共振光散射技術(shù)在生化分析與藥物分析中的研究及應(yīng)用.pdf

1、1993年P(guān)asternack等人首次使用普通熒光光度計,提出了共振光散射(Resonance light scattering, RLS)技術(shù),研究了卟啉分子的聚集,隨后因其實驗儀器簡單,快速,方法靈敏度高而倍受關(guān)注,己成為超分子化學(xué)、物理化學(xué)和分析化學(xué)領(lǐng)域中強有力的分析技術(shù)。
　　本工作的主要內(nèi)容是采用新興的共振光散射技術(shù)建立了八種新的生物大分子與藥物測定方法,并利用多種光譜與電鏡等手段探討了其作用機理。全文分為共振光散射技術(shù)

2、在生物大分子與藥物的分析研究兩個部分。
　　第一部分,在生物大分子分析研究方面
　　在生物大分子分析研究方面,我們利用共振光散射法對構(gòu)成生命必需的物質(zhì)蛋白質(zhì)和核酸進行了研究及分析應(yīng)用。
　　第1章鄰硝基苯基熒光酮-月桂酰谷氨酸鈉-蛋白質(zhì)體系測定蛋白質(zhì)的研究
　　本章研究結(jié)果表明,在鄰硝基苯基熒光酮(DBONPF)-月桂酰谷氨酸鈉(SLG)-蛋白質(zhì)體系中,最佳試驗條件下,各種蛋白質(zhì)(BSA,HSA,γ-G, egg

3、 albumin,Pep, Chy)的線性范圍均在納克級,檢測限分別為3.4 ng mL-1,1.7 ng mL-1,4.1 ng mL-1,4.4 ng mL-1,6.2 ng mL-1,3.7 ng mL-1,用于測定人血清總蛋白質(zhì)含量,結(jié)果滿意。
　　第2章β-環(huán)糊精-十二烷基磺酸鈉-蛋白質(zhì)體系測定蛋白質(zhì)的研究
　　研究該體系的共振光散射光譜,結(jié)果表明,在pH3.00的Britton-Robinson(BR)酸性介質(zhì)中

4、,β-環(huán)糊精、十二烷基磺酸鈉與蛋白質(zhì)自身的共振光散射信號都非常弱。但β-環(huán)糊精與蛋白質(zhì)結(jié)合后,共振光散射信號得到增強,表面活性劑十二烷基磺酸鈉加入能夠極大的增強β-環(huán)糊精-蛋白質(zhì)的共振光散射信號。據(jù)此,建立了一種測定蛋白質(zhì)的高靈敏RRS新方法。用于人血清中蛋白質(zhì)的測定,所得結(jié)果與考馬斯亮藍(lán)光度法一致。
　　第3章諾氟沙星-ctDNA體系測定ctDNA的研究
　　在諾氟沙星-ctDNA體系中,試驗發(fā)現(xiàn)ctDNA的加入能引起諾氟

5、沙星自身較弱的共振光散射信號顯著增加,據(jù)此,我們首次利用諾氟沙星做為共振光散射光譜探測定了脫氧核糖核酸。實驗結(jié)果表明,在pH5.87的BR緩沖溶液中,波長405.5 nm處出現(xiàn)最大共振光散射強度,ctDNA的線性響應(yīng)范圍分別為0.02-2.3μg mL-1,檢測限分別為1.2 ng mL-1。對三種合成樣進行分析測定,結(jié)果滿意。
　　第4章諾氟沙星-yDNA體系測定yDNA的研究
　　研究了諾氟沙星-yDNA共振光體系,研究

6、了諾氟沙星與yDNA的作用方式與作用機理,證明了諾氟沙星與yDNA之間是以溝槽的方式進行結(jié)合的,與ctDNA的結(jié)合方式是不相同的。考察了各種影響因素。在pH5.87的BR緩沖溶液中,yDNA引起了諾氟沙星共振光散射增強,在405.5 nm處,共振光散射強度的增強與yDNA濃度成線性關(guān)系。該方法的線性范圍為0.01~2.0μg mL-1,相關(guān)系數(shù)為0.9996,檢測限為1.2 ng mL-1。將該法用于混合樣品種yDNA的測定,結(jié)果令人滿

7、意。
　　第5章三-(2-(鄰羥基苯基亞甲氨基)乙基)胺-DNA體系測定DNA的研究
　　合成了席夫堿試劑三-(2-(鄰羥基苯基亞甲氨基)乙基)胺,并且研究了其與核酸在鹽酸介質(zhì)中(pH2.54)的反應(yīng)。對于三-(2-(鄰羥基苯基亞甲氨基)乙基)胺-DNA體系,研究發(fā)現(xiàn)393.0 nm處增加的RLS強度與核酸的濃度成線性關(guān)系(ctDNA,0.01~4.5μg mL-1, fsDNA,0.01~5.0μg mL-1)。 ctDN

8、A的檢測限是1.4 ng mL-1, fsDNA的檢測限是2.1 ng mL-1。該法用于動物肝臟中DNA的測定,結(jié)果與紫外-可見分光光度法相符。
　　第二部分,在藥物分析研究方面
　　在藥物方面,對人們廣泛關(guān)注的中藥中的微量金屬元素鉬、鉍進行了研究及分析應(yīng)用;另外研究了抗生素氧氟沙星與茜素紫3B的共振光散射光譜,建立了共振光散射技術(shù)測定氧氟沙星含量的新方法。
　　第6章二溴羥基苯基熒光酮-曲通X-100-鉬分析測定中

9、藥、頭發(fā)以及水中的鉬
　　本章建立了二溴羥基苯基熒光酮(DBHPF)-曲通X-100-鉬的共振光散射光譜新體系,分析測定了中藥、頭發(fā)以及水中的微量鉬。利用體系共振光強度降低的新穎現(xiàn)象,建立了新的DBHPF-TritonX100-Mo體系測定鉬的新方法,定量線性范圍為0.1~8.0 ng mL-1,檢出限為0.013 ng mL-1,應(yīng)用于中藥、人發(fā)與自來水中的微量鉬測定,結(jié)果滿意。
　　第7章三-(2-(鄰羥基苯基亞甲氨基)

10、乙基)胺-鉍體系測定鉍的研究
　　本章研究了席夫堿試劑三-(2-(鄰羥基苯基亞甲氨基)乙基)胺與鉍的共振光散射光譜,結(jié)果表明,在試驗的最佳條件下,在393.0 nm處,三-(2-(鄰羥基苯基亞甲氨基)乙基)胺增加的RLS強度與鉍的濃度在0.01~3.0μg mL-1成線性關(guān)系,檢測限為2.2 ng mL-1。該法用于測定胃舒散、胃必治中鉍含量,方便快速,結(jié)果可靠。
　　第8章茜素紫3B-氧氟沙星體系的分析應(yīng)用
　　在我

11、們建立的氧氟沙星-茜素紫3B體系中,發(fā)現(xiàn)在pH5.09的BR緩沖溶液中,在439.5 nm處,0.10-2.50μg mL-1范圍內(nèi)的氧氟沙星與增加的共振光散射強度成線性關(guān)系,而在pH6.90時,在405.0 nm處,0.05-3.00μg mL-1范圍內(nèi)的氧氟沙星與增加的共振光散射強度成線性關(guān)系,檢測限分別為0.013μg mL-1,0.021μg mL1。氧氟沙星-茜素紫3B體系用于人體的氧氟沙星血藥濃度測定,結(jié)果令人滿意。