環(huán)糊精在手性電色譜中的應(yīng)用研究.pdf

1、毛細(xì)管電色譜(Capillary electrochromatography,CEC)是一種色譜和電泳高度結(jié)合的新型高效微分離分析技術(shù),它具有分離快速、高效、低成本、環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn),近年來迅速發(fā)展成為手性分離領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)課題之一。電色譜柱是手性分離的“心臟”,其中手性固定相(CSP)的選材和制備方法又是電色譜柱制備的核心。本論文致力于開發(fā)一類新型毛細(xì)管手性電色譜柱,以常用的β-環(huán)糊精(β-Cyclodextrins,β-CD)為手性配

2、體,在其端口修飾不同的功能基團(tuán),然后化學(xué)鍵合到毛細(xì)管內(nèi)壁,制備出拆分速度快,重現(xiàn)性好的新型環(huán)糊精手性毛細(xì)管電色譜柱。通過紅外光譜、掃描電子顯微鏡等手段對(duì)固定相和電色譜柱進(jìn)行基本結(jié)構(gòu)表征,將其分別用于臨床上常用的心血管類藥物β-受體阻滯劑和鈣通道阻滯劑對(duì)映體的拆分。建立一種快速、高效、低耗拆分上述手性藥物的電色譜新方法,并初步應(yīng)用于藥片和人體血漿中藥物對(duì)映體含量的測(cè)定。利用毛細(xì)管電色譜拆分上述藥物尚未見報(bào)道。本論文的主要研究內(nèi)容如下:

3、r>　　1、系統(tǒng)地對(duì)近年來有關(guān)手性藥物對(duì)映體的分離分析方法和手性固定相的制備方法進(jìn)行了總結(jié),側(cè)重于環(huán)糊精衍生物在毛細(xì)管電泳和電色譜手性藥物拆分中的相關(guān)進(jìn)展,以此作為本論文選題和研究工作的理論依據(jù)。
　　2、首次制備了乙二胺衍生化β-環(huán)糊精,并鍵合到有序介孔材料SBA-15表面,得到含穩(wěn)定脲鍵的手性固定相(EACDP)。然后將其均勻地填充至石英毛細(xì)管中,原位聚合技術(shù)制備柱塞,得到一種新型的環(huán)糊精有序介質(zhì)毛細(xì)管手性電色譜填充柱,并對(duì)其

4、結(jié)構(gòu)和形貌進(jìn)行了基本表征。通過測(cè)定其孔隙率和電滲流(EOF),發(fā)現(xiàn)這種新型的β-環(huán)糊精類化學(xué)鍵合SBA-15電色譜柱有良好的通透性,不易產(chǎn)生氣泡,能產(chǎn)生足夠穩(wěn)定的電滲流。采用毛細(xì)管電色譜法,在極性有機(jī)模式下,以電滲流為驅(qū)動(dòng)力,通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,實(shí)現(xiàn)了10種臨床上廣泛使用的普萘洛爾等β-受體阻滯劑類手性藥物對(duì)映體的拆分,其中普萘洛爾和阿羅洛爾對(duì)映體的分離度(Rs)分別為1.96和1.99。研究發(fā)現(xiàn)環(huán)糊精腔體可與溶質(zhì)之間發(fā)生包結(jié)作用,同時(shí)其

5、端口上的取代基還可與溶質(zhì)之間產(chǎn)生氫鍵作用,多種作用是產(chǎn)生手性分離的主要原因。隨后將該方法初步用于不同廠家生產(chǎn)的普萘洛爾片對(duì)映體含量的測(cè)定,得到了較滿意的結(jié)果。毛細(xì)管電色譜可大大減少溶劑耗量,降低測(cè)試成本,存在廣泛的應(yīng)用前景。
　　3、采用溶膠凝膠法(Sol-gel)制備對(duì)硝基苯氨基甲酸酯化β-環(huán)糊精毛細(xì)管電色譜開管柱(NCDP),這種方法制備簡便,也不用填充和燒塞,所制備的柱子有較高的柱容量和手性分離重現(xiàn)性。在Sol-gel中同時(shí)

6、引入β-環(huán)糊精和巰基(-SH),巰基被緩和氧化后轉(zhuǎn)化為帶負(fù)電荷的磺酸基(-SO3-),有助于提供足夠穩(wěn)定的電滲流,維系電色譜的分離過程。采用紅外光譜、掃描電鏡對(duì)開管柱進(jìn)行必要的結(jié)構(gòu)表征。本文利用自制的開管柱,分別探索了拆分鹽酸馬尼地平和鹽酸尼卡地平對(duì)映體的電色譜方法。在極性有機(jī)模式下,考察了有機(jī)溶劑的組成及含量、三乙胺和冰醋酸的含量、施加電壓、溫度等對(duì)分離度(RS)的影響。鹽酸馬尼地平和鹽酸尼卡地平得到了較好的拆分效果,拆分時(shí)間分別約5

7、 min和7 min,分析速度快。以馬尼地平為例,兩對(duì)映體保留時(shí)間的日內(nèi) RSD分別為0.4％和1.0%,峰面積的RSD為3.2和4.5%(n=5)。該電色譜方法具有制備簡便,拆分快速,試劑耗量低,重現(xiàn)性較好等優(yōu)點(diǎn)。
　　4、采用Sol-gel技術(shù)方便地制備一種磺丁基醚-β-環(huán)糊精開管毛細(xì)管電色譜柱(SCDP),磺丁基有助于產(chǎn)生足夠大的電滲流。研究和優(yōu)化了電色譜法拆分鹽酸尼卡地平的條件,利用磺丁基醚-β-環(huán)糊精(SBE-β-CD)

8、在固定相和流動(dòng)相中的協(xié)同作用,在15 min內(nèi)尼卡地平對(duì)映體得到了快速拆分,分離度為4.08。在此基礎(chǔ)上,建立了一種測(cè)定人體血漿中尼卡地平對(duì)映體含量的電色譜新方法。尼卡地平對(duì)映體在0.5~50.0μg/mL濃度范圍線性相關(guān),最低檢出濃度為0.1μg/mL。與報(bào)道的文獻(xiàn)相比,該電色譜法分離度和柱效更高,分析時(shí)間更短,消耗試劑量少,加之電色譜柱制備簡單,有較好的實(shí)用性,有助于開展人體中尼卡地平對(duì)映體藥代動(dòng)力學(xué)研究。
　　5、采用甲基丙

9、烯酸縮水甘油酯原位聚合物基質(zhì),將磺丁基醚-β-環(huán)糊精修飾到毛細(xì)管內(nèi)壁,制備出新型的內(nèi)壁含聚合物的毛細(xì)管開管電色譜柱(SECDP),并采用紅外光譜和掃描電鏡進(jìn)行必要的結(jié)構(gòu)表征。β-環(huán)糊精端口磺丁基可提供足夠穩(wěn)定的正向電滲流,同時(shí)也參與手性識(shí)別作用?；诨嵌』?β-環(huán)糊精在固定相和流動(dòng)相中的協(xié)同作用,利用開管電色譜柱首次實(shí)現(xiàn)了尼卡地平等10種鈣通道阻滯劑堿性藥物對(duì)映體的良好拆分?；阝}通道阻滯劑藥物結(jié)構(gòu)中含不同的取代基,探討了相關(guān)的手性分