后向光散射分析技術(shù)開發(fā)及其在生化分析中的應(yīng)用.pdf

1、共振光散射技術(shù)(RLS)自其建立以來(lái),因操作簡(jiǎn)便和靈敏度高已廣泛應(yīng)用于研究分子的聚集行為及生物大分子和藥物分析等領(lǐng)域,但存在選擇性差的缺點(diǎn).該文在普通RLS技術(shù)的基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)了后向光散射(Backward resonance light scattering,BRLS)信號(hào)檢測(cè)裝置,通過(guò)檢測(cè)后向的共振光散射信號(hào),實(shí)現(xiàn)了對(duì)生物大分子的高靈敏及高選擇性分析.在pH 3.50的酸性介質(zhì)中,萘鉻綠與蛋白質(zhì)發(fā)生靜電作用產(chǎn)生以342.0nm為特征峰

2、的共振光散射(RLS)增強(qiáng)光譜.在此波長(zhǎng)下,蛋白質(zhì)的濃度與增強(qiáng)共振光散射強(qiáng)度(△I<,RLS>)呈線性關(guān)系,據(jù)此建立了痕量蛋白質(zhì)的共振光散射分析法,方法成功地應(yīng)用于尿樣中總蛋白質(zhì)分析.在pH 2.90,離子強(qiáng)度為0.003 M時(shí),在陽(yáng)離子表面活性劑溴化十六烷基三甲銨(CTMAB)存在下,QT-蛋白質(zhì)相互作用產(chǎn)生的粒子富集在H<,2>O/CCl<,4>界面上時(shí),會(huì)在376nm產(chǎn)生BRLS特征峰,增強(qiáng)的BRLS信號(hào),與HSA和BSA濃度成正

3、比例關(guān)系,據(jù)此建立了靈敏測(cè)定蛋白質(zhì)的分析方法.在pH 3.00,鋁離子和水相中DNAs的結(jié)合能夠產(chǎn)生增強(qiáng)的共振光散射信號(hào),Al(Ⅲ)-DNAs這種二元復(fù)合物還可以結(jié)合CCl<,4>溶液中的tetraphenylporphyrin(TPP),形成新的三元復(fù)合物TPP-A1(Ⅲ)-DNAs并富集在界面上.該復(fù)合物469nm產(chǎn)生強(qiáng)烈增強(qiáng)的BRLS信號(hào),并且IBRLS正比于ctDNA和fsDNA的濃度,可用于靈敏的測(cè)定核酸,方法的檢出限在皮克級(jí)