環(huán)糊精在手性電色譜中的應用研究.pdf

1、毛細管電色譜(Capillary electrochromatography,CEC)是一種色譜和電泳高度結合的新型高效微分離分析技術,它具有分離快速、高效、低成本、環(huán)境友好等優(yōu)點,近年來迅速發(fā)展成為手性分離領域研究的熱點課題之一。電色譜柱是手性分離的“心臟”,其中手性固定相(CSP)的選材和制備方法又是電色譜柱制備的核心。本論文致力于開發(fā)一類新型毛細管手性電色譜柱,以常用的β-環(huán)糊精(β-Cyclodextrins,β-CD)為手性配

2、體,在其端口修飾不同的功能基團,然后化學鍵合到毛細管內壁,制備出拆分速度快,重現(xiàn)性好的新型環(huán)糊精手性毛細管電色譜柱。通過紅外光譜、掃描電子顯微鏡等手段對固定相和電色譜柱進行基本結構表征,將其分別用于臨床上常用的心血管類藥物β-受體阻滯劑和鈣通道阻滯劑對映體的拆分。建立一種快速、高效、低耗拆分上述手性藥物的電色譜新方法,并初步應用于藥片和人體血漿中藥物對映體含量的測定。利用毛細管電色譜拆分上述藥物尚未見報道。本論文的主要研究內容如下:

3、r>　　1、系統(tǒng)地對近年來有關手性藥物對映體的分離分析方法和手性固定相的制備方法進行了總結,側重于環(huán)糊精衍生物在毛細管電泳和電色譜手性藥物拆分中的相關進展,以此作為本論文選題和研究工作的理論依據(jù)。
　　2、首次制備了乙二胺衍生化β-環(huán)糊精,并鍵合到有序介孔材料SBA-15表面,得到含穩(wěn)定脲鍵的手性固定相(EACDP)。然后將其均勻地填充至石英毛細管中,原位聚合技術制備柱塞,得到一種新型的環(huán)糊精有序介質毛細管手性電色譜填充柱,并對其

4、結構和形貌進行了基本表征。通過測定其孔隙率和電滲流(EOF),發(fā)現(xiàn)這種新型的β-環(huán)糊精類化學鍵合SBA-15電色譜柱有良好的通透性,不易產生氣泡,能產生足夠穩(wěn)定的電滲流。采用毛細管電色譜法,在極性有機模式下,以電滲流為驅動力,通過優(yōu)化實驗條件,實現(xiàn)了10種臨床上廣泛使用的普萘洛爾等β-受體阻滯劑類手性藥物對映體的拆分,其中普萘洛爾和阿羅洛爾對映體的分離度(Rs)分別為1.96和1.99。研究發(fā)現(xiàn)環(huán)糊精腔體可與溶質之間發(fā)生包結作用,同時其

5、端口上的取代基還可與溶質之間產生氫鍵作用,多種作用是產生手性分離的主要原因。隨后將該方法初步用于不同廠家生產的普萘洛爾片對映體含量的測定,得到了較滿意的結果。毛細管電色譜可大大減少溶劑耗量,降低測試成本,存在廣泛的應用前景。
　　3、采用溶膠凝膠法(Sol-gel)制備對硝基苯氨基甲酸酯化β-環(huán)糊精毛細管電色譜開管柱(NCDP),這種方法制備簡便,也不用填充和燒塞,所制備的柱子有較高的柱容量和手性分離重現(xiàn)性。在Sol-gel中同時

6、引入β-環(huán)糊精和巰基(-SH),巰基被緩和氧化后轉化為帶負電荷的磺酸基(-SO3-),有助于提供足夠穩(wěn)定的電滲流,維系電色譜的分離過程。采用紅外光譜、掃描電鏡對開管柱進行必要的結構表征。本文利用自制的開管柱,分別探索了拆分鹽酸馬尼地平和鹽酸尼卡地平對映體的電色譜方法。在極性有機模式下,考察了有機溶劑的組成及含量、三乙胺和冰醋酸的含量、施加電壓、溫度等對分離度(RS)的影響。鹽酸馬尼地平和鹽酸尼卡地平得到了較好的拆分效果,拆分時間分別約5

7、 min和7 min,分析速度快。以馬尼地平為例,兩對映體保留時間的日內 RSD分別為0.4％和1.0%,峰面積的RSD為3.2和4.5%(n=5)。該電色譜方法具有制備簡便,拆分快速,試劑耗量低,重現(xiàn)性較好等優(yōu)點。
　　4、采用Sol-gel技術方便地制備一種磺丁基醚-β-環(huán)糊精開管毛細管電色譜柱(SCDP),磺丁基有助于產生足夠大的電滲流。研究和優(yōu)化了電色譜法拆分鹽酸尼卡地平的條件,利用磺丁基醚-β-環(huán)糊精(SBE-β-CD)

8、在固定相和流動相中的協(xié)同作用,在15 min內尼卡地平對映體得到了快速拆分,分離度為4.08。在此基礎上,建立了一種測定人體血漿中尼卡地平對映體含量的電色譜新方法。尼卡地平對映體在0.5~50.0μg/mL濃度范圍線性相關,最低檢出濃度為0.1μg/mL。與報道的文獻相比,該電色譜法分離度和柱效更高,分析時間更短,消耗試劑量少,加之電色譜柱制備簡單,有較好的實用性,有助于開展人體中尼卡地平對映體藥代動力學研究。
　　5、采用甲基丙

9、烯酸縮水甘油酯原位聚合物基質,將磺丁基醚-β-環(huán)糊精修飾到毛細管內壁,制備出新型的內壁含聚合物的毛細管開管電色譜柱(SECDP),并采用紅外光譜和掃描電鏡進行必要的結構表征。β-環(huán)糊精端口磺丁基可提供足夠穩(wěn)定的正向電滲流,同時也參與手性識別作用?；诨嵌』?β-環(huán)糊精在固定相和流動相中的協(xié)同作用,利用開管電色譜柱首次實現(xiàn)了尼卡地平等10種鈣通道阻滯劑堿性藥物對映體的良好拆分。基于鈣通道阻滯劑藥物結構中含不同的取代基,探討了相關的手性分