基于量子點(diǎn)和貴金屬納米粒子的兩種高靈敏定量免疫層析分析方法的研究.pdf

1、免疫層析分析方法（ICA）是免疫分析方法與層析技術(shù)相結(jié)合的一種分析方法。傳統(tǒng)的免疫層析分析方法主要是以膠體金為基礎(chǔ)，該方法具有操作簡便，檢測時(shí)間短，價(jià)廉等特點(diǎn)，但其主要用于定性和半定量分析，而對(duì)于定量分析則呈現(xiàn)靈敏度不高的缺陷。近年來各種新型納米材料的不斷涌現(xiàn)及其在 ICA的應(yīng)用大大推進(jìn)了ICA定量分析研究的進(jìn)展。其中量子點(diǎn)（quantum dots,QDs）熒光納米材料和具有表面增強(qiáng)拉曼光譜（Surface-Enhanced Rama

2、n Scattering，SERS）效應(yīng)的貴金屬納米的問世與發(fā)展，為高靈敏定量ICA的建立提供了基礎(chǔ)。
　　本工作自制合成了油相QDs，采用聚合物包裹量子點(diǎn)的方式，成功實(shí)現(xiàn)了油相量子點(diǎn)轉(zhuǎn)變?yōu)樗嗔孔狱c(diǎn)，制備了具有量子產(chǎn)率高、熒光效率好的量子點(diǎn)微球，在此基礎(chǔ)上制備了熒光免疫探針，建立了熒光免疫層析分析方法（FICA）。另外，制備了Au@Ag核殼納米粒子，在此基礎(chǔ)上制備了SERS免疫探針，建立了基于貴金屬納米粒子的表面增強(qiáng)拉曼光譜免疫

3、層析分析方法（SERS-ICA）。所建立的兩種高靈敏定量免疫層析分析方法分別用于兩種β-激動(dòng)劑（即瘦肉精）溴布特羅(Bromobuterol, Brom)和沙丁胺醇(Salbutamol, Sal)的檢測。
　　本論文主要分為四個(gè)部分：
　　一.介紹了本論文的研究背景及其意義，詳細(xì)闡述了免疫層析分析方法的概念、特點(diǎn)、發(fā)展近況和局限性，探討了新型納米材料的研究進(jìn)展以及對(duì)傳統(tǒng)免疫層析分析方法產(chǎn)生的影響，說明了量子點(diǎn)的發(fā)展以及基于

4、量子點(diǎn)熒光結(jié)合免疫層析分析方法（ FICA）的特點(diǎn)。此外也對(duì)表面增強(qiáng)拉曼光譜結(jié)合免疫層析（SERS-ICA）進(jìn)行了闡述。
　　二.相較于水相直接合成的量子點(diǎn)，油相量子點(diǎn)無論是穩(wěn)定性亦或是熒光強(qiáng)度等方面都更為優(yōu)異。本實(shí)驗(yàn)通過有機(jī)熱溶劑的方法成功制備了核殼結(jié)構(gòu)的量子點(diǎn)，探究了反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間等因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，對(duì)所制備的量子點(diǎn)進(jìn)行了一系列的表征。
　　三.采用聚合物包裹量子點(diǎn)的方法實(shí)現(xiàn)了油相量子點(diǎn)轉(zhuǎn)為水相量子點(diǎn)，并制備了量

5、子點(diǎn)熒光微球，通過對(duì)其進(jìn)行一系列的表征發(fā)現(xiàn)，此微球具有很好的熒光穩(wěn)定性、水相分散性、粒徑分散均一等優(yōu)異性質(zhì)。采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺（EDC）活化偶聯(lián)的方式，使其與溴布特羅抗體偶聯(lián)，制備了可特異性識(shí)別溴布特羅的熒光免疫探針。將探針應(yīng)用于FICA，實(shí)現(xiàn)了對(duì)尿樣中溴布特羅樣品的定量檢測。整個(gè)免疫層析過程在20min內(nèi)完成，此方法檢測溴布特羅的IC50和檢出限分別為0.014 ng/mL和0.53 pg/mL，顯示出高的

6、靈敏度。通過與其他幾種β-激動(dòng)劑的交叉對(duì)比實(shí)驗(yàn)，僅鹽酸克倫特羅有約28.6％的交叉反應(yīng)率，其他均無交叉現(xiàn)象。最后在尿樣中的加標(biāo)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，其加標(biāo)回收率在97.7%-102.7%之間，RSD值在1.9%-3.3%之間。表明該方法能夠定量并且高靈敏檢測溴布特羅。
　　四.合成了具有表面增強(qiáng)拉曼效果好的Au@Ag核殼納米粒子，將其分別與拉曼標(biāo)記物（對(duì)巰基丙酸，MBA）和抗沙丁胺醇的多克隆抗體相連合成免疫探針，建立用于特異性檢測沙丁胺醇的S