重慶市管網(wǎng)末梢水中有機(jī)提取物的雄性生殖毒性及綠茶拮抗作用研究.pdf

1、本研究應(yīng)用GC/MS分析和整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法，對(duì)重慶市管網(wǎng)末梢水中有機(jī)物污染狀況及雄性生殖毒性危害進(jìn)行了研究。同時(shí)鑒于綠茶的抗氧化、抗突變等多方面的保健功能，還同時(shí)觀察了綠茶對(duì)重慶市管網(wǎng)末梢水中有機(jī)提取物對(duì)雄性生殖毒性損傷的拮抗效應(yīng)。 實(shí)驗(yàn)方法： 2003年12月15-23日在本室，采用固相萃取技術(shù)(solid-phaseextraction，SPE)，用GDX-102大孔樹(shù)脂富集以嘉陵江(重慶段)為源水的2100升管網(wǎng)

2、末梢水中的有機(jī)物，運(yùn)用氣/質(zhì)(GC/MS)聯(lián)用儀對(duì)水樣中有機(jī)提取物(organicextract,OE)的污染物種類(lèi)進(jìn)行分析、測(cè)定DBP的含量。其次運(yùn)用整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，研究OE對(duì)小鼠雄性生殖系統(tǒng)的影響。同時(shí)觀察了綠茶對(duì)重慶市管網(wǎng)末梢水中有機(jī)提取物對(duì)雄性生殖毒性損傷的拮抗效應(yīng)。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：雄性昆明種小鼠100只，按體重隨機(jī)分為7組。Ⅰ(二甲基亞砜0.005L/kg，記為DMSO)、Ⅱ(OE12.5L/kg，記為OEl)、Ⅲ(OE25

3、.0L/kg，記為OEm)、Ⅳ(OE50.0L/kg，記為OEh)、Ⅴ(OE50L/kg+2g/L，記為OEh+GTl)、Ⅵ(OE50L/kg+12g/L，記為OEh+GTh)、Ⅶ(環(huán)磷酰胺40mg/kg，記為CP)，Ⅰ溶劑對(duì)照、Ⅶ陽(yáng)性對(duì)照組每組10只，其余各組每組16只。其中Ⅴ、Ⅵ綠茶拮抗組染毒前15天飲用綠茶浸出液，其余喂飼條件與各組相同。各組動(dòng)物分別用上述相應(yīng)的試劑、劑量染毒小鼠，腹腔注7射連續(xù)5天。 分別在染毒后第15天

4、、35天處死動(dòng)物取材。用細(xì)胞計(jì)數(shù)板光鏡下計(jì)數(shù)單位重量附睪精子數(shù)量；伊紅染色光鏡下計(jì)數(shù)精子畸形；放射免疫分析法(RIA)檢測(cè)血清中的睪酮(T)的水平，免疫放射分析法測(cè)定促卵泡生成素(FSH)的含量；化學(xué)比色法測(cè)定睪丸組織液中酸性磷酸酶(ACP)和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)的活性，硫代巴比妥酸法(TBA)檢測(cè)睪丸組織液中丙二醛(MDA)的含量；光鏡和電鏡觀察睪丸病理組織學(xué)改變。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: (一)GC/MS分析結(jié)果顯示：管

5、網(wǎng)末梢水水樣共檢出有機(jī)污染物17種，鄰苯二甲酸酯類(lèi)物質(zhì)含量占整個(gè)水樣氣相色譜總峰面積的44.23％。經(jīng)外標(biāo)法定量DBP的含量為1.9μg/L。 (二)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1.第15天，35天與DMSO組相比，OE組單位重量附睪精子數(shù)量降低，其中OEh、CP組與DMSO組相差顯著(P＜0.05)，OEh+GTl、OEh+GTh與OEh相比單位重量附睪精子數(shù)增多。 2.第15天精子畸形率顯著升高，OEh、CP組與DMSO

6、組相差極為顯著(P＜0.01)；35天精子畸形率略有降低，但OEh、CP組與DMSO組相差極為顯著(P＜0.01)。OEh+GTh與OEh組比較精子畸形率顯著降低(P＜0.05)。 3.第15天OE組睪酮水平顯著性降低，OEl、OEm組與DMSO組相差極為顯著(P＜0.01)，F(xiàn)SH有升高的趨勢(shì)、但組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)；OEh+GTh組睪酮含量回升明顯。35天睪酮無(wú)明顯改變；除OEl外、與DMSO組相比各組FSH水平

7、顯著性降低(P＜0.05)。 4.第15天，與DMSO組相比各組ACP的活性顯著降低(P＜0.05)，35天后有所回升，僅見(jiàn)OEh、CP組與DMSO組相差顯著(P＜0.05)，15天、35天OEh+GTl組降低程度不大。染毒后第15天γ-GT活性升高，OEh、CP組與DMSO組相差顯著(P＜0.05)，35天γ-GT活性回落，但無(wú)顯著性差異(P＞0.05)；第15天、35天MDA的含量未見(jiàn)顯著差異(P＞0.05)。 5.

8、第15天光鏡下改變以生精細(xì)胞疏松脫落，數(shù)量減少，支持細(xì)胞空泡變性為主；35天伴有間質(zhì)細(xì)胞不同程度的增生，OEh+GTl組病變程度略輕于OEh組。第15天電鏡下可見(jiàn)生精細(xì)胞胞膜溶解、核固縮；支持細(xì)胞胞質(zhì)腫脹、滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張；間質(zhì)細(xì)胞線粒體嵴腫脹塌陷、脂滴蓄積。35天可見(jiàn)間質(zhì)細(xì)胞、支持細(xì)胞、生精細(xì)胞病變程度較染毒后第15天輕，細(xì)胞功能相對(duì)活躍。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論： 一、GC/MS分析結(jié)果顯示重慶市管網(wǎng)末梢水受到有機(jī)物污染。主要以PA

9、Es類(lèi)物質(zhì)為主，其中對(duì)雄性生殖系統(tǒng)具有危害的DBP含量較高。 二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，管網(wǎng)末梢水中有機(jī)提取物對(duì)小鼠雄性生殖系統(tǒng)具有一定程度的毒性。 1.OE可引起單位重量附睪精子數(shù)量減少，精子畸形率升高?；晤?lèi)型以頭部不定形為主。 2.OE導(dǎo)致小鼠血清中睪酮水平下降，促卵泡生成素水平降低。睪酮水平下降推測(cè)可能與睪丸間質(zhì)細(xì)胞受損有關(guān)，F(xiàn)SH水平的降低可能是下丘腦-垂體-性腺軸調(diào)節(jié)所致。 3.OE可引起AC

10、P酶活性的降低，γ-GT酶活性的升高。前者提示生精上皮變性，后者說(shuō)明支持細(xì)胞功能受損。 4.OE作用后可引起生精細(xì)胞、支持細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞廣泛的病理?yè)p傷。光鏡下特征性的變化是生精細(xì)胞疏松脫落，支持細(xì)胞空泡變性，間質(zhì)細(xì)胞增生；電鏡下生精細(xì)胞壞死，支持細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，間質(zhì)細(xì)胞線粒體受損、脂滴蓄積。 三、綠茶對(duì)管網(wǎng)末梢水中有機(jī)提物所誘導(dǎo)的小鼠雄性生殖毒性損傷，具有部分拮抗作用，尤其是對(duì)OE引起的精子畸形率的升高有顯著的抑制作用。