三種天然產(chǎn)物中生物堿類化合物的液質(zhì)聯(lián)用分析.pdf

1、本課題從六個方面闡述了生物堿類化合物有效成分的藥理作用，評述了目前生物堿類有效成分的提取分離技術(shù)，指出了不同提取方法的優(yōu)缺點，綜述了生物堿類有效成分的分析研究現(xiàn)狀，比較了不同檢測方法的特點，指出了目前檢測方法的不足。
　　 針對目前生物堿類藥物有效成分的檢測現(xiàn)狀，依據(jù)生物堿類藥物有效成分的結(jié)構(gòu)特征，本課題集高效能、高分辨的高效液相色譜分離技術(shù)與高靈敏度、高選擇性的質(zhì)譜檢測技術(shù)于一體，建立了三種天然產(chǎn)物中生物堿類化合物的高效液相色

2、譜-電噴霧電離-質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-ESI-MS/MS)分析方法，該法靈敏度高，選擇性好，可用于生物堿類天然產(chǎn)物的有效質(zhì)量監(jiān)控。
　　 本課題詳細考察了三種天然產(chǎn)物中生物堿類化合物的色譜分離及質(zhì)譜分析檢測的最佳條件。通過對固定相、流動相、柱溫和流速的研究，優(yōu)化了色譜分離條件。通過對離子化模式、噴霧針電壓、干燥氣溫度、干燥氣壓力、毛細管電壓和碰撞能量的研究，得到了最佳的質(zhì)譜條件，最終建立的相應(yīng)生物堿類化合物分離分析方法如下:

3、>　　 1.黃連中生物堿的研究。目的:建立高效液相色譜-電噴霧離子-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時測定藥根堿，巴馬亭，黃連堿和小檗堿的新方法。方法:實驗采用Ultimate XB-C18色譜柱(150 mm×2.1 mm，3μm)，流動相:10mM乙酸銨水溶液（2％乙酸）-乙腈，梯度洗脫;流速:0.2mL·min-1;柱溫:35℃;質(zhì)譜條件為:電噴霧電離源(ESI);正離子掃描;多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）;噴霧針電壓:4500 V;干燥氣溫度:300

4、℃;干燥氣壓力:35 psi;碰撞氣(Ar)壓力:1.5mT。結(jié)果:在最佳實驗條件下，藥根堿、黃連堿、巴馬亭和小檗堿實現(xiàn)了基線分離。在正離子模式下，根據(jù)化合物準分子離子峰和碎片離子峰，鑒定了化合物的結(jié)構(gòu)。其中，準分子離子峰分別為m/z=339.1、320.9、353.1和337，定量離子峰分別為m/z=322、292、337和320，在最佳實驗條件下，藥根堿、黃連堿、巴馬亭和小檗堿分別在0.01～50.0 mg·L-1、0.05～50.

5、0 mg·L-1、0.01～20.0 mg·L-1和0.05～50.0 mg·L-1范圍內(nèi)呈線性相關(guān)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，藥根堿、黃連堿、巴馬亭和小檗堿的回歸方程和相關(guān)系數(shù)依次為y=139718x-101208，R2=0.9993;y=53117x-4296,R2=0.9994;y=1598570x-933627,R2=0.9993和y=127291x-2514，R2=0.9999，檢出限分別為1μg·L-1、6μg·L-1

6、、0.2μg·L-1和0.1μg·L-1。加標回收率分別為98.6％、99.8％、98.5％、101.0％。結(jié)論:該法操作簡便、選擇性強、靈敏度高，可用于黃連藥材及制劑中生物堿類化合物的質(zhì)量控制。
　　 2.茶葉中生物堿的研究。目的:建立高效液相色譜-電噴霧離子-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時檢測可可堿、茶葉堿和咖啡堿三種活性成分的新方法。方法:實驗采用Ultimate XB-C18色譜柱(150 mm×2.1 mm，3μm)，流動相:0.5

7、％甲酸水溶液-乙腈，梯度洗脫，流速:0.2 mL·min-1，柱溫:35℃;質(zhì)譜條件:電噴霧電離源(ESI);正離子掃描;多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM);噴霧針電壓:4500 V;干燥氣溫度:350℃;干燥氣壓力:25 psi;碰撞氣(Ar)壓力:1.5 mT。結(jié)果:在最佳實驗條件下，可可堿、茶葉堿和咖啡堿實現(xiàn)了基線分離。在正離子模式下根據(jù)化合物準分子離子峰和碎片離子峰，鑒定了化合物的結(jié)構(gòu)。其中，準分子離子峰分別為m/z=180.9、180.

8、9和194.9，定量離子峰分別為m/z=138、124和138，在最佳實驗條件下，可可堿、茶葉堿和咖啡堿分別在0.05～50.0 mg·L-1、0.01～20.0 mg·L-1和0.005～20.0 mg·L-1范圍內(nèi)呈線性相關(guān)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，可可堿、茶葉堿和咖啡堿的回歸方程和相關(guān)系數(shù)依次為y=154107x-90789，R2=0.9991;y=145178x-77282, R2=0.9989和y=112287x+69

9、3,R2=0.9996，檢出限分別為2μg·L-1、7μg·L-1、和0.8μg·L-1，加標回收率分別為99.3％、99.9％和99.8％。結(jié)論:該法操作簡便，選擇性強、靈敏度高，可用于茶葉產(chǎn)品中生物堿類化合物的質(zhì)量監(jiān)控。
　　 3.苦參中生物堿的研究。目的:建立高效液相色譜-電噴霧離子-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時檢測苦參堿和氧化苦參堿兩種活性成分的新方法。方法:實驗采用Ultimate XB-C18色譜柱(150 mm×2.1 mm，

10、3μm)，流動相:10mM乙酸銨水溶液(使用甲酸調(diào)整pH=3)-乙腈，等度洗脫，流速:0.2 mL·min-1，柱溫:30℃;質(zhì)譜條件:電噴霧電離源(ESI);正離子掃描;多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）;噴霧針電壓:4000 V;干燥氣溫度:300℃;干燥氣壓力:35 psi;碰撞氣(Ar)壓力:1.5 mT。結(jié)果:在最佳實驗條件下，苦參堿和氧化苦參堿實現(xiàn)了基線分離。在正離子模式下根據(jù)化合物準分子離子峰和碎片離子峰，鑒定了化合物的結(jié)構(gòu)。其中，

11、準分子離子峰分別為m/z=249.1和265.1，定量離子峰分別為m/z=148和247，在最佳實驗條件下，苦參堿和氧化苦參堿分別在0.005～20.0 mg·L-1和0.01～20.0 mg·L-1范圍內(nèi)呈線性相關(guān)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，苦參堿的回歸方程和相關(guān)系數(shù)為y=260663x+33205，R2=0.9994，氧化苦參堿的回歸方程和相關(guān)系數(shù)為y=1598570x+236468，R2=0.9990?？鄥A和氧化苦參堿的檢