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1、動(dòng)力學(xué)毛細(xì)管電泳(kinetic capillary electrophoresis,KCE)是新發(fā)展起來的用于親和相互作用研究的新方法,相對(duì)于傳統(tǒng)的親和方法,KCE集中了均相分析方法的簡(jiǎn)單性以及動(dòng)力學(xué)分析方法的動(dòng)力學(xué)特征,可以作為親和測(cè)定和親和純化的均相動(dòng)力學(xué)方法的概念平臺(tái)。但是傳統(tǒng)KCE在計(jì)算方法及實(shí)驗(yàn)操作中都存在一些不足。本文針對(duì)傳統(tǒng)KCE的這些不足,發(fā)展了幾種更簡(jiǎn)單的KCE新方法,并將KCE的應(yīng)用拓展到了蛋白及DNA與藥物的相互
2、作用研究中。本文的主要研究?jī)?nèi)容為:
第一部分:測(cè)定動(dòng)力學(xué)參數(shù)的平衡混合物的非平衡毛細(xì)管電泳(NECEEM)和區(qū)段-區(qū)段動(dòng)力學(xué)毛細(xì)管電泳(ppKCE)新方法的建立及應(yīng)用。在傳統(tǒng)KCE的基礎(chǔ)上,從動(dòng)力學(xué)參數(shù)kon、koff的原理出發(fā),利用物質(zhì)的峰高表示其濃度,建立了NECEEM及ppKCE測(cè)定動(dòng)力學(xué)參數(shù)的新方法,并將這些方法應(yīng)用到了西酞普蘭與BSA的相互作用研究中。利用NECEEM測(cè)得了離解速率常數(shù)koff,并通過考察結(jié)合物離
3、解時(shí)間與濃度參數(shù)ln(1/hc)之間的線性關(guān)系以及實(shí)驗(yàn)方法的精密度、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性,驗(yàn)證了koff求解方法的可靠性。采用建立的ppKCE新方法同時(shí)測(cè)得了動(dòng)力學(xué)參數(shù)kon和koff以及結(jié)合常數(shù)K,測(cè)定的結(jié)果通過時(shí)間比法得到了驗(yàn)證。
第二部分:校正的預(yù)平衡區(qū)帶毛細(xì)管電泳(modified pre-eq CZE)新方法的建立及應(yīng)用。傳統(tǒng)的pre-eq CZE由于電泳中結(jié)合物的離解而存在對(duì)結(jié)合常數(shù)K值測(cè)定偏小的缺陷,因此文中將NE
4、CEEM與pre-eq CZE相結(jié)合,根據(jù)pre-eq CZE中結(jié)合物的離解過程,首先對(duì)離解速率常數(shù)koff行了求解,進(jìn)而利用所求得的koff藥物游離濃度的測(cè)定進(jìn)行校正,建立了modified pre-eq CZE新方法,并將其應(yīng)用到了西酞普蘭與BSA以及硝基苯胺與鯡魚精DNA間的相互作用研究中,同時(shí)將利用modifiedpre-eq CZE求得的結(jié)合常數(shù)與毛細(xì)管電泳前沿分析法、峰漂移法、紫外-可見吸收光譜法及平衡透析法所得的結(jié)果進(jìn)行了
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