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1、尺寸小、分散單一、高飽和磁化強(qiáng)度的Au/Fe3O4納米材料因其在磁共振成像,藥物定向釋放、生物大分子分離、癌癥的診斷和治療及免疫檢測(cè)等生物醫(yī)學(xué)方面有廣泛的應(yīng)用而成為材料領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。本論文通過高溫?zé)峤夥煽刂苽淞朔稚⑿粤己?,尺寸均一,高飽和磁化?qiáng)度,油相分散穩(wěn)定的Au/Fe3O4納米粒子,進(jìn)而采用氧化法將Au/Fe3O4納米粒子表面油酸中的雙鍵氧化成為端羧基基團(tuán),從而實(shí)現(xiàn)油相Au/Fe3O4納米粒子的水相轉(zhuǎn)移。經(jīng)PAA修飾后的Au
2、/Fe3O4納米粒子作為固相載體應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)(CLIA);通過將具有抗蛋白吸附的兩性離子甘油磷酸膽堿(GPC)加入封閉劑,降低納米顆粒對(duì)非特異性蛋白的吸附,通過對(duì)血清中C反應(yīng)蛋白(CRP)檢測(cè)研究表明,該方法能夠有效提高檢測(cè)靈敏度,具體研究結(jié)果如下:
(1)油相Au/Fe3O4磁性納米粒子的制備
采用高溫?zé)峤夥?,以Fe(CO)5為原料,在油酸,膠體金存在下在1-十八烯溶液中,通過調(diào)節(jié)反應(yīng)物比例可控制備了粒徑
3、均一的Au/Fe3O4納米粒子。并通過透射電鏡(TEM)、紫外(UV-vis)、X-射線粉末衍射(XRD)、傅里葉紅外光譜儀(FTIR)、熱重分析(TGA)、振動(dòng)樣品磁強(qiáng)計(jì)(VSM)等方法進(jìn)行表征。結(jié)果表面,該Au/Fe3O4磁性納米粒子具有花瓣型結(jié)構(gòu),粒徑大小為35nm左右。FT-IR和TGA的數(shù)據(jù)表明,該納米粒子表面吸附有油酸分子,其質(zhì)量所占百分比約為22.3%。表面被疏水性的油酸所包覆的Au/Fe3O4磁性納米粒子在環(huán)己烷中分散均
4、一,且在室溫下測(cè)得的Ms為37emu/g。
(2)油相Au/Fe3O4納米粒子的水相轉(zhuǎn)移及聚丙烯酸(PAA)修飾
采用油酸氧化法進(jìn)行Au/Fe3O4納米粒子的水相轉(zhuǎn)移。以混合溶劑為反應(yīng)介質(zhì),高碘酸鈉為氧化劑,成功將油相Au/Fe3O4納米粒子轉(zhuǎn)入水相,并經(jīng)聚丙烯酸(PAA)修飾。經(jīng)過分析表征,結(jié)果表明,經(jīng)過轉(zhuǎn)水及PAA修飾后,Au/Fe3O4納米粒子的形貌及結(jié)構(gòu)并未發(fā)生改變。經(jīng)PAA修飾后,Au/Fe3O4納米粒子的
5、Ms為36emu/g,zeta電位由修飾前的-22.6mV降低到-30.2mV,電負(fù)性增強(qiáng)。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明,PAA-Au/Fe3O4粒子在水溶液分散性良好并且在水相溶液中能夠穩(wěn)定保存4個(gè)月。
(3)PAA-Au/Fe3O4納米粒子在C反應(yīng)蛋白(CRP)化學(xué)放光免疫檢測(cè)中的應(yīng)用研究
選擇PAA-Au/Fe3O4磁性復(fù)合納米粒子為固相載體,首先將C反應(yīng)蛋白抗體進(jìn)行負(fù)載,其次通過在傳統(tǒng)封閉劑中添加兩性離子GPC降低磁
6、性納米粒子表面對(duì)蛋白質(zhì)的非特異吸附。再者,通過雙抗體夾心法,建立基于魯米諾-雙氧水化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法,實(shí)現(xiàn)了對(duì)血清中CRP的檢測(cè),最后利用線性關(guān)系,干擾實(shí)驗(yàn),精密度實(shí)驗(yàn),以及臨床樣本檢測(cè)等對(duì)所建立的方法進(jìn)行了評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,GPC的添加能夠有效降低Au/Fe3O4磁性納米粒子表面非特異性蛋白吸附。建立的CRP檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線在1-250ng/mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2=0.998),最低檢測(cè)限達(dá)到0.26ng/mL(2.5pM)。
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