78D1是在擬南芥中發(fā)現(xiàn)的一種黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶，其基因大小為1362bp，編碼453個(gè)氨基酸，據(jù)報(bào)道該酶可以催化Flavonol-3-O-L-rhamnose的生成，但對(duì)于其能否利用UDP-glucose作為底物并沒(méi)有系統(tǒng)的報(bào)道。本課題對(duì)UGT78D1的底物特異性進(jìn)行了系統(tǒng)研究。首先，將UGT78D1基因克隆于pET-21a質(zhì)粒中，通過(guò)原核表達(dá)，得到重組蛋白。然后，應(yīng)用重組蛋白以UDP-glucose作為糖供體、黃酮作為糖受體，對(duì)41種黃

3、酮進(jìn)行體外酶法糖基化篩選，通過(guò)HPLC對(duì)反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)，LC-MS，NMR等手段對(duì)其產(chǎn)物進(jìn)行表征，發(fā)現(xiàn)該酶能催化槲皮素、山奈酚、楊梅素、異鼠李素、漆黃素、花旗松素、二氫楊梅素生成3-O-glucose。然后，我們對(duì)該酶進(jìn)行了酶動(dòng)力學(xué)研究，根據(jù)雙曲線作圖法，測(cè)定其對(duì)于不同黃酮的Km值、最大反應(yīng)速度、轉(zhuǎn)化率等參數(shù)，發(fā)現(xiàn)其對(duì)于不同黃酮催化效率明顯不同。
　　 為了得到理想的反應(yīng)產(chǎn)率，我們對(duì)反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，包括反應(yīng)時(shí)間、酶量大小、離子