溶菌酶修飾的慶大霉素脂質體對抗細菌生物膜的研究.pdf

1、細菌生物膜引發(fā)的慢性感染是臨床上棘手的問題之一。由于細菌生物膜對抗生素具有高度耐藥性，而在缺乏新抗生素或者高效抗菌策略的前提下，只能加大現(xiàn)有抗生素的使用劑量、延長給藥時間。長此以往，容易導致耐藥性和耐藥菌株的產生，同時，抗生素的毒副作用也會增加。因此，通過改良抗生素的現(xiàn)有給藥方式，降低抗生素的使用劑量，提高作用效果，可以為細菌生物膜感染的治療提供更好的解決辦法。本文采用生物相容性好的帶正電荷的溶菌酶修飾帶負電荷的脂質體，提高了脂質體的穩(wěn)

2、定性，增強了對細菌生物膜的親和力，提升了慶大霉素對生物膜的作用效果。具體研究內容如下:
　　采用1，2-棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)和二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)，通過擠壓法制備了慶大霉素脂質體(LG)，經磷鎢酸鈉沉淀法測定可知慶大霉素的包封率為0.6％。其次利用靜電作用將帶正電荷的溶菌酶吸附到負電荷的脂質體表面得到溶菌酶修飾的慶大霉素脂質體(LLG)。根據(jù)表面Zeta電位由LG的負值向LLG的正值轉變可知，溶菌酶成功吸附到了脂

3、質體表面。通過定時檢測48h內LG及LLG的粒徑變化可知，溶菌酶的引入可以穩(wěn)定脂質體。利用紫外分光光度計實時監(jiān)測72h內LG及LLG體外釋放慶大霉素含量發(fā)現(xiàn)，LG在前48h內，慶大霉素釋放量超過了50％，而在72h時70％以上的藥物已經釋放。相反地，在72h時也僅有14％的藥物從LLG中釋放出來。由此也證明了溶菌酶吸附到慶大霉素脂質體表面可以有效改善脂質體的穩(wěn)定性。通過體外構建銅綠假單胞桿菌（革蘭氏陰性菌）和金黃色葡萄球菌（革蘭氏陽性菌

4、）生物膜，利用結晶紫染色法和MTT實驗評價發(fā)現(xiàn)，與單獨慶大霉素相比，LLG在破壞已形成的細菌生物膜和抑制細菌生物膜形成時更為有效。通過熒光顯微鏡及掃描電鏡觀察細菌生物膜發(fā)現(xiàn)，LLG不僅破壞了生物膜的形態(tài)及內部結構，也影響了單個細菌的形態(tài)結構。通過熒光定量羅丹明B與細菌生物膜的結合量，探討了LLG破壞細菌生物膜的潛在機制，結果顯示，LLG能更有效的吸附于負電荷的生物膜，進而定點釋放藥物，從而達到增強LLG的抗生物膜效果。
　　綜上所