兩種海洋微藻多糖抑制腫瘤血管生成活性的研究.pdf

1、本文以米氏凱倫藻、小球藻兩種海洋微藻為材料，優(yōu)化了米氏凱倫藻多糖的制備工藝，經(jīng)乙醇分級(jí)沉淀獲得微藻多糖，并對(duì)微藻多糖進(jìn)行抑制腫瘤血管生成活性及在分子水平上研究其對(duì)相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　通過(guò)比較索氏提取法、超聲提取法、閃式破碎提取法、閃式破碎結(jié)合蛋白酶水解法對(duì)米氏凱倫藻多糖提取率的影響，選擇閃式破碎結(jié)合酶解方法提取多糖，優(yōu)選堿性蛋白酶進(jìn)行酶解，確定米氏凱倫藻多糖酶解較優(yōu)的提取條件為：酶解溫度40℃、酶解pH8.5、酶用量為藻粉重量的

2、2.5％、酶解時(shí)間為2h，在此條件下米氏凱倫藻多糖的提取率可達(dá)9.71%。30%、50%、80%乙醇分級(jí)沉淀依次獲得米氏凱倫藻多糖組分KPS1、KPS2、KPS3和小球藻多糖組分CPS1、CPS2、CPS3。
　　采用雞胚絨毛尿囊膜血管生成模型實(shí)驗(yàn)，對(duì)上述微藻多糖進(jìn)行活性篩選，篩選出KPS1、KPS2、CPS1、CPS2均具有抑制血管生成的潛在作用。
　　采用MTT法（四氮唑藍(lán)試驗(yàn)）測(cè)定發(fā)現(xiàn)，六種微藻多糖對(duì)正常狀態(tài)下人臍靜脈

3、內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)基本沒(méi)有毒性。10%的人肝癌細(xì)胞培養(yǎng)液能夠明顯促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，而米氏凱倫藻多糖和小球藻多糖能夠在一定程度上拮抗腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的誘導(dǎo)作用。
　　通過(guò)細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)（Wound Healing assay）發(fā)現(xiàn)10%人肝癌細(xì)胞培養(yǎng)液能夠明顯促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，米氏凱倫藻多糖中KPS1、KPS2能拮抗其誘導(dǎo)作用，一定濃度范圍內(nèi)其抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。小球藻多糖中CPS1、CP

4、S2對(duì)肝癌細(xì)胞誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移抑制作用較為突出，其中CPS2在5μg/mL-100μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的濃度梯度趨勢(shì)。
　　通過(guò)WesternBlot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，肝癌細(xì)胞誘導(dǎo)的人臍靜脈細(xì)胞MMP-9和VEGF相關(guān)蛋白表達(dá)量增高，米氏凱倫藻多糖KPS1在100μg/mL時(shí)對(duì)MMP-9的表達(dá)具有顯著的抑制作用（P＜0.05）推測(cè)米氏凱倫藻多糖可能是通過(guò)抑制內(nèi)皮細(xì)胞中MMP-9相關(guān)蛋白的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)其抑制腫瘤血管生成的活性。

5、米氏凱倫藻多糖KPS2、KPS3均有不同程度的抑制誘導(dǎo)其VEGF相關(guān)蛋白表達(dá)的增加，其中KPS2在濃度50μg/mL、100μg/mL中均有顯著抑制作用。
　　小球藻多糖并沒(méi)有明顯的抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中MMP-9相關(guān)蛋白的表達(dá)，推測(cè)小球藻多糖抑制腫瘤血管生成活性可能不是通過(guò)MMP-9因子相關(guān)蛋白的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。小球藻多糖均有不同程度的降低HUVECs中VEGF蛋白的表達(dá)，其中以CPS1和CPS3在濃度為100μg/mL下具有較為