包埋-脫水法常溫和低溫保存綠色巴夫藻.pdf

1、植物種質(zhì)資源是人類賴以生存和發(fā)展的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的物質(zhì)基礎(chǔ)。長期以來，由于對(duì)植物種質(zhì)資源及多樣性保持缺乏足夠的重視，使種質(zhì)資源面臨危機(jī)[1]。植物種質(zhì)資源的保存研究對(duì)于生物多樣性保護(hù)和植物生物技術(shù)均具有十分重要的意義[2]。利用微繁及限制生長等組織培養(yǎng)技術(shù)保存植物種質(zhì)，其最大優(yōu)點(diǎn)是所需設(shè)備與實(shí)驗(yàn)室常規(guī)組織培養(yǎng)無異，在培養(yǎng)基、培養(yǎng)環(huán)境氧氣含量、培養(yǎng)溫度或材料含水量上稍作改變，就能明顯地延長繼代周期；利用超低溫冰凍技術(shù)為長期穩(wěn)

2、定地保存植物種質(zhì)資源提供了有效的方法，但由于多種原因目前大多是基于方法的研究，離實(shí)際應(yīng)用還有一段距離[3]。目前有多種保存微藻的方法，每種方法都有各自的優(yōu)點(diǎn)。繼代保存簡單易行，在生產(chǎn)和科研實(shí)踐中仍受到青睞；固定化保存使藻細(xì)胞生長速度緩慢，可用于次生代謝物質(zhì)生產(chǎn)和污水處理；超低溫保存具有保持種質(zhì)遺傳穩(wěn)定性，對(duì)藻種進(jìn)行優(yōu)勝劣汰，便于長期保存，能最大限度地減少污染等優(yōu)點(diǎn)[4]。包埋脫水法常溫和低溫保存是將固定化技術(shù)與干燥法結(jié)合，與常規(guī)的繼代保

3、存相比，它的保存時(shí)間更為長久；與超低溫保存相比，它不需要較為復(fù)雜的操作技術(shù)和貴重的保存設(shè)備，成本低廉，而且可以保存大量藻種，是一種有發(fā)展?jié)摿Φ闹衅诒４婕夹g(shù)。 本文以綠色巴夫藻(Pavlova viridis)為實(shí)驗(yàn)材料，用包埋-脫水法進(jìn)行常溫和低溫保存。選擇靜止初期的藻細(xì)胞包埋在含有30‰氯化鈉的3％的褐藻酸鈣膠球中，細(xì)胞負(fù)載約5000萬個(gè)細(xì)胞/膠球，將膠球用硅膠吸濕法脫水至不同含水量后，在常溫和低溫處進(jìn)行保存。本文探討了保存溫

4、度、光(暗)和膠球含水量等因素對(duì)保存效果的影響。結(jié)果如下： 1．在20℃暗下，保存18個(gè)月后的最高存活率為7.1％；在20℃光下，保存6個(gè)月后的最高存活率為8.8％。 2．在4℃暗下，保存18個(gè)月后的最高存活率為54.1％；在4℃自然光照下，保存6個(gè)月后的最高存活率為69.0％。 3．在-30℃下，保存12個(gè)月后的最高存活率為6.3％：經(jīng)過10％甘油處理后保存在-30℃下，12個(gè)月后的最高存活率為59.7％。

5、 4．本文分別用保存6個(gè)月和18個(gè)月的藻細(xì)胞接種，測(cè)定其生長曲線和生長速率。保存6個(gè)月后，在第10天達(dá)到最高細(xì)胞密度，平均生長速率由保存前的0.221降低到0.168，經(jīng)過2個(gè)周期的恢復(fù)培養(yǎng)平均生長速率達(dá)到0.211。保存18個(gè)月后，在第12天達(dá)到最高細(xì)胞密度，平均生長速率為0.138，經(jīng)過2個(gè)周期的恢復(fù)培養(yǎng)平均生長速率為0.193。說明經(jīng)過保存后，藻細(xì)胞可正常進(jìn)行生長繁殖。 與其它方法相比，采用包埋-脫水法常溫和低溫保存綠