五黃提取物拮抗內(nèi)毒素對人牙周膜成纖維細胞毒性作用的實驗研究.pdf

1、根管治療術(shù)(rootcanaltherapy,RCT)是目前牙髓病和根尖周病最有效和最完善的治療方法。作為根管治療的重要環(huán)節(jié),根管沖洗可去除和控制感染根管內(nèi)細菌及其代謝產(chǎn)物。五倍子具有抗菌、收斂等功效;黃芩主要有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等作用。本課題擬研制上述兩種中藥的水提取物復合制劑作為一種新型的根管沖洗劑,并通過體外實驗,檢測其拮抗LPS(內(nèi)毒素脂多糖)對人牙周膜成纖維細胞的毒性作用,從而為新型中藥根管沖洗劑的研制提供理論基礎和實驗依據(jù)

2、。
　　 目的:
　　 研究不同濃度五黃提取物抑制LPS對牙周膜成纖維細胞的毒性作用,為該新型中藥根管沖洗劑的臨床應用提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 本實驗采用的細胞是用組織塊原代培養(yǎng)而獲得的人牙周膜成纖維細胞。實驗分為:
　　 實驗一:通過MTT法檢測不同濃度五黃提取物拮抗LPS對牙周膜成纖維細胞的增殖的影響。取生長狀態(tài)良好的第5代人牙周膜成纖維細胞接種于96孔板,并隨機分為三組,即空白對照組、

3、藥物組、LPS組。空白對照組加入DMEM培養(yǎng)液;藥物組分別加入各濃度的五黃提取物和LPS,即12.5μg/ml+100μg/mlLPS、25μg/ml+100μg/mlLPS、50μg/ml+100μg/mlLPS;LPS組加入100μg/mlLPS+DMEM培養(yǎng)液。24、48、72小時后,采用MTT法測定各組別每孔吸光度值。
　　 實驗二:五黃提取物對LPS刺激牙周膜成纖維細胞分泌的炎癥因子TNF-α的影響。取生長狀態(tài)良好的第

4、5代人牙周膜成纖維細胞接種于24孔板,并隨機分為空白對照組、藥物組、LPS組?？瞻讓φ战M加入DMEM培養(yǎng)液;藥物組分別加入各濃度的五黃提取物和LPS,即12.5μg/ml+100μg/mlLPS、25μg/ml+100μg/mlLPS和50μg/ml+100μg/mlLPS;LPS組加入100μg/mlLPS+DMEM培養(yǎng)液。于第12、24和48小時吸取上清液,4℃離心、分裝,并放入-20℃低溫冰箱凍存待檢。采用ELISA試劑盒檢測上清

5、液中TNF-α的水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.100μg/mlLPS在24h、48h、72h與空白組相比能夠明顯抑制牙周膜成纖維細胞的增殖活性(p＜0.05);在LPS存在的條件下,加入不同濃度的五黃提取物于牙周膜成纖維細胞中,隨著時間的延長,與LPS組相比較,不同濃度的五黃提取物在24h、48h均能使牙周膜成纖維細胞的增殖活力明顯提高,在72h時僅25μg/m能使牙周膜成纖維細胞的增殖活力明顯提高,其中25μg/ml

6、在24h時的效果最明顯。
　　 2.與空白組相比,LPS能明顯升高牙周膜成纖維細胞分泌TNF-α的水平(p＜0.05)。在LPS存在的條件下,12.5μg/ml、25μg/ml以及50μg/ml的五黃提取物組均能使人牙周膜成纖維細胞促炎因子TNF-α的分泌明顯降低(p＜0.05),其中25μg/ml的五黃提取物在24h時的作用效果最明顯。
　　 結(jié)論:
　　 五黃提取物能有效拮抗內(nèi)毒素對人牙周膜成纖維細胞毒性作用