細(xì)胞周期的流式檢測方法

1、1細(xì)胞周期的流式檢測方法細(xì)胞周期（cell cycle）是指細(xì)胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過程，分為 G0/G1 期、S 期、G2/M 期。在科研實(shí)踐中，很多實(shí)驗(yàn)具有對細(xì)胞群體的周期分布進(jìn)行檢測的需求。細(xì)胞群體周期測定的方法有很多種，最常用的是 PI（碘化丙啶）滲入DNA 進(jìn)行染色，然后通過流式細(xì)胞儀檢測 PI 從而測定細(xì)胞群體的周期分布。因此，下面筆者主要通過 BD（Becton＆Dickinson）公司生產(chǎn)的 BD

2、 FACSCalibur 流式細(xì)胞儀測定 PI 標(biāo)記的細(xì)胞群體為例，對細(xì)胞周期的流式檢測方法進(jìn)行闡述。一、PI 染色步驟概略1、單細(xì)胞懸液離心，1500rpm , 5min，棄上清。2、PBS 1ml 離心，棄上清。3、70%酒精 2ml，4℃，30min，離心，棄上清液。4、PBS 1ml 離心，棄上清。5、RNase A 的 PBS 溶液 (20ug/ml)，500ul，37℃，30min，離心棄上清。6、PBS 1ml 離心，棄上

3、清。 7、PI 的 PBS 溶液(50ug/ml)，500ul，室溫避光孵育 30min。8、吹打混勻，300 目篩網(wǎng)過濾至流式管中，4℃保存，待測。二、Calibur 儀器設(shè)置及數(shù)據(jù)收集1、依次打開 Calibur 機(jī)器電源、電腦開關(guān)和 CellQuest Pro 軟件，按快捷鍵 Command+B 連機(jī)，按快捷鍵 Command+1、2、3、4 調(diào)出 Detectors/Amps 面板、Threshold 面板、Compensati

4、on 面板和 Status 面板，軟件的操作界面如圖 1 所示。圖 1. Cell Quest Pro 軟件操作界面2、建立實(shí)驗(yàn)?zāi)０?，包?FSC/SSC 散點(diǎn)圖、FL2-W/FL2-A 散點(diǎn)圖和 FL2-A 直方圖。因?yàn)?PI在 Calibur 上是由 488nm 的激光器激發(fā)，530/30 濾光片收集信號，所以選擇 FL2 通道進(jìn)行檢測。細(xì)胞周期是 2N 和 4N 的循環(huán)，所以 FL2 通道的 Mode 參數(shù)應(yīng)設(shè)置為 Lin 模式，

5、同時閾值（Threshold）的 Primary Param 參數(shù)設(shè)置為 FL2-H，F(xiàn)our Color DDM Param 參數(shù)設(shè)置3圖 5. Acquisition 面板4、在圖 6 所示的操作面板中，勾選 Setup 選項(xiàng)，點(diǎn)擊 Acquire 按鈕進(jìn)行數(shù)據(jù)收集并調(diào)節(jié)FL2 通道的電壓值使得周期圖位于 FL2 直方圖中合適的位置。調(diào)好電壓后，將 Setup 選項(xiàng)勾掉，點(diǎn)擊 Acquire 按鈕收集數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)以.FCS 格式保存在