微反應(yīng)器的掃描電化學(xué)顯微術(shù)用于生物分子的定量檢測.pdf

1、本論文共分三部分：Ⅰ掃描電化學(xué)顯微術(shù)(ScanningElectrochemicalMicroscopy，SECM)定量測定腫瘤相關(guān)標志物CA15-3；Ⅱ微反應(yīng)器的掃描電化學(xué)顯微術(shù)測定酶；ⅢSECM定量測量中性粒細胞中的過氧化物酶。 第一部分我們提出一種新的方法-掃描電化學(xué)顯微鏡-酶免疫方法(SECM-ELISA)應(yīng)用于乳腺癌相關(guān)抗原CA15-3的測定。實驗中通過在水平基底上構(gòu)筑微反應(yīng)池的方法進行免疫反應(yīng)，在基底上形成抗體-抗原

2、-酶標抗體(Ab-Ag-Ab*)的夾心結(jié)構(gòu)；反應(yīng)結(jié)束后，將微反應(yīng)池去掉，通過對HRP催化底物BQ的檢測間接測定抗原CA15-3(Ag)的量。我們對電極的材料，電極電位，緩沖溶液的pH和濃度，底物的濃度以及掃描電流隨時間的變化等幾種因素進行了研究，確定了CA15-3檢測的最佳實驗條件：pH7.0的50mmol/LNa2HPO4-NaH2PO4緩沖溶液+0.1mol/LKCl；H2Q的濃度1.0mmol/L，H2O2的濃度1.0mmol/L

3、，檢測電勢-0.4V，檢測時間為加入H2O26～8min后，電極用半徑10μm金圓盤電極。同以往SECM-ELISA方法相比，該方法采用微反應(yīng)池進行免疫反應(yīng)，起到了富集Ag的作用，提高了檢測的靈敏度。實驗條件下CA15-3的線性檢測范圍在15U/mL-250U/mL之間，檢測限可達到2.5U/mL左右。應(yīng)用該方法對CA15-3試劑盒中的對照樣進行測定，測定結(jié)果與試劑盒所提供數(shù)據(jù)相符合。 第二部分我們制作了一種適于SECM現(xiàn)場電化

4、學(xué)檢測用的微反應(yīng)器，并用該微反應(yīng)器對辣根過氧化物酶(HRP)進行了測定。該反應(yīng)器由表面平整的有機玻璃上刻蝕的微池和池口上方覆蓋的多孔膜構(gòu)筑而成。多孔膜的孔徑既要小于待檢生物大分子HRP的直徑，同時又要使HRP的底物H2Q、H2O2及催化產(chǎn)物BQ等的分子能方便通過這些膜孔。這樣通過檢測擴散出反應(yīng)器的BQ而測量HRP的量。實驗中我們對膜材料、成膜溶液濃度、澆膜時機、有機溶劑等對HRP測定的影響進行了探索研究，確定了最佳實驗條件。在最佳實驗條